胡琦 作品数:11 被引量:37 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学检验医学院 更多>> 发文基金: 四川省自然科学基金 四川省卫生厅研究基金 四川省卫生厅科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析 被引量:1 2008年 目的了解我院临床分离大肠埃希菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况。方法确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR-RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型。结果确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性。PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因。测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型。结论大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主。 肖代雯 杨永长 喻华 刘华 黄文芳 廖维金 胡琦 黄波关键词:超广谱Β-内酰胺酶 大肠埃希菌 基因型 结核分枝杆菌蛋白标志物的筛选 目的:研究分枝杆菌菌体蛋白表达,筛选特征性蛋白,研究结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌分泌蛋白表达,筛选差异蛋白。
方法:1.培养分枝杆菌标准菌株,灭活菌株,观察比较灭活效果。2.提取分枝杆菌菌体蛋白,干化学法测蛋白... 胡琦关键词:结核分枝杆菌 蛋白标志物 非结核分枝杆菌 蛋白筛选 文献传递 大肠埃希菌蛋白指纹图谱的建立 被引量:5 2008年 目的建立大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)蛋白指纹图谱,为Ecoli感染快速诊断奠定基础。方法收集临床分离E.coli88株,提取细菌DNA,PCR检测Ecoli 16S rRNA。蛋白提取液提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测Ecoli蛋白,采用Ciphergen Pro-teinchip软件自动采集数据。重复测定20次Ecoli混合标本,评价SELDI检测Ecoli蛋白分子量的重复性。结果E.coil标准菌株ATCC 25922和临床分离株均可检出16S rRNA。AU芯片能捕获近30个E.coli蛋白峰,其中19个蛋白峰构成E.coli特征性蛋白指纹图谱,各蛋白峰在临床分离E.coli间分子量变异系数≤0.2%。SELDI重复检测20次E.coli混合标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0.05%。结论E.coli在分子量3~20kD范围内具有特征性蛋白指纹图谱,为快速诊断E.coli感染提供了新思路。 肖代雯 杨永长 喻华 刘华 黄文芳 黄波 胡琦 廖维金关键词:大肠埃希菌 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用 被引量:2 2008年 目的:探讨辛伐他汀(simvastatin)作用于裸鼠体内K562细胞后Ras-MAPK信号转导通路胞外信号调节激酶(extra-cellular signal-regulated protein kinase,ERK)分子水平的变化,以说明ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用。方法:体外培养慢性髓细胞白血病(CML)细胞株K562细胞,构建BALB/c-nu/nu裸鼠的K562细胞移植瘤模型。流式细胞术(FCM)检测对照组和两个辛伐他汀处理组的K562细胞周期变化,TUNEL法检测K562细胞晚期凋亡情况。采用RT-PCR检测K562细胞中Ras-MAPK信号通路N-Ras、ERK1 mRNA的差异表达。免疫组织化学标记葡聚糖聚合物(labbled dextran polymer,LDP)法检测P-ERK蛋白水平变化。结果:辛伐他汀能够明显抑制裸鼠K562移植瘤组织的增长,随着辛伐他汀剂量的增加,K562细胞移植瘤体积和质量明显减小(P<0.05,P<0.01)。每次注射0.05mg的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的G0/G1期停滞,不同剂量的辛伐他汀能够诱导K562细胞发生明显的凋亡,并随剂量的增加,凋亡率逐渐增高(P<0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起N-Ras、ERK1 mRNA的表达下调(P<0.01)。与对照组相比,两个处理组的p-ERK蛋白分别出现表达下调(P=0.01,P<0.01)。结论:辛伐他汀在体内可能依赖Ras-MAPK信号转导通路ERK基因和蛋白水平的表达下调诱导K562细胞凋亡发生。 周定安 黄文方 刘华 杨永长 黄波 胡琦关键词:辛伐他汀 ERK 细胞凋亡 应用SELDI-TOF-MS技术诊断2型糖尿病肾病 被引量:3 2009年 目的比较2型糖尿病(T2DM)肾病和对照人群血清蛋白质指纹图谱的差异,建立T2DM肾病诊断模型,探讨此技术对该病诊断的价值。方法采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测51例T2DM肾病患者和66例对照人群血清,获得蛋白质指纹图谱。结合人工神经网络软件建立诊断模型并进行验证。结果在相对分子量2000-30000范围内共检测到175个蛋白峰,其中有17个蛋白峰明显表达差异(P〈0.01)。筛选其中质荷比(m/z)分别为5420、5782、6472、6666、10277和11770的6个蛋白峰作为标志蛋白建立人工神经网络诊断模型。