韩顺子
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
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- 抗卵巢癌相关抗原CA125单抗及其磁酶诊断试剂的制备
- 2014年
- 目的制备卵巢癌相关抗原CA125（cancer antigen 125）磁酶检测试剂,并进行验证及初步应用。方法应用CA125抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,筛选效价高、稳定性分泌抗体的杂交瘤细胞株后,接种小鼠腹腔,收集腹水,制备抗CA125单抗,并对其亚型、特异性、相对亲和力、抗原结合位点及抗原决定簇进行鉴定。通优化反应条件制备CA125抗原磁酶检测试剂,并进行验证后,将其应用于50份女性健康体检者及100份卵巢癌患者血清的检测。结果共获得3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4B6、2G10、1C2;1C2、4B6和2G10单抗的抗体亚型分别为Ig G2a、Ig G1和Ig G1,轻链均为κ链,相对亲和力依次为2G10〉4B6〉1C2,与AFP、CA50、CEA、CA199、CRP、CA242和小牛血清未发生交叉反应,1C2单抗识别位点与2G10和4B6不同,且3株单抗的抗原决定簇均在CA125蛋白部分上。确定该磁酶检测的反应条件为：包被抗体按100μg/ml,37℃包被1 h;20%小牛血清37℃封闭1 h或4℃封闭过夜;酶标抗体最佳反应时间为45 min。当CA125浓度在10~500 U/ml时,与对应的A450值线性关系良好,R2=0.992;该检测试剂最低检测极限约10 U/ml,灵敏度高;与人血清白蛋白、小牛血清、CA50、CEA、AFP、CRP、CA199和CA242均未发生反应,特异性高;于37℃放置4 d的CA125 A450值与2~8℃相比,差异无统计学意义（P〈0.05）;批内及批间变异系数均〈10%,重复性较好;高、中、低3个浓度的CA125抗原的回收率在94.45%~105.21%之间,准确性高。50份健康体检者血清中CA125阳性率为4%,100份卵巢癌患者血清中CA125阳性率为88%。结论已成功制备了卵巢癌相关抗原CA125磁酶检测试剂,该试剂具有应用于卵巢癌患者的诊断价值。
- 李雨桐王甲男韩顺子于爱东吴业红张秀霞
- 关键词：CA125抗原单克隆抗体磁珠
- HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果被引量：1
- 2008年
- 目的构建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)与GM-CSF基因的双表达载体,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点处,构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中,检测瞬时表达情况,并用双表达质粒pHIG免疫BALB/c小鼠,检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达,pHIG双表达质粒组比pVAX/HBs组抗体产生时间提前2周,抗体阳转率提高2倍,小鼠脾脏T细胞表面CD4+分子数量及CD4+/CD8+值均高于pVAX/HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答,并可提高免疫效果。
- 冷梅闫刚迟春萍韩顺子吴晓娟赵大鹏汪春义郑全莉李鑫李雨桐张秀霞姜崴
- 关键词：乙型肝炎表面抗原DNA疫苗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子内部核糖体进入位点
- HEV ORF2截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性
- 2020年
- 目的原核表达3型戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)第2个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)截短融合蛋白(HEV3-179-Fe),并检测其免疫原性。方法分别扩增HEV3-179和Fe蛋白基因片段,经Overlap PCR法连接并扩增,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-HEV179-Fe,将其转化感受态E.coli BL21(DE3),取阳性菌株,IPTG诱导表达融合蛋白HEV3-179-Fe,进行10%SDS-PAGE分析。目的蛋白经镍离子金属鳌合亲和层析纯化后,加入硫酸铵进行病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)重构,置电镜下观察。HEV3-179-Fe蛋白VLPs与氢氧化铝佐剂吸附后免疫小鼠,ELISA法测定效价,以评价HEV ORF2截短融合蛋白的免疫原性。结果重组表达质粒pET-28a-HEV3-179-Fe构建正确。目的蛋白HEV3-179-Fe相对分子质量约40000,主要以包涵体形式存在,表达量均达35%以上,纯度约95%,可与鼠抗HEV 3多抗发生特异性反应。硫酸铵重构后于电镜下可见直径约20 nm的VLPs,其免疫小鼠的血清效价达1∶4800000以上。结论原核表达了HEV3-179-Fe,且在小鼠体内具有较好的免疫原性。本实验为以HEV ORF2-179蛋白为基础的VLPs基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 周永飞乔宏雷赵丹莹唐剑光常东英韩顺子常军亮张健刘玉林曹玉锋
- 关键词：戊型肝炎病毒基因重组原核表达免疫原性
- 脂质体对HBV DNA疫苗免疫效果的影响
- 目的：将脂质体作为乙肝病毒DNA疫苗的载体和佐剂，对其免疫效果进行观察。
方法：将乙肝病毒DNA疫苗pVAX/HBS用脂质体梭华-SoftastnTM包裹后肌肉注射BALB/c小鼠的后侧肢，定期对小鼠眼眶静脉丛...
- 吴晓娟赵大鹏张岩李雨桐于爱东张秀霞韩顺子时成波
- 关键词：脂质体DNA疫苗免疫效果乙肝病毒
- 文献传递
- 乙肝病毒DNA疫苗双表达载体的构建及其诱导小鼠的免疫应答
- 目的:构建乙肝表面抗原基因(HBsAg)与细胞因子GM-CSF基因的双表达载体,利用GM-CSF的免疫佐剂作用,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果.
方法:将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒p...
- 冷梅吴晓鹃赵大鹏韩顺子汪春义
- 关键词：乙肝病毒DNA疫苗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子免疫佐剂免疫应答
- 文献传递
- 重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体的稳定性分析被引量：1
- 2016年
- 目的分析重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体在不同条件下的稳定性,为该抗原的纯化工艺及原液储存条件提供参考。方法将重组戊型肝炎疫苗原液置不同温度、不同p H、高盐浓度、高盐低p H条件下及低温长期储存后,通过透射电镜观察P179抗原蛋白颗粒状态,SDS-PAGE分析二聚体含量。结果 HEV抗原在不同温度、不同p H、高盐浓度、高盐低p H条件下,及低温储存不同时间,P179抗原蛋白颗粒维持在20 nm左右,二聚体含量不低于80%;P179抗原低温储存24个月,其蛋白颗粒及二聚体含量均未发生明显改变。结论重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体稳定性较好。
- 李铮贾媛迟祥宋昊唐剑光徐军陈子杨张健锋孟多佳韩顺子于爱东迟春萍时成波刘照惠
- 关键词：重组戊型肝炎疫苗二聚体稳定性
- 脂质体对HBV DNA疫苗免疫效果的影响
- 目的：将脂质体作为乙肝病毒DNA疫苗的载体和佐剂，对其免疫效果进行观察。
方法：将乙肝病毒DNA疫苗pVAX/HBS用脂质体梭华-SoftastTM包裹后肌肉注射BALB/c小鼠的后侧肢，定期对小鼠眼眶静脉丛采...
- 吴晓娟赵大鹏张岩李雨桐于爱东张秀霞韩顺子时成波
- 关键词：乙肝病毒DNA疫苗疫苗佐剂免疫效果
- 文献传递
- 森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价被引量：2
- 2020年
- 目的原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E.coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确。表达产物相对分子质量约55000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3%,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6400。结论经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 邴振虹王兰菊周永飞常东英张健锋王伟韩顺子常军亮孙宏亮曹玉锋邹勇
- 关键词：森林脑炎病毒基因重组原核表达免疫原性
