高志强
- 作品数：104 被引量：356H指数：8
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：质检公益性行业科研专项项目国家质检总局科技计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- H7亚型禽流感病毒核酸标准品制备及双探针荧光RT-PCR检测研究被引量：1
- 2014年
- 从禽流感病毒A/Chicken/1/2002(H7N1)核酸中扩增了完整HA的基因编码序列,克隆测序后,采用体外转录方法制备c RNA。用RNA保存液稀释至含量约108Copies/μL。分装后进行均匀性和稳定性检验,通过8家实验室联合定值,取平均值作为定值结果;经统计分析计算了该标准品的不确定度。此外,采用Taq Man方法,根据禽流感病毒H7亚型的血凝素基因的末端,采用1对引物和2条MGB探针,建立了禽流感病毒H7亚型Taq Man荧光RT-PCR快速检测技术。应用建立的方法对研制的标准品进行检测,检测限可达10基因拷贝;对新城疫病毒及其他亚型的流感病毒核酸进行检测,结果表明,建立的方法特异性良好,而且双探针的设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检。
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- 关键词：禽流感病毒H7亚型标准品荧光RT-PCR
- 戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR快速检测技术的建立和初步应用被引量：7
- 2008年
- 利用DNAMAN软件对GenBank登录的戊型肝炎病毒四个主要基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的ORF2区域设计合成引物和探针,并用包含有扩增区域的核苷酸片段进行体外转录制备标准品cRNA。在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上,建立了适用于戊型肝炎病毒主要基因型检测的荧光定量RT-PCR检测技术。该检测技术可以有效检测I型和IV型戊型肝炎阳性病料,而对猪的其它几种疫病阳性病料则为阴性结果,证实本技术的特异性强、可靠性好。对阳性标准品的检测结果表明,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达2.0×10^1拷贝/反应,相比于巢式RT-PCR方法,其灵敏度高10-100倍以上。在对54份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足戊型肝炎病毒早期快速诊断的需要。
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- 关键词：戊型肝炎病毒实时定量RT-PCR
- 伪狂犬病病毒核酸检测能力验证样品制备及其应用
- 2015年
- 能力验证样品的制备是实验室病原核酸检测能力验证的难点和核心内容,本研究以伪狂犬病病毒南阳株细胞培养物为材料,通过高温处理的方式灭活病毒,研制了伪狂犬病病毒核酸检测的能力验证样品,经均匀性和稳定性检验证实样品达到中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求。利用能力验证样品,设计和实施了"BIQTC-2013-01《猪伪狂犬病病毒核酸检测》能力验证计划",共有7家实验室参试,验证满意率达100%。伪狂犬病病毒核酸检测能力验证样品的研制和在能力验证计划中的应用,为评估我国各级实验室伪狂犬病病毒核酸检测的能力提供了较有价值的借鉴和参考。
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- 关键词：伪狂犬病病毒核酸检测
- 猪圆环病毒2型重组腺病毒核酸扩增检测标准样品的研制被引量：2
- 2015年
- 为研制用于猪圆环病毒2型（PCV-2）核酸扩增检测（NAT）质量控制的标准样品,本研究将猪圆环病毒2型QD/2014株ORF2连接到缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5 CMV K-NpA上,构建了重组穿梭质粒CMV-PCV-2-ORF2。将其与骨架质粒pacAd5 9.2-100线性化后共转染HEK293T细胞,经胞内重组获得了内含PCV-2-ORF2的重组腺病毒pacAd5 CMV-ORF2。采用PCR和基因测序方法对重组病毒鉴定后进行大量培养、分装和冻干,经均匀性和稳定性检验后对其进行了定值。结果表明,制备的标准样品均匀、稳定,PCV-2-ORF2基因含量为8.17×10^9 GEq/mL,在HEK293细胞上的TCID_（50）为3.56×10^7/0.05 mL。本标准样品的研制成功为核酸检测标准物质制备开辟了一条新途径。
- 高志强刘环林祥超张伟乔彩霞谷强蒲静张鹤晓
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2重组腺病毒
- 非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用被引量：10
- 2008年
- 采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a-VP7转化BL21(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-ELISA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0.25μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,待检血清阳性临界值初步定为0.25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。
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- 关键词：非洲马瘟基因拼接
- 核酸适体技术及其在兽药残留检测中的应用被引量：5
- 2015年
- 近年来,随着食品安全事件的频繁发生,兽药残留已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。传统的兽药残留检测方法主要包括气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法等,这些方法其具有检测灵敏度较高、稳定性较好等特点,但对样品洁净度的要求较高以及检测成本较高,使得这几种检测方法无法满足现场快检的要求。因此,人们有必要开发更为简单、快速、有效的兽药残留检测方法。
- 段烨高志强王慧珊张鹤晓李灏
- 关键词：兽药残留检测社会热点问题微孔板磺胺类药物靶分子
- 双重实时荧光PCR定量检测动物产品中牛源性成分被引量：4
- 2018年
- 旨在建立一种定量检测动物产品中牛源性成分含量的双重实时荧光PCR方法。以牛卫星IV DNA为检测靶基因,以肌肉生长抑制素基因作为内对照合成引物探针,采用基于TaqMan的双重实时荧光PCR技术对已知牛肉添加比例的冻干混合肉粉标准品进行检测并建立线性模型,并应用模拟样品和送检样品进行了验证检测。结果显示,该方法可检出牛源成分含量为0.1%的冻干肉粉,不与其他种动物组织发生交叉反应,重复性试验的相对标准偏差小于5%,方法的扩增效率为93.6%。该方法适用于肉品中牛源性成分的定量检测,可用于测定市场上动物产品中的牛源性成分含量。
- 高志强汪琳蒲静尹羿张伟赵相鹏姚震宇
- 禽流感病毒多重荧光RT-PCR检测技术的建立与初步应用
- 用6-carboxy-fluorescein(6-FAM)和5-tetrachloro-fluorescein(TET)荧光素标记的TaqMan双水解探针,建立了检测H5/H7和H5/NI2种多重荧光PCR技术,实现了一...
- 张鹤晓徐红杨汉春高志强谷强
- 关键词：禽流感病毒荧光素标记
- 国礼动物变化趋势及检疫监管被引量：1
- 2017年
- 为了解国礼动物发展现状,给优化检疫管理政策提供支持,本文梳理了自1949年以来我国接收国礼动物和作为国礼走出国门的年代、动物物种及赠送和受赠国家等情况,阐述了动物作为国礼的原因、变化趋势,分析了其在政治、运输饲养、疫病传播等方面存在的风险,提出了通过部门协作、通关运输、隔离检疫、饲养与治疗、防疫消毒、信息沟通、应急处置等措施,来提升对国礼动物监管水平的建议。
- 齐玮汪琳李迪赵相鹏任丛丛任彤张伟蒲静高志强尹羿
- 关键词：检疫监管疫病防控
- 生命探测技术在口岸动物搜检中的应用分析被引量：3
- 2017年
- 为了探索、发展现场高效的活动物搜检技术,对现有红外生命探测仪、音频生命探测仪、电磁波生命探测仪、二氧化碳探测仪、光学探测仪、雷达生命探测仪等6种生命检测技术进行综述比较,分析在国境口岸违禁动物搜检中应用生命检测技术的可能性。
- 王梓乐汪琳洪炜赵中权赵相鹏蒲静高志强张伟夏云成
