杨帆
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生理学轻工技术与工程更多>>
- 金黄色葡萄球菌新型肠毒素基因构建与表达被引量：1
- 2012年
- 目的从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素。方法采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+-NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果。结果成功扩增到2个新型肠毒素P基因;带有质粒pET28a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1 mmol/L IPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度>95%;纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别>30%;抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2),200 ng/mL时抑瘤效果最佳,分别达到82%和86%。结论成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果。
- 杨帆王建华朱丽娜李辉回晶吕永通胡风庆
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素超抗原体外抑瘤
- δ-睡眠肽与GFP融合蛋白的表达和纯化
- 2012年
- 构建δ-睡眠肽(DSIP)蛋白与GFP的融合基因表达载体,高效表达和纯化GFP-DSIP融合蛋白。通过SOE-PCR拼接DSIP全长编码基因,并使得DSIP上游具有肠激酶识别位点,经双酶切定向克隆至表达载体pET-28a,构建重组载体pET-28a-DSIP,通过PCR扩增GFP全长编码基因,经双酶切定向克隆至pET-28a-DSIP,构建原核重组表达载体pET-28a-GFP-DSIP,通过双酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,采用镍亲和层析和分子筛凝胶层析获得高纯度蛋白,SDS-PAGE分析鉴定。经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pET-28a-GFP-DSIP,在IPTG诱导下获得可溶性的绿色荧光蛋白与睡眠肽的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化成功获得高纯度的融合蛋白。成功构建了DSIP与GFP融合基因的重组表达载体,确定了GFP-DSIP融合蛋白诱导表达的最佳条件,获得了较高纯度的融合蛋白,为进一步研究DSIP蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 崔小进杨帆戴有金李章富吕永通胡风庆
- 关键词：基因克隆融合蛋白原核表达
- 利用鹿胎下脚料制备复合氨基酸
- 2009年
- 目的:利用鹿胎下脚料为原料制备复合氨基酸.方法:采用微波辅助酸水解法处理鹿胎下脚料,利用Folin-酚法测定蛋白质含量,甲醛滴定法和凯氏定氮法测定氨基酸水解度,氨基酸自动分析仪测定氨基酸种类和各自含量.结果:在微波辅助处理30 min条件下,所得到复合氨基酸水解度最高,达8.27%.复合氨基酸中含有谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸等17种氨基酸.结论:利用微波辅助酸解法处理鹿胎下脚料可获得高质量复合氨基酸,生产成本低,具有一定的推广应用价值.
- 回晶边媛媛杨帆戴有金温惠理胡风庆
- 关键词：复合氨基酸
- 4,4′-偶氮二[4-氰基戊酰(对-二甲氨基)苯胺]/过氧化二苯甲酰引发苯乙烯聚合及其动力学研究(英文)
- 2008年
- 研究了以4,4′-偶氮二[4-氰基戊酰(对-二甲氨基)苯胺](ACPMA)/过氧化二苯甲酰(BPO)为氧化还原引发体系,苯乙烯(St)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的聚合及其动力学行为.考察了聚合反应温度、单体浓度、ACPMA浓度和BPO浓度对聚合反应速率和聚合物分子量的影响,测定了反应级数和聚合反应的活化能.结果表明,在一定范围内,聚合反应速率随单体浓度增大、ACPMA浓度增大、BPO浓度增大和反应温度的升高而增大;聚合物分子量随单体浓度的增大而增大,随ACPMA浓度的增大、BPO浓度增大和反应温度的升高而降低.该体系具有氧化还原引发体系的特征,其引发St的聚合速率方程为Rp=K[BPO]0.48[ACPMA]0.54[St]1.53,聚合反应的表观活化能Ea=39.6 kJ/mol.
- 吴秋华赵丽萍韩光喜杨帆张国林
- 关键词：苯乙烯聚合动力学
- 牛肠激酶轻链基因的构建与原核表达被引量：1
- 2012年
- 肠激酶作为一种丝氨酸蛋白酶,能够识别顺序-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,水解赖氨酸C端的肽键.根据NCBI中牛肠激酶基因序列(L19663)设计18条引物,通过重叠延伸拼接PCR技术(SOE-PCR)扩增两端带有酶切位点的牛肠激酶轻链基因.构建表达载体pET32a-EK,表达载体转化E.coli BL21(DE3),利用IPTG诱导表达嵌合蛋白,并用离子交换柱层析纯化肠激酶,获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础.
- 吕永通李文燕杨帆赵小慧胡风庆回晶
- 关键词：肠激酶纯化
- 槐糖脂表面特性和抗氧化活性的初步研究
- 2012年
- 对槐糖脂的表面特性和抗氧化活性进行了初步研究,采用最大气泡法测其最小表面张力,同时分析不同条件下表面张力的稳定性,通过表面张力浓度曲线求得其临界胶束浓度,利用超声乳化法分析槐糖脂的乳化活性表征表面特性。槐糖脂的体外抗氧化能力则通过DPPH自由基清除实验进行分析。结果表明:葡萄糖/油酸和豆油发酵的槐糖脂的最小表面张力分别为40、38mN/m,临界胶束浓度分别为60、70mg/L。槐糖脂在高温和高盐离子浓度下均表现出稳定的表面活性,在强酸、强碱条件下稳定性较差。乳化活性分析,两种槐糖脂中对于豆油、芝麻油和石蜡的乳化率大于80%。两种槐糖脂均具有体外抗氧化活性,以豆油为底物发酵的槐糖脂比以葡萄糖/油酸为底物发酵的槐糖脂具有更好的体外抗氧化活性。
- 杨帆赵小慧胡静孙辞刘栋胡风庆
- 关键词：临界胶束浓度抗氧化
