张丽君
- 作品数：9 被引量：49H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属中山医院肝癌研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究被引量：33
- 2005年
- 目的应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果鉴定出16个差异表达蛋白,包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27,应用western blot分析在蛋白水平上验证了2-DE结果,RT-PCR检测出两组间mRNA水平也存在差异,但不显著,免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论HCC转移与多种蛋白表达相关,其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用,可能为潜在的判断HCC 转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。
- 宋海燕刘银坤崔杰峰张丽君代智冯钜涛冯久贤申华莉杨芃原
- 关键词：肝癌组织癌转移蛋白质组学HCC热休克蛋白27
- 钙结合蛋白S100A6基因的研究进展被引量：4
- 2004年
- S10 0A6是EF 手型钙结合蛋白S10 0家族成员之一 ,参与多种生物学过程 ,与肿瘤的发生、浸润和转移关系密切 ,作为肿瘤鉴定的一种标记物 ,正日益受到重视。现对S10 0A6基因的结构、定位。
- 张丽君刘银坤朱运松
- 关键词：肿瘤S100钙结合蛋白基因标记物生物学
- 转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析被引量：3
- 2005年
- 目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。
- 崔杰峰刘银坤申华丽张丽君张予孙瑞霞陈洁代智宋海燕
- 关键词：S100A4人肝癌细胞系差异蛋白PCDNA3细胞培养上清液逆转录聚合酶链反应
- 高低转移潜能肝癌细胞系差异糖蛋白质组学研究
- 目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种由多因素引发的恶性肿瘤,其转移和复发是影响患者预后和生存期限的重大障碍.肝癌发生中细胞表面的糖链通常发生变化,而该变化与HCC的转移关系密切...
- 代智刘银坤冯巨涛宋海燕申华丽张丽君崔杰峰
- 文献传递
- 不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析
- 蛋白质的磷酸化是翻译后修饰的常见类型,能够敏感而可逆地调节蛋白质功能。其中蛋白质的酪氨酸磷酸化修饰在调控细胞增殖、分化、信号传导和代谢等生命过程以及某些疾病的发生发展中都起着非常重要的作用,在恶性肿瘤的转移和复发过程中通...
- 张丽君宋海燕申华莉冯巨涛代智刘银坤
- 文献传递
- 转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白Annexin1的功能解析被引量：5
- 2005年
- 解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白Annexin1的生物学功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用.分别以RT-PCR、蛋白质印迹及细胞免疫化学对差异蛋白Annexin1在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证,然后构建Annexin1反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过对MHCC97H细胞的运动、侵袭、凋亡、生长周期、MMPs分泌、克隆形成等系列检测,观察目的蛋白表达降低对其生物学行为的影响,特别是转移特性的影响.验证结果均证实Annexin1在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达.转染Annexin1反义重组表达质粒后,MHCC97H细胞中Annexin1的表达被成功抑制.依据MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASAnnexin1,MHCC97H/pcDNA3.1(+),MHCC97H的检测排序,转染反义重组质粒后的MHCC97H细胞穿过上室底膜的细胞数(运动实验)分别为:11.13±3.31,18.88±2.03,21.86±3.38;穿过人工基底膜细胞数(侵袭实验)分别是:16.43±2.23,16.40±1.57,16.86±1.52;细胞平均集落形成率(克隆形成实验)分别为:(14.33±0.46)%,(19.35±0.49)%,(20.25±0.35)%;MHCC97H细胞凋亡比例(FCM分析)依次为22.2%,6.44%,6.97%;细胞周期各时相的比例依次为:G0-G1期79.5%/76.34%/80.5%,S期13.26%/14.4%/9.69%,G2-M期7.25%/9.26%/9.81%;细胞培养上清MMP9的定量结果依次为:26.37!g/L,28.00"g/L,31.90#g/L;MMP2定量结果依次为29.46$g/L,26.37%g/L,26.53&g/L.明胶酶谱分析细胞培养上清显示,转染Annexin1反义重组表达质粒的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性与对照比变化不明显.综合上述结果发现,转染Annexin1反义表达质粒MHCC97H细胞运动能力及集落形成率明显降低,凋亡细胞的比例增加,而侵袭潜能,细胞周期时相,细胞分泌MMP2、MMP9的量均变化不明显.提示,差异蛋白Annexin1可能通过影响细胞凋亡和细胞运动在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.
- 崔杰峰刘银坤代智周海君宋海燕张丽君张予孙瑞霞陈洁汤钊猷
- 关键词：人肝癌细胞系
- 不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析被引量：2
- 2005年
- 目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。
- 张丽君崔杰峰刘银坤朱运松宋海燕申华莉冯巨涛代智陈洁孙瑞霞
- 关键词：人肝癌细胞系HEP3B蛋白质组分析肝癌转移2-DE
- 磷酸化蛋白质的检测技术进展被引量：3
- 2005年
- 蛋白质的可逆磷酸化修饰是生物体内普遍存在的信息转导调节方式,几乎参与生命活动的所有过程。现分析磷酸化蛋白质的各种方法及其进展,尤其是近年来蛋白质组学技术的发展与应用为磷酸化蛋白质的定性、定量和功能研究提供了必要的技术,使大规模和系统性进行磷酸化蛋白质的研究成为可能。
- 张丽君刘银坤朱运松
- 关键词：磷酸化蛋白质蛋白质组学质谱
- 肝细胞癌组织与癌旁组织分步提取蛋白的差异表达谱分析和鉴定
- 比较分析肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)与癌旁组织中蛋白表达谱的差异,筛选与肝细胞癌相关的关键蛋白分子。选取5对病理学诊断明确的HCC组织及其相应的癌旁组织样本,应用溶解性能不同的两种...
- 宋海燕张丽君刘银坤金红陆豪杰
- 文献传递
