颜奇
- 作品数：13 被引量：29H指数：3
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- 自噬在肾间质纤维化中的作用及分子机制被引量：6
- 2018年
- 肾间质纤维化是以间质细胞外基质沉积、肾小管萎缩和炎性细胞浸润等为主要病理改变的肾脏病变，是多种慢性肾脏疾病进展至终末期肾脏病的主要结局。目前临床尚缺乏有效减缓或逆转肾间质纤维化的治疗手段。
- 颜奇王惠明王惠明
- 关键词：肾间质纤维化分子机制细胞外基质沉积自噬炎性细胞浸润肾小管萎缩
- 支架蛋白JLP在诱导CD4+T细胞CD154表达中的作用探讨
- 目的 CD154 主要表达于CD4+T 细胞,在多种疾病中均观察到异常CD154 的表达,c-JunNH2-terminal kinase (JNK)-associated leucine zipper protein(...
- 颜奇王惠明杨倩刘以鹏潘阳彬郑世翔丁国华
- CD154分子表达转录调控的研究进展被引量：1
- 2015年
- CD154分子是肿瘤坏死因子（TNF）家族中的一个成员，它与其受体CD40结合后介导产生一系列免疫效应，在体液免疫及细胞免疫应答中发挥着重要作用。CD154分子表达水平与其介导炎症应答强度密切相关。同TNF家族成员一样，CD154分子的表达调控主要集中在转录水平，受诸多转录因子的直接调控。这些转录因子通过调控CD154表达水平，在CD154介导相关疾病中发挥重要作用。CD154分子异常表达及其诱导的炎症反应是包括自身免疫系统疾病、心血管疾病、糖尿病和肿瘤等多种疾病在内的重要发病机制之一。在转录层面对CD154分子表达进行调控将是临床治疗上述疾病的一个关键干预手段。
- 颜奇王惠明丁国华
- 关键词：CD154
- B7-1在血管紧张素Ⅱ诱导足细胞骨架重排中的作用及其机制探讨被引量：1
- 2017年
- 目的观察共刺激分子B7-1对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的小鼠足细胞骨架重排的影响，探讨B7-1在足细胞病变中的作用以及可能的分子机制。方法体外培养条件永生性小鼠足细胞（MPC），分组如下：正常对照组、AngⅡ刺激组、CTLA-4（B7-1封闭剂）干预组和CTLA-4干预＋AngⅡ刺激组。转染B7—1RNA干扰片段（siRNA）至分化成熟的足细胞，再予10^-6mmol／LAngⅡ刺激12h，观察沉默B7-1基因对AngⅡ刺激下足细胞骨架改变的影响。用流式细胞术检测足细胞B7-1表达；Western印迹法检测足细胞B7-1、nephrin、p-nephrin分子的表达；异硫氰酸荧光素（FITC）-鬼笔环肽荧光染色法观察足细胞骨架蛋白F—actin表达。结果流式细胞术和Western印迹结果显示，正常对照组足细胞B7—1无表达，AngⅡ刺激组足细胞B7．1表达明显增加，且随AngⅡ刺激浓度增加和时间延长B7—1表达增加（均P〈0．05）。与正常对照组比较，AngⅡ刺激组足细胞nephrin和p-nephrin表达量明显下调（均P〈0．05）。FITC-鬼笔环肽荧光染色结果显示，与AngⅡ刺激组比较，CTLA-4干预＋AngⅡ刺激组细胞骨架重排改善，F—actin重组评分（mCFS）明显降低（P〈0．05），提示封闭B7-1可改善AngⅡ对足细胞细胞骨架的破坏；与AngⅡ刺激组比较，转染B7-1 siRNA＋AngⅡ刺激组细胞骨架重排改善，F-actinmCFS亦明显降低（P〈0．05），提示转染B7-1siRNA亦可改善AngII对足细胞细胞骨架的破坏。结论B7．1参与足细胞骨架重排过程，在足细胞损伤中起重要作用。
- 杜爱民陈星华杨倩颜奇梁伟丁国华
- 关键词：足细胞细胞骨架
- 辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探索辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响。方法:(1)体外实验:采用不同剂量X线辐照HK-2细胞,并于辐照后24h和48h提取细胞蛋白及mRNA,Western印迹法检测JLP、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、转长生长因子(TGF)-β1蛋白的表达;RT-PCR检测JLP mRNA的表达;免疫荧光观察辐照后α-SMA的变化。(2)体内实验:将JLP野生型(jlp^(+/+))小鼠分为辐照组和非辐照组,辐照组小鼠采用6Gy X线照射,7d后处死小鼠。Western印迹法检测肾组织辐照后JLP、α-SMA、TGF-β1、胶原蛋白(COL)-Ⅰ蛋白的表达;PAS染色观察辐照后肾脏病理改变。结果:体外研究结果显示,辐照后JLP蛋白表达下调,α-SMA、TGF-β1蛋白表达上调;免疫荧光结果显示辐照后α-SMA的荧光表达增加。jlp+/+小鼠辐照后7d肾脏病理可见明显空泡变性,刷状缘紊乱,小管坏死,脱落,部分小管再生;Western印迹结果显示,辐照后α-SMA,TGF-β1,COL-Ⅰ表达增加。结论:辐照下调肾小管上皮细胞JLP的表达,同时上调TGF-β1的表达,进一步促进α-SMA、COL-Ⅰ表达上调,加重肾脏病理损害。
