李军锋
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 核基质MINT N端片段(365～1084aa)相互作用蛋白的筛选及鉴定
- 2004年
- 目的 :确定核蛋白MINT(Msx2 interactingnucleartargetProtein)的功能及作用机制 .方法 :利用酵母双杂交的方法 ,以MINTN端第 36 5～ 1 0 84位氨基酸 (MINT F2 )为诱饵用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9日的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 1 .0× 1 0 8个酵母克隆进行营养筛选和 β 半乳糖苷酶筛选 ,获得 1 2 8个阳性克隆 .并提取质粒进行酶切鉴定 ,将获得的 4个非重复克隆并进行序列分析 .结果 :筛选出 4个与MINT F2相互作用的蛋白 ,它们分别是 :6 7ku层黏连蛋白受体 ,,2个 1 6S核糖体RNA ,精氨酰 tRNA合成酶 .结论 :成功筛选出与MINT F2相互作用的蛋白 。
- 秦红孙强周鹏李军锋韩骅罗晓星
- 关键词：NOTCH信号途径
- BCR/ABL-OD结构域重组蛋白的表达和纯化
- 2005年
- 目的:制备BCR/ABL OD结构域-HIS的重组蛋 白.方法:用RT-PCR方法扩增BCR/ABL OD结构域的基因 片段,测序正确后将其克隆入原核表达载体pET16b中,并进 行酶切鉴定,鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达His- OD融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,镍 次氮基三乙酸 (Ni NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化,用SDS-PAGE对该融 合蛋白的表达产率及蛋白纯度进行了分析.结果:获得了 His-OD重组融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%. 结论:成功制备高纯度His-OD融合蛋白,为进一步研究OD 结构域的生物学功能奠定了基础.
- 叶盛开贾洪霞林媛周鹏杨曦张萍李军锋李军林董潇张兵华梁英民
- 关键词：重组蛋白质类
- hJagged1^(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建含人Jagged1胞外段 IgFc融合基因片段的质粒 ,并在真核细胞中表达。方法 :从人骨髓细胞中用RT PCR扩增hJagged1基因的胞外段。经DNA测序后 ,将hJagged1基因的胞外段插入改造过的质粒pBluescriptskⅡ中 ,获得hJagged1ext Fc融合基因。将融合基因插入真核表达载体pEF BOSneo ,构建真核表达载体pEF BOSneo hJagged1ext Fc。以其瞬时转染COS7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术 ,及夹心ELISA检测融合蛋白的表达。结果 :hJagged1基因的胞外段被有效地扩增。DNA序列分析表明 ,所构建的含hJagged1ext Fc融合基因的质粒与设计相同 ,hJagged1ext Fc融合蛋白得到正确表达。结论 :成功地构建了hJagged1ext Fc融合基因的真核表达载体 ,并在真核细胞中正确表达 ,为进一步研究Jagged1在造血干 /祖细胞的体外扩增奠定了基础。
- 贾洪霞张萍周鹏李军锋韩骅梁英民
- 关键词：NOTCHJAGGED1融合蛋白
- MINT蛋白(1-365氨基酸)相互作用分子的筛选被引量：1
- 2003年
- 目的 :用酵母双杂交技术筛选与MINT(Msx2 in teractingnucleartargetprotein) F1片段相互作用的分子 ,对MINT转录抑制的机制进行探讨 .方法 :以Mint F1片段 (1～ 36 5氨基酸残基 )连入载体pGBKT7构建的质粒为诱饵 ,利用酵母双杂交技术对人淋巴结cDNA文库进行筛选 ,并分析所获得的阳性克隆 .结果 :从 6× 1 0 7个克隆中共获得 1 2个不重复的阳性克隆 .经序列分析 ,得到 3个有意义的基因 ,分别为人小核RNA 蛋白复合体多肽G(SNRPG)、癌基因Vav和人微球蛋白 1 (MCRS1 ) .结论 :从筛选到的这 3个分子的定位与功能来看 ,MINT分子的N端片段可以与小核RNA 蛋白复合体 (snRNPs) ,Vav,MCRS1和RBP Jκ等相互作用 ,参与细胞内的信号传递 ,调控细胞周期 。
- 周鹏李军锋秦红韩骅
