杨平勋
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人端粒逆转录酶与Snapin蛋白相互作用的鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:研究人端粒逆转录酶(hTERT)与Snapin蛋白的相互作用。方法:将hTERT基因和Snapin基因分别构建到pGBKT7和pGADT7载体中,用酵母双杂交方法在酵母中验证其相互作用;在293T细胞中,共转染带有Flag标签的hTERT及带有GFP标签的Snapin质粒,进行免疫共沉淀;将GST融合的Snapin纯化蛋白与hTERT进行GST-pull down,验证其相互作用。结果:3种方法都证明hTERT能够与Snapin相互作用。结论:Snapin蛋白能够与hTERT相互作用,为研究Snapin参与调控端粒酶的功能活动提供了一些线索。
- 杨平勋白云秀黄翠芬黄君健
- 关键词：蛋白相互作用
- 端粒及端粒酶的研究进展被引量：3
- 2007年
- 端粒是真核细胞染色体末端的特有结构,是由端粒结合蛋白和一段重复序列的端粒DNA组成的一个高度精密的复合体,在维持染色体末端稳定性,避免染色体被核酸酶降解等方面起着重要的作用。端粒的长度、结构及组织形式受多种端粒结合因子的调控。由于端粒的重要性,在哺乳动物细胞里,端粒的长度或端粒结构变化与癌症发生及细胞衰老有密切的关系。由于末端复制问题的存在,随着细胞分裂次数的增加,端粒不断缩短,细胞不可避免的走向衰老或凋亡。由于在细胞分裂过程中端粒长度的不断缩短与细胞分裂代数增加具有相关性,即端粒长度反应了细胞的分裂次数,因此有人将端粒形象的比喻为生物时钟。在90%的癌细胞中,端粒酶被重新激活,以此来维持端粒的长度,使细胞走向永生化。简要综述了端粒、端粒酶及端粒酶结合蛋白的最新研究进展。
- 杨平勋黄君健
- 关键词：端粒端粒酶端粒结合蛋白
- 利用酵母双杂交技术筛选与hPOT1相互作用的新蛋白
- 2011年
- 目的:利用酵母双杂交系统筛选与人POT1(human protection of telomeres 1,hPOT1)相互作用的蛋白。方法:以hPOT1的300～634氨基酸片段为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与hPOT1相互作用的蛋白质;运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对。结果:经过酵母双杂交筛选,发现7个与hPOT1相互作用的蛋白;选取NM23B与hPOT1通过GST-pull down和免疫共沉淀进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用。结论:hPOT1能与NM23B发生相互作用,在此实验基础上可以进一步研究NM23B与hPOT1相互作用的生物学意义。
- 杨平勋马航航金蕊白云秀黄翠芬黄君健
- 关键词：酵母双杂交GST免疫共沉淀
- 端粒蛋白TRF1与肌动蛋白结合蛋白PFN2相互作用的鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:鉴定端粒蛋白TRF1和肌动蛋白结合蛋白PFN2是否存在相互作用,并且两者的相互作用是否与端粒在细胞核周的锚定有关。方法:将TRF1构建到myc标签载体,PFN2构建到GST标签载体,采用GST-pull down技术,验证两者是否存在相互作用;同时将TRF1构建到EGFP标签的绿色荧光载体,PFN2构建到RED标签的红色荧光载体,两者共转入细胞,利用荧光显微镜观察两者在细胞中的共定位情况。结果:GST-pull down证明TRF1与PFN2存在直接相互作用,两者在细胞中可以共定位。结论:TRF1与PFN2存在相互作用,且这种相互作用发生在细胞核周。
- 马航航杨平勋黄翠芬黄君健
- 关键词：端粒端粒酶TRF1
- TERT在肿瘤细胞中保护染色体末端的功能机制研究
- 端粒是真核细胞染色体末端的天然结构,由TTAGGG端粒DNA重复序列和结合在端粒DNA序列上的shelterin端粒蛋白复合体组成。端粒保护染色体末端,是稳定基因组的重要结构。端粒酶复制延长端粒DNA,是维护端粒结构的重...
- 杨平勋
- 关键词：端粒端粒酶
- 文献传递
- PinX1基因在膀胱癌中的表达及临床意义
- 2007年
- 目的分析内源性端粒酶抑制基因PinX1在膀胱癌中的表达,探讨PinX1在膀胱癌发生、发展和预后中的作用及临床意义。方法应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例膀胱癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶反转录酶hTERT的mRNA表达水平,同时应用免疫组织化学方法检测PinX1蛋白表达水平。结果PinX1表达与膀胱癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间呈显著相关性,与hTERT表达呈负相关。结论PinX1的下调可能与膀胱癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关。检测PinX1的表达水平对评价膀胱癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。
- 冯峰王晓雄张彬杨平勋黄君健
- 关键词：膀胱肿瘤基因
- 地高辛标记法检测人源细胞系端粒长度被引量：4
- 2006年
- 目的:建立一种灵敏的、非同位素标记的端粒长度检测方法,并用于人源细胞系的肿瘤研究。方法:以地高辛标记寡核苷酸(TTAGGG)3为探针,对基因组DNA进行Southern印迹检测,经CDP-Star显色后与DNA标准分子量比较,利用图像分析系统计算端粒长度。结果:通过严格控制探针的工作浓度(1∶3000稀释)、DNA上样量(1.5～2.5μg)、杂交温度(42±1℃)等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带。结论:建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法;对正常细胞、永生化细胞和肿瘤细胞进行了端粒长度的检测和对比分析。
- 徐晓玲杨平勋白云秀黄君健黄翠芬
- 关键词：端粒端粒长度地高辛标记