- 付豆丁国华王惠明颜奇陈朝威刘珊阳诚
- 关键词：肾小管
- 靶向IgA肾病Gd-B细胞HPV16 L1重组病毒样颗粒基因载体的构建与表达
- 2017年
- 目的:构建并表达靶向IgA肾病分泌糖基化缺陷IgA1分子B细胞(Gd-B)的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1重组蛋白病毒样颗粒(VLPs)基因载体。方法:PCR定点突变技术构建HPV16L1-PH嵌合基因片段并与pPIC9K载体连接获得重组表达质粒;将上述质粒通过电转化形式转入毕赤酵母GS115,并在甲醇诱导下表达HPV16L1-PH嵌合蛋白;对Ni柱纯化后获得的目的蛋白分别进行SDS-PAGE和LC-MS/MS鉴定;加入解组装及组装缓冲液对目的蛋白进行包装,透射电镜观察病毒样颗粒的结构及形态。结果:纯化后的重组蛋白经SDSPAGE和LC-MS/MS鉴定确定所检测胶点中的蛋白质为与目的蛋白预测值相同。透射电镜分析粒径分布和结构与预测值相同。病毒样颗粒在组装及解组装缓冲液作用下通过电镜可观察到发生组装及解组装。结论:本研究成功获得了靶向IgA肾病患者异常Gd-B细胞的嵌合HPV16L1-PH嵌合蛋白,为IgA肾病下一步实验研究与靶向性治疗奠定了基础。
- 陈朝威颜奇张勤付强王惠明丁国华
- 关键词：人乳头瘤病毒16型IGA肾病基因载体
- TLR4在脂多糖诱导肾小管上皮细胞MAPK信号通路中的作用及其机制被引量：6
- 2016年
- 目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用及其可能的分子机制。方法:雄性SD大鼠8只,随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),各4只。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒血症动物模型,Sham组除不行盲肠结扎穿孔外,其余处理同脓毒血症组,造模后24h处死大鼠取肾组织。体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),以1μg/ml LPS刺激不同时间(5,15,30,60min),采用免疫荧光、Western blot法检测大鼠肾组织及肾小管上皮细胞TLR4的表达及分布,Western blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(包含p38、JNK两条主要通路)及Iκ-B磷酸化情况。TLR4抑制剂TAK-242(5mol/L)及MAPK通路抑制剂SB202190(10μmol/L)、SP600125(25μmol/L)预处理NRK-52E后,分别检测TLR4蛋白表达、MAPK信号蛋白及I-κB磷酸化水平。结果:1免疫荧光结果显示TLR4主要表达在大鼠肾小管上皮细胞;正常肾小管上皮细胞TLR4主要分布于细胞质。2Western blot结果显示随LPS刺激时间的增加,肾小管上皮细胞TLR4表达显著升高(P<0.05)。3NRK-52E细胞在受到LPS刺激后其p38、JNK MAPK蛋白及I-κB蛋白磷酸化水平增加(P<0.05)。4TLR4抑制剂预处理NRK-52E细胞,可显著降低LPS诱导的p38、JNK MAPK信号通路活化及I-κB磷酸化水平(P<0.05)。5SB202190、SP600125分别预处理NRK-52E细胞,均可显著降低LPS诱导的I-κB磷酸化(P<0.05)。结论:TLR4通过p38、JNK MAPK信号通路介导LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应。
- 吴乙偲郑世翔陈星华颜奇杨红霞丁国华
- 关键词：肾小管上皮细胞炎症反应脂多糖MAPK信号通路
- 自噬在造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的 观察造影剂对肾小管上皮细胞自噬及凋亡的影响,探讨自噬在造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用.方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,以不同浓度（25、50、100、200 gI/L）造影剂碘普罗胺处理NRK-52E细胞1h或以50 gI/L碘普罗胺刺激NRK-52E细胞不同时间（0.5、1、3、6、12、24 h）,吖啶橙染色观察细胞内自噬体形成,Western印迹检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率.