孙永祥
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：河北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 对粉纹夜蛾高毒力cry9Ea基因的克隆及表达被引量：5
- 2010年
- 【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因,并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130kDa的蛋白,再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC50为0.044μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。
- 孙永祥刘廷辉郭巍王立光孙伟明
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达杀虫活性
- 苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及其杀虫活性被引量：3
- 2011年
- 克隆对鞘翅目害虫有毒力的B t新菌株GW S7的cry7Ab8基因,并对该基因进行表达和杀虫活性的研究。利用全长PCR方法克隆cry7Ab8基因,将cry7Ab8基因插入到表达载体pET28b,获得重组质粒pETcry7Ab8,转化E.coliBL21(DE3),诱导后表达130 kDa的蛋白。将cry7Ab8基因连接到大肠杆菌-苏云金杆菌的穿梭载体pSXY422b,获得重组穿梭质粒pScry7Ab8,电激转化到苏云金杆菌无晶体突变株HD73-(cry-),获得工程菌B ioHD7Ab8,表达蛋白后进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry7Ab8蛋白对马铃薯瓢虫二龄幼虫有较强的杀虫活性,LC50为548μg/mL。
- 冯静静郭巍刘廷辉孙永祥孙伟明徐大庆
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达杀虫活性
- 苏云金杆菌cry9Ea7基因的克隆与表达
- 本研究利用PCR-RFLP方法鉴定并证明苏云金杆菌Bt4菌株含有cry9基因,以Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA /R9EA进行PCR扩增,得到全长cry9E基因。将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆...
- 孙永祥
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达粉纹夜蛾杀虫活性
- 文献传递
