周珺
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 续断皂苷抗白血病作用的机制探讨被引量：6
- 2012年
- 目的探讨续断皂苷(akebia saponinD,ASD)抗白血病细胞及其作用机制。方法用不同剂量(10、30、50、100μg/mL)皂苷处理人急性白血病细胞株U937细胞和人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞,采用MTT比色法观察ASD对白血病细胞的作用。以Annexin-Ⅴ染色法检测细胞凋亡并以PCR法检测凋亡相关基因的表达。采用Westernblot法检测P53蛋白的变化。采用Griess分光光度法检测样品中一氧化氮(NO)的代谢产物亚硝酸盐的含量。结果与未处理组相比,50μg/mLASD能明显抑制U937细胞和HL-60细胞的生长并呈剂量依赖性,同时伴随bcl-2mRNA表达的明显下调。Western blot检测结果显示,P53蛋白的表达水平随ASD作用而升高。另外,ASD可以促使U937细胞和HL-60细胞中NO的含量显著提高(P<0.05)。结论 ASD对U937细胞和HL-60细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与bcl-2基因的下调,p53蛋白上调,以及促进白血病细胞内NO含量提高相关。
- 周鹏马亮周珺国风
- 关键词：白血病细胞凋亡P53一氧化氮
- 前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制
- 2012年
- 目的探讨核因子κB（NF—κB）家族成员（RelA、pSO、RelB和p52）调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Maspin）表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法，检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株，观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达，其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达，而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中，沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调，同时促进细胞死亡[死亡率为（13．3±4．2）％]。在PC．3细胞中，过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中，NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化，RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达，进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。
- 马亮沈雅颖周鹏周珺国风
- 关键词：核因子ΚB
- 过表达miR-17—92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞，并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和DU145-17-92细胞的生长能力，采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术（TUNEL）分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况，采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期，采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达。结果xCelligence系统监测显示，从接种24 h后，DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-control细胞（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为（56.57±1.68）%、（85.48±0.26）%和（90.85±2.08）%，DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为（73.64±0.68）%、（93.43±1.23）%和（97.36±0.86）%，两组仅在培养24 h时差异有统计学意义（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的细胞凋亡率分别为（6.76±0.09）%、（14.51±0.86）%和（20.73±1.64）%，DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为（1.86±0.15）%、（7.90±0.40）%和（4.92±0.48）%，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。Western blot检测显示，DU145-control和DU145-17-92细胞中，Bcl-2家族促凋亡蛋白（BIM）的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00, 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B（Akt）中丝氨酸473位点（p-Akt-473）的磷酸化，但对308位点（p-Akt-308）的磷酸化无明显影响。DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01，�
- 周鹏马亮周珺徐晶晶刘菲国风
- 关键词：细胞外调节蛋白激酶
- Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用
- 2015年
- 目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。
- 周珺周鹏秦华龙国风
- 关键词：非小细胞肺癌细胞迁移细胞侵袭
- Maspin在前列腺癌PC-3细胞生物学行为中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨maspin影响前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法:设计并合成靶向maspin基因的特异性shRNA,构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒并进行细胞转染。采用qRT-PCR和Western blot-ting法检测PC-3细胞转染重组质粒后maspin mRNA和蛋白质水平的变化以建立稳定转染maspin-shRNA的细胞系。采用qRT-PCR检测转染重组质粒对PC-3细胞中凋亡相关基因的影响。采用xCELLigence系统实时动态观察转染重组质粒前后细胞的生长并计算倍增时间,结合流式细胞术检测蛋白酶体抑制剂细胞毒性作用在细胞转染前后的变化。采用Western blotting法检测蛋白酶体抑制剂对核因子κB家族成员RelA和RelB表达的影响。结果:成功构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒pLL3.7-siMaspin。利用慢病毒表达系统转染并通过极限稀释法得到单克隆转染细胞PC-3-siMaspin。PC-3-siMaspin细胞的倍增时间为26.83 h,而PC-3-control细胞为37.95 h。PC-3-siMaspin细胞中bcl-2和A20 mRNA表达水平上调;而bax和bim的表达水平下调。蛋白酶体抑制剂MG-132作用PC-3-control和PC-3-siMaspin细胞8 h后细胞死亡率分别为27.1%±5.6%和7.5%±2.3%,24 h为24.2%±3.7%和8.2%±2.5%,36 h为28.7%±3.7%和7.6%±2.5%。PC-3-control细胞在MG-132作用下RelA的表达逐渐下调,而PC-3-siMaspin细胞中RelA的表达无明显变化。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3中maspin呈高表达。Maspin表达沉默显著缩短了前列腺癌细胞的倍增时间,加快了细胞的生长与增殖。Maspin表达沉默显著下调了PC-3细胞对MG-132的敏感性,并与RelA降解的缺失相关。
