朱洪伟
- 作品数：16 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 一种快速检测水貂阿留申病毒的引物、试剂盒及方法
- 本发明公开了一种快速检测水貂阿留申病毒(AMDV)的引物、试剂盒及方法，上游引物序列如SEQIDNO.1所示，下游引物序列如SEQIDNO.2所示，该试剂盒包括上述的上下游引物和SYBRGreen染料的PCRMaster...
- 赵家平徐超李光玉杜锐张秀丽宋兴超刘晗璐朱洪伟陈秀敏
- 文献传递
- 副流感病毒对不同宿主致病性研究进展被引量：1
- 2017年
- 副流感病毒(PIV)广泛地存在于自然界,其基因型较多,宿主范围广泛,不仅引起人的呼吸道疾病,而且使牛,羊,犬等动物感染发病,给畜牧业生产造成较大的经济损失。论文就副流感病毒的病毒学基础、致病机制、引起不同宿主动物特别是牛、羊、犬等的广泛感染流行情况进行综述,为副流感病毒致病机制的研究以及诊断和预防策略的提出提供理论依据。
- 何民辉李真光王凤雪朱洪伟张淑琴孙娜汪孟航温永俊武华
- 关键词：副流感病毒宿主动物致病机制
- 断奶仔猪圆环病毒2型与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断
- 2014年
- 仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）主要是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染6～8周龄仔猪所引起的一种以渐进性消瘦、黄疸、间质性肺炎及淋巴系统退化为主要症状的传染病[1-3].该病毒主要感染猪的免疫器官,造成免疫系统功能降低,该病发病症状与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）等病毒感染相似,且也易混合感染,此外,PMWS也常引起细菌继发混合感染,给养猪业造成了巨大的经济损失[2-5].
- 朱洪伟张贵山张艳秋徐佳萍章秀婷邢秀梅杨福合
- 关键词：猪断奶后多系统衰竭综合征猪圆环病毒2型多杀性巴氏杆菌免疫系统功能发病症状
- PRRSV-N蛋白单抗制备与直接免疫荧光方法建立被引量：1
- 2017年
- 为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-N蛋白,通过间接ELISA方法筛选到两株可以稳定分泌的N蛋白特异性单克隆抗体,命名为N-13、N-29。通过间接ELISA方法,WB与IFA方法对其进行鉴定,并测定其亲和常数。腹水效价分别为1:4 000与1:5 000,选择腹水效价高的N-13进行纯化标记,并对标记抗体的特异性、敏感性与保存期进行鉴定;通过DFA条件的摸索,建立了一种敏感的DFA诊断方法,并对其和PRRSV分离鉴定常用的CPE观察法进行比较。结果表明该DFA方法结果准确,可以作为实验室病毒分离鉴定和猪生产中该疾病诊断的有效手段。
- 何民辉李真光王凤雪宋妮朱洪伟刘杏温永俊武华
- 关键词：PRRSV单抗直接免疫荧光特异性细胞病变
- 狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展被引量：6
- 2016年
- 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。
- 汪孟航朱洪伟何民辉温永俊程世鹏
- 关键词：狂犬病糖蛋白中和抗体
- 牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2018年
- 旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法。应用鉴定RT-PCR检测方法可从BVDV阳性毒株中扩增出288bp的特异性片段;而分型RT-PCR检测方法可在同一体系中从BVDV1型和2型毒株中扩增出大小分别为316bp和110bp的特异性片段,但对猪瘟病毒、牛副流感3型病毒及牛传染性鼻气管炎病毒等均为阴性,最低可检测出的病毒量分别为1TCID50/mL和10TCID50/mL。临床试验证明,建立的鉴定及分型RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,具有很高的实用价值,为进一步开展流行病学调查、病毒分离等提供可靠的技术手段。
- 李新培朱洪伟朱洪伟关平原程世鹏程世鹏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒反转录-聚合酶链反应
- 肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立
- 2012年
- 试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。
- 杨春朱洪伟刘宗岳王桂武杨福合邢秀梅
- 关键词：CRE重组酶真核表达载体细胞转染
- 伪狂犬病毒作为毛皮动物疫病基因工程疫苗载体的探讨
- 朱洪伟温永俊王建科王凤雪张淑琴孙娜程世鹏
- 关键词：伪狂犬病毒重组病毒同源重组疫苗载体
- 高致病性PRRSV JL-04/12株核衣壳蛋白的表达与抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 为获得高浓度、高质量的有效原核表达蛋白作为ELISA诊断抗原,通过RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL-04/12株的核衣壳蛋白(N蛋白)基因并克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转入到大肠埃希菌BL-21感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过温度和IPTG浓度的优化,进行重组蛋白的高效表达,经SDS-PAGE和Western blot对表达产物的特性进行分析,利用GST柱纯化表达蛋白,并免疫小鼠,ELISA检测其刺激产生抗体的能力-抗原的免疫原性。结果表明,0.1mmol/L的IPTG、28℃诱导4h可高效诱导重组蛋白的表达,在表达上清中目的蛋白达40%,原核表达的重组N蛋白可诱导小鼠产生抗体,抗体效价为1∶256。原核表达的N蛋白与PRRSV具有相同的抗原性。
- 王凤雪刘莹杨勇朱洪伟孙娜刘杏程世鹏温永俊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白原核表达
- 3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 为建立猪细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中3种重要的猪细胞因子即猪白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、α-干扰素（interferonα,IFN-α）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）的基因序列,设计特异引物扩增目的基因。将3种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以3种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,当标准品稀释度为1×101~1×106拷贝/μL时,3种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均≥0.992。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）TJM-F92株免疫的30日龄猪外周血单核细胞（PBMC）中IL-12、IFN-α和TNF-α表达量进行检测,结果发现,免疫了PRRSV TJM-F92株的猪PBMC细胞内3种细胞因子表达量均极显著升高（P〈0.01）。研究结果为IL-12、IFN-α和TNF-α的定量分析提供了技术平台。
- 王凤雪黄双刘莹杨勇孙娜朱洪伟张淑琴程世鹏温永俊
- 关键词：细胞因子SYBR实时荧光定量RT-PCR