利用该模型对T2DM肾病进行盲法预测,结果表明其对该病的诊断敏感性和特异性分别为81.0%和96.2%。结论利用SELDI-TOF-MS和生物信息学技术建立了敏感性和特异性均较高的T2DM肾病诊断模型,为该病诊断提供了新途径。 黄波 黄文方 刘华 杨永长 肖代雯 姜伟 胡琦 冯文莉关键词:蛋白质指纹图谱 糖尿病肾病 分枝杆菌特征性蛋白的筛选 被引量:3 2008年 目的研究分枝杆菌蛋白表达,筛选分枝杆菌特征性蛋白,为分枝杆菌的快速鉴定奠定基础。方法选取分枝杆菌标准菌株,提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测分枝杆菌蛋白表达,和非分枝杆菌蛋白指纹图谱比较,筛选分枝杆菌特征性蛋白。重复测定20次分枝杆菌蛋白标本,评价SELDI检测分枝杆菌蛋白分子量的重复性。结果耻垢分枝杆菌ATCC 14468有约20个蛋白峰,结核分枝杆菌ATCC 25177、土地分枝杆菌ATCC 15755、胞内分枝杆菌ATCC 13950、耻垢分枝杆菌ATCC 607有近40个蛋白峰。与非分枝杆菌蛋白指纹图谱相比,4个蛋白峰为分枝杆菌所特有。SELDI重复检测20次分枝杆菌蛋白标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0.05%。结论分枝杆菌有其特征性蛋白峰,可能有助于分枝杆菌的快速鉴定。 胡琦 杨永长 黄文芳 刘华 喻华 肖代雯 黄波 冯文莉关键词:分枝杆菌 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱 尿蛋白标志物模型早期诊断糖尿病肾病的临床应用 被引量:14 2009年 目的寻找基于蛋白质组学技术早期、快速诊断糖尿病肾病的尿蛋白标志物模型,并探讨其临床应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片(proteinchipgoldarray)检测292例患者尿蛋白质谱,包括129例糖尿病肾病和163例对照者(61例糖尿病及102名健康体检者)。获得的蛋白质谱数据用Biomaker Wizard3.1软件筛选差异蛋白,通过生物标志模型软件(biomarker patterns software,BPS)建立决策树辨别分析模型,评价其临床诊断价值。对部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据,根据分子量大小进行初步鉴定。结果糖尿病肾病患者与对照者尿液中差异表达的蛋白质峰有40个,其丰度值两组间比较差异均有统计学意义(t值为-9.81~24.52,P均〈0.05),通过BPS自动筛选66916质荷比(m/z)蛋白建立的模型诊断糖尿病肾病敏感度为98.7%(78/79),特异度98.2%(111/113)。对糖尿病和糖尿病肾病患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰,其丰度值两组间比较差异均有统计学意义(t值为-6.95~14.45,P均〈0.05),BPS筛选4008、11619、66916m/z蛋白建立模型区分糖尿病与糖尿病肾病的敏感度(129/129)和特异度(61/61)均为100%。通过比对标准蛋白质谱数据,糖尿病肾病患者尿差异蛋白中m/z 11619、23529、66916和79378,可能为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于SELDI-TOF-MS及Au芯片技术检测尿蛋白质谱在鉴别蛋白尿来源、糖尿病肾病的早期快速诊断及肾脏损害评估具有重要应用价值。 姜伟 杨永长 肖代雯 黄波 胡琦 黄文芳关键词:糖尿病肾病 光谱法 基质辅助激光解吸电离 TAU蛋白质类 蛋白质阵列分析 尿蛋白标志物模型诊断糖尿病肾病的初步研究 被引量:5 2009年 目的探索基于Au蛋白芯片的尿蛋白标志物模型早期快速诊断糖尿病肾病(DN)的应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测86例DN患者、40例糖尿病(DM)患者及55名健康人(对照组)尿蛋白质谱。获得的谱图用Biomaker Wizard3.1软件筛选差异蛋白,通过BPS软件建立决策树辨别分析模型,评价其临床诊断价值。部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行鉴定。结果DN患者与对照组尿差异蛋白质峰有37个(P<0.05),BPS筛选66 916质荷比(m/z)蛋白建立的模型诊断DN敏感度100%,特异度97.78%。对DM和DN患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰(P<0.05),BPS筛选4 008、11 619、66 916 m/z蛋白建立的模型区分两者的灵敏度和特异度均为100%。比对标准蛋白质谱数据,DN患者尿中11 619、23529、66 916、79 378 m/z蛋白,可能分别为β_2-微球蛋白、α_1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。结论利用SELDI及Au芯片检测尿标志蛋白在鉴别蛋白尿来源、DN快速诊断及肾损害评估中具有重要应用价值。 姜伟 杨永长 肖代雯 黄波 胡琦 黄文芳关键词:糖尿病肾病 蛋白标志物 结核杆菌蛋白质组学研究进展 被引量:3 2008年 胡琦 黄文芳 冯文莉关键词:结核杆菌 蛋白质组 结核疫苗 亚细胞蛋白质组 产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型分析 目的了解我院临床分离的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型分布情况。方法对2007年1月- 2007年10月我院临床分离的88株大肠埃希菌进行耐药分析,采用双纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶,PCR扩... 肖代雯 喻华 传良敏 杨永长 刘华 黄文芳 廖维金 胡琦文献传递