- 刘美琴周珺马亮国风
- 关键词：前列腺肿瘤MASPIN蛋白耐药性
- 慢性淋巴细胞性白血病骨髓基质细胞和正常骨髓基质细胞的比较性分析被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供理论依据。从CLL患者和正常供者骨髓中分离单个核细胞,进行原代骨髓基质细胞(hBMSC)培养;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CLL-hBMSC和N-hBMSC表面粘附分子如血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的mRNA水平;采用real-time PCR和Western blot法分别检测两类不同来源的hBMSC中淋巴毒素β受体(lymphotoxin beta receptor,LTβR)的mRNA和蛋白质表达水平;采用Western blot法检测NF-κB家族成员的表达并分析细胞因子LTα1β2对NF-κB家族成员表达的影响;建立hBMSC和CLL细胞共培养体系,利用碘化丙啶(PI)染色检测细胞死亡情况。结果表明:从CLL患者骨髓中能成功地培养出贴壁的成纤维样hBMSC。与N-hBMSC相似,表面粘附分子VCAM-1和ICAM-1在两类hBMSC中的mRNA表达一致;两类hBMSC中LTβR的mRNA和蛋白表达水平相似;各NF-κB家族成员在两类hBMSC中都有表达,且蛋白水平无显著性差异;细胞因子LTα1β2可诱导hBMSC中经典性和非经典性NF-κB信号通路的活化;体外实验表明,两类hBMSC都能够有效地支持CLL细胞的体外存活。结论:两类hBMSC培养效率以及细胞形态上无明显差异。LTβR-NF-κB信号分子在两类hBMSC的表达以及活化情况相似。
- 王欢周珺徐晶晶国风
- 关键词：CLL骨髓基质细胞
- miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性被引量：3
- 2017年
- 背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。
- 陈昊周鹏徐晶晶周珺国风
- 关键词：前列腺肿瘤迁移顺铂
- 非小细胞肺癌中c-Met、EGFR、K-Ras和EML4-ALK基因的检测分析被引量：14
- 2015年
- 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肝细胞生长因子受体(c-Met)基因扩增与临床病理特征的关系以及分析c-Met与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的相关性。方法采用荧光原位杂交技术(FISH)检测108例NSCLC患者的c-Met基因扩增情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EML4-ALK融合基因及c-Met基因表达量,聚合酶链扩增反应(PCR)及直接测序法检测EGFR和K-Ras基因突变情况,并分析c-Met基因与临床病理特征的关系及其与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的关系。结果 NSCLC中c-Met基因扩增率为1.85%,其在吸烟和非吸烟患者中扩增率分别为2.94%和1.35%;腺癌c-Met基因扩增率为1.23%,鳞癌未发现c-Met基因扩增;仅Ⅰ期和Ⅲ期中分别有1例c-Met基因扩增。NSCLC中EGFR、K-Ras基因突变及EML4-ALK融合基因的阳性率分别为42.59%、5.56%和12.04%。结论 FISH法对c-Met基因扩增检出率与qRT-PCR检测的c-Met基因表达水平基本一致;c-Met基因扩增与EGFR、K-Ras突变及EML4-ALK融合基因之间几乎是不共存的,c-Met扩增与NSCLC患者年龄、性别、吸烟状态、肿瘤组织类型及临床分期无关。
- 王杰衣素琴王欢周珺国风
- 关键词：非小细胞肺癌C-METEGFRK-RASEML4-ALK
- miR-17-92基因簇在胃癌组织中的表达和临床意义被引量：1
- 2021年
- 目的研究miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达情况和临床意义,并探讨过表达miR-17-92对胃癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织中的表达差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性。运用含过表达miR-17-92质粒的慢病毒上清感染MGC-803细胞,并用嘌呤霉素筛选出单克隆细胞,进一步扩增得到稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株。采用xCelligence系统实时动态监测MGC-803-miR-17-92胃癌细胞及其对照组细胞的生长情况及侵袭能力。运用Western blot法检测两组细胞中AKT、ERK1/2信号通路相关分子及Integrinβ1蛋白的表达。通过明胶酶谱实验检测两组细胞上清培养液中MMP-2和MMP-9的活性。结果miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达均较癌旁正常组织显著升高。miR-17-92基因簇各亚单位的表达水平均与胃癌患者的TNM分期呈正相关,其中miR-17、miR-20的表达水平与胃癌患者的肿瘤分化程度呈正相关,miR-19a、miR-19b、miR-92的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小呈正相关。成功构建了稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株。MGC-803-miR-17-92细胞的生长速度明显快于MGC-803-control细胞。两组细胞中总的AKT蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中AKT蛋白在苏氨酸308位点的磷酸化水平较MGC-803-control细胞显著升高,而其在丝氨酸473位点的磷酸化水平在两组细胞中差异无统计学意义。两组细胞中总的ERK1/2蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中磷酸化的ERK1/2蛋白表达显著高于对照组MGC-803-control细胞。MGC-803-miR-17-92细胞的侵袭能力显著强于MGC-803-control细胞。MGC-803-miR-17-92细胞中Integrinβ1的蛋白表达水平及MMP-2的活性显著高于MGC-803-control细胞。结论miR-17-92
- 刘菲徐晶晶周珺韩野
- 关键词：胃癌MGC-803
