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产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析被引量：1: 2008年; 目的了解我院临床分离大肠埃希菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况。方法确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR-RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型。结果确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性。PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因。测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型。结论大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主。; 肖代雯杨永长喻华刘华黄文芳廖维金胡琦黄波; 关键词：超广谱Β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型

结核分枝杆菌蛋白标志物的筛选: 目的：研究分枝杆菌菌体蛋白表达，筛选特征性蛋白，研究结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌分泌蛋白表达，筛选差异蛋白。方法：1.培养分枝杆菌标准菌株，灭活菌株，观察比较灭活效果。2.提取分枝杆菌菌体蛋白，干化学法测蛋白...; 胡琦; 关键词：结核分枝杆菌蛋白标志物非结核分枝杆菌蛋白筛选; 文献传递

大肠埃希菌蛋白指纹图谱的建立被引量：5: 2008年; 目的建立大肠埃希菌（Escherichia coli，E．coli）蛋白指纹图谱，为Ecoli感染快速诊断奠定基础。方法收集临床分离E.coli88株，提取细菌DNA，PCR检测Ecoli 16S rRNA。蛋白提取液提取细菌蛋白，干化学法测蛋白浓度，应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS）检测Ecoli蛋白，采用Ciphergen Pro-teinchip软件自动采集数据。重复测定20次Ecoli混合标本，评价SELDI检测Ecoli蛋白分子量的重复性。结果E．coil标准菌株ATCC 25922和临床分离株均可检出16S rRNA。AU芯片能捕获近30个E．coli蛋白峰，其中19个蛋白峰构成E．coli特征性蛋白指纹图谱，各蛋白峰在临床分离E．coli间分子量变异系数≤0．2％。SELDI重复检测20次E．coli混合标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0．05％。结论E．coli在分子量3～20kD范围内具有特征性蛋白指纹图谱，为快速诊断E.coli感染提供了新思路。; 肖代雯杨永长喻华刘华黄文芳黄波胡琦廖维金; 关键词：大肠埃希菌表面增强激光解析电离飞行时间质谱

ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用被引量：2: 2008年; 目的:探讨辛伐他汀(simvastatin)作用于裸鼠体内K562细胞后Ras-MAPK信号转导通路胞外信号调节激酶(extra-cellular signal-regulated protein kinase,ERK)分子水平的变化,以说明ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用。方法:体外培养慢性髓细胞白血病(CML)细胞株K562细胞,构建BALB/c-nu/nu裸鼠的K562细胞移植瘤模型。流式细胞术(FCM)检测对照组和两个辛伐他汀处理组的K562细胞周期变化,TUNEL法检测K562细胞晚期凋亡情况。采用RT-PCR检测K562细胞中Ras-MAPK信号通路N-Ras、ERK1 mRNA的差异表达。免疫组织化学标记葡聚糖聚合物(labbled dextran polymer,LDP)法检测P-ERK蛋白水平变化。结果:辛伐他汀能够明显抑制裸鼠K562移植瘤组织的增长,随着辛伐他汀剂量的增加,K562细胞移植瘤体积和质量明显减小(P<0.05,P<0.01)。每次注射0.05mg的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的G0/G1期停滞,不同剂量的辛伐他汀能够诱导K562细胞发生明显的凋亡,并随剂量的增加,凋亡率逐渐增高(P<0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起N-Ras、ERK1 mRNA的表达下调(P<0.01)。与对照组相比,两个处理组的p-ERK蛋白分别出现表达下调(P=0.01,P<0.01)。结论:辛伐他汀在体内可能依赖Ras-MAPK信号转导通路ERK基因和蛋白水平的表达下调诱导K562细胞凋亡发生。; 周定安黄文方刘华杨永长黄波胡琦; 关键词：辛伐他汀 ERK 细胞凋亡

应用SELDI-TOF-MS技术诊断2型糖尿病肾病被引量：3: 2009年; 目的比较2型糖尿病（T2DM）肾病和对照人群血清蛋白质指纹图谱的差异，建立T2DM肾病诊断模型，探讨此技术对该病诊断的价值。方法采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测51例T2DM肾病患者和66例对照人群血清，获得蛋白质指纹图谱。结合人工神经网络软件建立诊断模型并进行验证。结果在相对分子量2000-30000范围内共检测到175个蛋白峰，其中有17个蛋白峰明显表达差异（P〈0．01）。筛选其中质荷比（m／z）分别为5420、5782、6472、6666、10277和11770的6个蛋白峰作为标志蛋白建立人工神经网络诊断模型。利用该模型对T2DM肾病进行盲法预测，结果表明其对该病的诊断敏感性和特异性分别为81．0％和96．2％。结论利用SELDI-TOF-MS和生物信息学技术建立了敏感性和特异性均较高的T2DM肾病诊断模型，为该病诊断提供了新途径。; 黄波黄文方刘华杨永长肖代雯姜伟胡琦冯文莉; 关键词：蛋白质指纹图谱糖尿病肾病

