目的 建立h5n1禽流感假病毒的体外中和试验技术平台,并系统评价2份h5n1人禽流感患者恢复期血清的中和效价.方法 通过磷酸钙沉淀法将转移载体phr-luc、包装载体pcmv△8.2和包膜载体cmv/r-sz(或cmv/r-th)共转染人胚肾细胞(293t),72 h后收集假病毒上清液,免疫印迹(western blot)鉴定假病毒颗粒ha、p24蛋白的表达,并取200μl假病毒上清液测定感染活性.收集制备假病毒过程中整合ha蛋白的293t细胞,通过流式细胞术测定2份恢复期血清中的ha抗体.利用2份恢复期血清分别与深圳株和泰国株假病毒进行中和试验,通过计算ic5o判断不同血清对2株假病毒中和效价的差异.结果 构建的2株假病毒颗粒不仅含有hiv基质蛋白p24,还可以整合ha蛋白,并且能够由前体蛋白ha0裂解为具有生物活性的ha1和ha2.200μl假病毒上清液感染靶细胞后rla值约为2×104,具有较高的感染效价.facs检测结果显示2份血清中均含有ha抗体,而且对不同分枝的假病毒具有交叉反应性.中和试验表明2份血清对深圳株和泰国株假病毒均具有中和能力,而且对不同分枝的假病毒具有交叉中和活性,但对深圳株的中和效价均高于泰国株.结论 本研究成功构建具有感染活性的深圳株和泰国株h5n1禽流感假病毒,并可以快速、安全、高效的评价血清的中和效价,具有广阔的应用前景.
abstract：
objective to establish neutralization assay based on h5n1 avian influenza pseudotyped virus in vitro and to evaluate neutralizing titer of convalescent serum from 2 patients with h5n1 avian influenza.methods phr-luc,pcmv△8.2 and cmv/r-sh or cmv/r-th were cotransfected into 293t cell by co-precipitation with calcium phosphate.pseudotyped virus supernatant was harvested 72 h posttranofection and identified the expression of ha and p24 by western blot,and then we analyzed infective activity of 200 μl supernatant of pseudotyped virus.293t cell integrated ha was prepared and anti-ha a
