汲翔
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技创新杰出青年基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 食管鳞癌细胞KYSE-70的分化诱导对光动力学应答敏感性的抑制
- 2011年
- 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对低分化食管鳞癌细胞系KYSE-70的分化诱导作用及对光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的应答敏感程度.方法:以高分化食管鳞癌细胞KYSE-450和低分化食管鳞癌细胞KYSE-70为研究对象,用1μmol/LATRA为诱导剂,诱导KYSE-70细胞从低分化状态向高分化状态分化,通过细胞形态学、增殖实验来验证;细胞以1mmol/LALA处理,不同剂量的450nm蓝光照射,MTT法测定PDT对细胞的光毒毒性;流式细胞法测定PDT诱导的凋亡水平,Hoechst33342染色后观察凋亡细胞的胞核形态.结果:经ATRA处理后,诱导组与对照组相比,细胞变扁平、体积增大、胞质密度减低、核变大、核密度亦减低、细胞生长缓慢.高分化KYSE-450、分化诱导后的KYSE-70细胞和未诱导KYSE-70细胞用ALA处理后进行蓝光PDT,MTT结果显示高分化KYSE-450和分化诱导后KYSE-70的细胞存活率明显高于未诱导细胞,而高分化KYSE-450细胞敏感性略微低于分化诱导后的KYSE-70细胞.当光剂量为225mJ/cm2时,诱导前后细胞存活率分别为36.23%±7.43%和54.28%±3.64%,有极显著差异(P<0.001);分化诱导后的KYSE-70细胞凋亡率(18.1%)亦低于未诱导的细胞(33.3%).结论:经分化诱导后的食管鳞癌细胞PDT敏感性明显差于未诱导的食管鳞癌细胞,提示细胞分化诱导疗法不仅不能增强PDT效应,反而降低疗效;细胞分化诱导对PDT效果的影响部分通过抑制凋亡而实现.
- 孙蕾李懿石雨刘喜龙杨观瑞赵立群杨小静裘一兵张亚冰汲翔康巧珍汲振余
- 关键词：细胞分化光动力学疗法ALA
- pEZsiRNA6.1/hHif-1α稳定转染食管鳞癌EC-9706细胞系的建立
- 2012年
- 利用基因工程技术将合成的HIF-1αshRNA与pEZsiRNA6.1空载体连接,构建pEZsiR-NA6.1/hHif-1α载体,PCR和测序结果表明所构建的pEZsiRNA6.1/hHif-1α重组载体正确.进一步将所构建的载体转染人食管鳞癌EC-9706细胞系,利用G418筛选HIF-1α稳定干扰的细胞系,荧光显微镜检测结果表明:稳定转染pEZsiRNA6.1/hHif-1α的EC-9706细胞均有绿色荧光蛋白示踪.经CoCl2诱导模拟缺氧4h,Western Blot结果显示pEZsiRNA6.1/hHif-1α能有效抑制EC-9706缺氧食管癌细胞HIF-1α的诱导表达.
- 汲翔曹博金硕李军李懿范丹丹郭欢汲振余范天黎
- 关键词：HIF-1Α基因沉默光动力学疗法食管鳞癌
- 抑制HIF-1α表达的siRNA序列长效shRNA抑制载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体。方法:依据NCBI数据库获得HIF-1αmR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rationalsi RNA Design软件及Blast设计和优化siRNA序列;将siRNA序列转换成编码shRNA的DNA序列后克隆入pENTRTM/H1/TO载体,测序鉴定;将重组质粒pENTRTM/H1/TOHIF-1α转染食管上皮细胞Het-1A(实验组),并设阴性对照(转染阴性对照序列)、空白对照组和诱导对照组。实验、阴性对照和诱导对照组细胞经CoCl2化学诱导。Western blot法检测4组HIF-1α蛋白的表达。结果:以优化改造的含29核苷酸的干扰序列构建shRNA表达载体,经测序鉴定无误。4组细胞HIF-1α蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=66.863,P<0.001)。实验组Het-1A细胞HIF-1α蛋白表达较诱导对照和阴性对照组明显下降。结论:成功构建了HIF-1αshRNA表达载体。
- 郭欢孙蕾汲翔康巧珍程道博张聚真赵立群杨观瑞汲振余
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α小干扰RNA短发夹RNA
- 蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖被引量：1
- 2011年
- 目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究。方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫。引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖。定期观察记录种鼠的繁殖率、仔鼠出生率及成活率。比较基因敲除小鼠与野生型小鼠体质量变化。提取仔鼠尾组织基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定。结果:经隔离检疫,3对4.1R敲除小鼠符合我国SPF小鼠的微生物控制级别。23只繁殖仔鼠基因型PCR鉴定结果为基因敲除纯合子,雌鼠产仔率100%,平均胎产仔5.8只,仔鼠成活率74%。基因敲除小鼠平均体质量与野生型小鼠比较差异无统计学意义(F组间=4.035,P=0.056;F时间=543.723,P<0.001;F交互=4.358,P=0.004)。结论:在国内成功引种和繁殖C57BL/6J-4.1R-/-小鼠。
- 周晴晴闫红霞孙蕾刘喜龙李黎汲翔高艳锋汲振余祁元明康巧珍
- 关键词：基因敲除小鼠