- 关键词：MINT酵母双杂交
- PTD-BCR/ABL-OD融合癌蛋白的表达和跨膜转运被引量：2
- 2005年
- 梁英民叶盛开贾洪霞林媛蒋姗姗吴绒丽周鹏杨曦张萍李军锋李军林韩骅
- 关键词：癌蛋白跨膜转运
- hJagged1ext-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达
- ＜正＞ 背景与目的造血干细胞是一群存在于造血组织,具有自我更新及定向分化潜能的造血细胞,目前,对于造血干细胞的增殖及分化的分子调节机制尚不完全清楚、Notch信号途径在生物进化中高度保守,
- 贾洪霞张萍周鹏李军锋韩骅梁英民
- 文献传递
- 核基质MINTC端片段(2226-2959)相互作用分子的筛选与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 :为了研究MINT的功能及其转录抑制的机制 ,筛选与MINT相互作用的蛋白 .方法 :以MINT第 2 2 2 6 2 95 9氨基酸 (F5 )为诱饵 ,用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9d的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 4 .5× 1 0 6个酵母克隆进行了营养筛选和α 半乳糖苷酶筛选 ,获得 5 1个阳性克隆 .从中提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 1 0个非重复克隆 ,对此 1 0个克隆进行序列分析 .结果 :筛选到的 3个基因分别为MINT ,α 晶状体蛋白结合蛋白 1 (AlphaA CRYBP1 )和核受体辅抑制因子 1 (N CoR1 ) .在酵母中分析了N CoR1与MINT的作用区段 ,N CoR1与MINT的 2 2 2 6 2 95 9和 2 96 0 35 76两个片段均有相互作用 .结论 :①MINT在细胞内可能形成二聚或多聚体 ;②除了RBP J和MSX2外 ,MINT还可能调节AlphaA CRYBP1的活性 ;③MINT可能通过N CoR1募集组蛋白去乙酰化酶 (HDAC)
- 李军锋周鹏秦红韩骅
- 关键词：MINT
- Bcr-Abl酪氨酸蛋白激酶域及其突变体的构建和表达被引量：1
- 2006年
- 目的:制备Bcr-Ab l激酶域及其突变体-H is的重组蛋白.方法:用PCR方法从含有Bcr-Ab l全长的质粒pGD210中扩增出Bcr-Ab l激酶域片段,再通过重组PCR技术获得激酶域的几个主要突变体(T315 I,Y253F,E255K,E255V),测序正确后将其克隆到原核表达载体pET-32 a中,构建表达激酶域片段和H is标签融合表达的载体,IPTG诱导表达,得到的融合蛋白用镍-次氮基三乙酸(N i-NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化.结果:成功得到了Bcr-Ab l激酶域及其突变体序列,经序列分析证实后将重组质粒转入BL-21进行表达.结论:通过重组PCR技术获得了野生型激酶域及其突变体蛋白.融合蛋白表达在包涵体,占菌体总蛋白的70%以上.经N i-NTA镍珠纯化后,纯度在95%以上.
- 王淑红梁英民邢佩霓刘海妮王耀春杨曦蒋珊珊李军林李军锋
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶聚合酶链反应蛋白纯化
- 抗nestin多克隆抗体的制备
- 2005年
- 目的: 在大肠杆菌中融合表达编码小鼠nestin肽链C段的cDNA序列,制备特异性多克隆抗体;方法: 采用RT PCR的方法获得编码小鼠nestin肽链C段的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET 32a,构建pET 32a nestin C表达载体.在大肠杆菌BL 21中IPTG诱导下表达6×Hisnestin C融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗鼠nes tin血清,以WesternBlotting和免疫组化方法分析其特异性.结果: 6×His nestin C融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,WesternBlotting和免疫组化结果显示制备的抗体具有较高的特异性.结论: 构建了pET 32a nestin C表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达.该多克隆抗体效价高、特异性好.
- 李军林韩骅兰莉杨曦李军锋王亚蓉祝仰庭
- 关键词：抗体制备