雷帕霉素（Rap,1μg/L）或3-甲基腺嘌呤（3-MA,2 mmol/L）与碘普罗胺（50 gI/L）共处理肾小管上皮细胞后,Western印迹法检测各组LC3及自噬相关蛋白Beclin-1的表达,绿色荧光蛋白标记的LC3（GFP-LC3）转染后荧光显微镜观察GFP-LC3的表达,Hoechst-33342染色观察细胞凋亡.结果 （1）随碘普罗胺刺激浓度增加肾小管上皮细胞自噬体表达先上升后下降.（2）随碘普罗胺刺激浓度及时间的增加肾小管上皮细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达先上升后下降（P＜0.05）.（3）碘普罗胺刺激后,肾小管上皮细胞的凋亡率呈浓度及时间依赖性增加（P＜0.05）.（4）Rap与碘普罗胺共处理肾小管上皮细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及GFP-LC3表达上调,细胞凋亡减少（P＜0.05）;3-MA与碘普罗胺共处理肾小管上皮细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及GFP-LC3表达下调,细胞凋亡增加（P＜0.05）.结论 造影剂可诱导肾小管上皮细胞凋亡和自噬,小剂量造影剂刺激下肾小管上皮细胞自噬和凋亡同时发生,但高峰早于凋亡.在刺激早期一定程度增强自噬可抑制细胞凋亡,反之抑制自噬后细胞凋亡增加.
- 简永红杨定平贾汝汉丁国华朱吉莉颜奇杨倩汪雄攀
- 关键词：自噬细胞凋亡造影剂肾小管上皮细胞
- 支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞转分化的影响被引量：3
- 2016年
- 目的 观察支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响,探讨p38 MAPK信号通路在其中的作用.方法 构建敲除jlp基因的细胞模型,细胞被分为阴性对照(Ctrl-shRNA)组、jlp基因敲除(jlp-shRNA)组、阴性对照+成纤维细胞生长因子(FGF-2)组和jlp基因敲除+成纤维细胞生长因子(jlp-shRNA+ FGF-2)组.Western印迹法检测各组细胞JLP、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达;免疫荧光法检测FGF-2诱导24 h后,α-SMA、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的表达.结果 与Ctrl-shRNA组比较,FGF-2组JLP蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+ FGF-2组TGF-β1、α-SMA、p38 MAPK蛋白表达量明显上调,E-cadherin蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+FGF-2组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的荧光表达明显上调.结论 支架蛋白JLP在促纤维化环境形成中可抑制HK-2细胞间充质转分化,其机制可能与JLP负调控p38 MAPK信号通路有关.
- 刘珊王惠明丁国华颜奇付豆阳诚陈朝威
- 关键词：细胞转分化P38丝裂原活化蛋白激酶类HK-2细胞
- CKD 3～5期患者外周血T淋巴细胞CD154表达能力的变化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨了CKD3—5期患者外周血T淋巴细胞CDl54表达能力的变化。方法以健康人外周血为对照组，以未接受血透析治疗的慢性肾脏病（CKD）3—5期（未透析组）及CKD5期维持性血液净化治疗的患者（透析组）外周血为实验组，检测各组受试者外周血T淋巴细胞表达频率、CD3＋CD8一T细胞CDl54的表达比例。结果与对照组相比，CKD3～5期未透析患者外周血淋巴细胞中T细胞所占频率下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；CKD5期透析组与对照组比较差异无统计学意义（对照组为72．05％±2．65％；未透析组为63．06％±3．37％；透析组为68．92％±3．22％）。离子霉素联合佛波酯刺激全血后，各组表达CDl54的CD3’CD8-T细胞占CD3’CD8-T细胞比例：未血液净化组（73．61％±1．91％）较对照组（79．78％±2．00％）及血液净化组（78．94％±2．47％）明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；提取PBMC后用离子霉素联合佛波酯刺激，各组间CD154表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CKD3～5患者存在CD3’CD8-T细胞CDl54表达能力下降，可能影响患者的免疫功能。
- 杨涛王惠明颜奇丁国华
- 关键词：CD8