分枝杆菌特征性蛋白的筛选被引量：3: 2008年; 目的研究分枝杆菌蛋白表达,筛选分枝杆菌特征性蛋白,为分枝杆菌的快速鉴定奠定基础。方法选取分枝杆菌标准菌株,提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测分枝杆菌蛋白表达,和非分枝杆菌蛋白指纹图谱比较,筛选分枝杆菌特征性蛋白。重复测定20次分枝杆菌蛋白标本,评价SELDI检测分枝杆菌蛋白分子量的重复性。结果耻垢分枝杆菌ATCC 14468有约20个蛋白峰,结核分枝杆菌ATCC 25177、土地分枝杆菌ATCC 15755、胞内分枝杆菌ATCC 13950、耻垢分枝杆菌ATCC 607有近40个蛋白峰。与非分枝杆菌蛋白指纹图谱相比,4个蛋白峰为分枝杆菌所特有。SELDI重复检测20次分枝杆菌蛋白标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0.05%。结论分枝杆菌有其特征性蛋白峰,可能有助于分枝杆菌的快速鉴定。; 胡琦杨永长黄文芳刘华喻华肖代雯黄波冯文莉; 关键词：分枝杆菌表面增强激光解吸电离飞行时间质谱

尿蛋白标志物模型早期诊断糖尿病肾病的临床应用被引量：14: 2009年; 目的寻找基于蛋白质组学技术早期、快速诊断糖尿病肾病的尿蛋白标志物模型，并探讨其临床应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS）技术及Au芯片（proteinchipgoldarray）检测292例患者尿蛋白质谱，包括129例糖尿病肾病和163例对照者（61例糖尿病及102名健康体检者）。获得的蛋白质谱数据用Biomaker Wizard3．1软件筛选差异蛋白，通过生物标志模型软件（biomarker patterns software，BPS）建立决策树辨别分析模型，评价其临床诊断价值。对部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据，根据分子量大小进行初步鉴定。结果糖尿病肾病患者与对照者尿液中差异表达的蛋白质峰有40个，其丰度值两组间比较差异均有统计学意义（t值为-9．81～24．52，P均〈0．05），通过BPS自动筛选66916质荷比（m／z）蛋白建立的模型诊断糖尿病肾病敏感度为98．7％（78／79），特异度98．2％（111／113）。对糖尿病和糖尿病肾病患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰，其丰度值两组间比较差异均有统计学意义（t值为-6．95～14．45，P均〈0．05），BPS筛选4008、11619、66916m／z蛋白建立模型区分糖尿病与糖尿病肾病的敏感度（129／129）和特异度（61／61）均为100％。通过比对标准蛋白质谱数据，糖尿病肾病患者尿差异蛋白中m／z 11619、23529、66916和79378，可能为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于SELDI-TOF-MS及Au芯片技术检测尿蛋白质谱在鉴别蛋白尿来源、糖尿病肾病的早期快速诊断及肾脏损害评估具有重要应用价值。; 姜伟杨永长肖代雯黄波胡琦黄文芳; 关键词：糖尿病肾病光谱法基质辅助激光解吸电离 TAU蛋白质类蛋白质阵列分析

尿蛋白标志物模型诊断糖尿病肾病的初步研究被引量：5: 2009年; 目的探索基于Au蛋白芯片的尿蛋白标志物模型早期快速诊断糖尿病肾病(DN)的应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测86例DN患者、40例糖尿病(DM)患者及55名健康人(对照组)尿蛋白质谱。获得的谱图用Biomaker Wizard3.1软件筛选差异蛋白,通过BPS软件建立决策树辨别分析模型,评价其临床诊断价值。部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行鉴定。结果DN患者与对照组尿差异蛋白质峰有37个(P<0.05),BPS筛选66 916质荷比(m/z)蛋白建立的模型诊断DN敏感度100%,特异度97.78%。对DM和DN患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰(P<0.05),BPS筛选4 008、11 619、66 916 m/z蛋白建立的模型区分两者的灵敏度和特异度均为100%。比对标准蛋白质谱数据,DN患者尿中11 619、23529、66 916、79 378 m/z蛋白,可能分别为β_2-微球蛋白、α_1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。结论利用SELDI及Au芯片检测尿标志蛋白在鉴别蛋白尿来源、DN快速诊断及肾损害评估中具有重要应用价值。; 姜伟杨永长肖代雯黄波胡琦黄文芳; 关键词：糖尿病肾病蛋白标志物

结核杆菌蛋白质组学研究进展被引量：3: 2008年; 胡琦黄文芳冯文莉; 关键词：结核杆菌蛋白质组结核疫苗亚细胞蛋白质组

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型分析: 目的了解我院临床分离的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型分布情况。方法对2007年1月- 2007年10月我院临床分离的88株大肠埃希菌进行耐药分析,采用双纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶,PCR扩...; 肖代雯喻华传良敏杨永长刘华黄文芳廖维金胡琦; 文献传递

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胡琦

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