李海鑫
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗KDR3单链抗体的筛选和生物学活性检测
- 李海鑫
- 关键词：血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体单链抗体血管生成
- 抗血管内皮生长因子受体2单链抗体的筛选及表达纯化被引量：4
- 2009年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子与血管内皮生长因子受体2的结合作用,采用噬菌体展示技术,从噬菌体抗体库中筛选得到血管内皮生长因子受体2的高亲和力抗体,再通过PCR分析,基因测序,序列比对等步骤挑选出高亲和力的抗体片段的基因序列AK404,转化至大肠杆菌HB2151中,大量发酵进行可溶性表达,将表达产物通过镍柱纯化,最后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升发酵液614μg。定量ELISA分析显示,AK404与受体的结合呈剂量依赖性,进一步研究开发可以用于抗血管生成抗肿瘤的治疗或肿瘤诊断。
- 李海鑫张娟钱永军陆文杰林旭升周雅琼王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2噬菌体展示单链抗体
- 抗KDR单链抗体阻断VEGF/KDR通路的活性研究被引量：1
- 2014年
- 为了阻断VEGF与KDR的结合,抑制VEGF结合KDR后介导的内皮细胞迁移和血管新生,实验室已经从全人源噬菌体展示抗体库中筛选得到几种抗KDR的单链抗体,从中挑选一种亲和力较高的抗体命名为AK506进行周质表达,纯化后经SDS-PAGE鉴定,可获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升发酵液1 mg。经表面等离子共振技术测定,AK506与KDR胞外区相互作用的平衡解离常数为7.99×10-9nmol/L。细胞ELISA分析显示,AK506与内皮细胞表面膜受体KDR的结合呈剂量依赖性。采用细胞划痕损伤修复实验和鸡胚尿囊膜实验证明,AK506可以显著抑制内源性VEGF诱导的血管内皮细胞迁移和新血管生成,具有进一步研究开发用于抗肿瘤血管生成治疗的潜力。
- 李海鑫陈治国陈晨金海珍张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2单链抗体
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究被引量：2
- 2011年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)3连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-LayerInterferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。
- 丁笠王秀云齐海迪李海鑫周雅琼陈耀祖张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
- 抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的构建及其在CHO细胞中的稳定表达被引量：4
- 2011年
- 目前报道的靶向VEGF/VEGFR基因工程抗体多为不含Fc片段的Fabs、cFv等小分子抗体,该文旨在CHO-k细胞中表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体。将抗VEGFR-2 scFv(AK404)基因与含有人IgG1恒定区的真核表达载体pcDNA3.1-Fc连接,重组质粒测序后经脂质体介导转染CHO-k细胞,G418加压筛选获取稳定表达细胞株。RT-PCR、western blot检测目的基因的转录、表达。测序结果表明重组质粒构建成功,RT-PCR及western blot显示目的基因成功整合到宿主基因组并表达。最终获得可稳定表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的重组CHO-k细胞株,为融合抗体的大量制备和活性研究打下基础。
- 杨艳丽张娟何远李海鑫李桉栋王旻
- 关键词：VEGFR-2抗肿瘤血管生成
- 全人源的抗人血管内皮生长因子受体2胞外区的单链抗体及其应用
- 本发明涉及基因工程抗体技术领域，特别涉及一种全人源抗人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)胞外区的单链抗体AK506的制备方法和用途。本发明公开了AK506的重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸序列，包括对应于...
- 王旻张娟李海鑫曹婉璐
- 文献传递
- 全人源抗血管内皮细胞生长因子受体2单链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及基因工程设计、表达的对人血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)具有特异性亲和力的全人源单链抗体。本发明还提供重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的核苷酸序列，以及包含重链可变区和轻...
- 王旻张娟李海鑫陈卫周雅琼
- 全人源抗人白介素21单链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及基因工程设计、表达的与人白介素21有特异性亲和力的全人源多肽类单链抗体。此工程抗体多肽是由一条柔性连接肽将抗体的轻链和重链可变区首尾相连而形成的，轻链和重链可变区的骨架与互补决定区均...
- 王旻张弢浦迪陈卫张娟李海鑫
- 文献传递
- 全人源抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体
- 本发明公开了与人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)特异性结合的全人源单链抗体。本发明的抗体由一条柔性连接肽将抗体的轻链和重链可变区首尾相连而形成。本发明抗体在体外测试可中和hTNF-α的活性，可以用于检测hTNF-α，也适...
- 王旻陈卫张娟李海鑫张弢
- 文献传递
- 全人源抗血管内皮细胞生长因子受体2单链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及基因工程设计、表达的对人血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)具有特异性亲和力的全人源单链抗体。本发明还提供重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的核苷酸序列，以及包含重链可变区和轻...
- 王旻张娟李海鑫陈卫周雅琼
- 文献传递
