【目的】Pen a 1是虾中的主要过敏原,已知其5个抗原表位在过敏反应中起着决定性的作用。用全蛋白抗体和表位特异性抗体,检测Pen a 1经体外模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)消化后其抗原表位免疫原性的变化情况,为研究人体消化对Pen a 1的影响机理及脱敏食品的制备提供理论依据。【方法】以刀额新对虾(metapenaeus ensis)为原材料,提取纯化虾过敏原Pen a 1,采用Fmoc化学法合成Pen a 1抗原表位的5个多肽片段(No.1—No.5),分别与载体蛋白KLH和牛血清蛋白BSA偶联制备人工免疫原和包被原。用Pen a 1和制备的多肽免疫原免疫新西兰纯种白兔获得全白蛋抗体和特异性表位抗体。参照美国药典模拟人体胃液的条件消化处理Pen a 1,利用SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE观察消化后Pen a 1分子量变化;通过免疫印迹(Western-blot)定性观察Pen a 1消化后生成的新蛋白片段与各抗体的结合情况;再经竞争抑制酶联免疫吸附试验(ci-ELISA)定量检测消化后的Pen a 1和表位多肽与各抗体结合能力,从而得出Pen a 1经SGF消化后各抗原表位免疫原性的变化程度。【结果】SDS-PAGE结果显示Pen a 1随SGF消化时间的延长逐渐被降解,在22 kD处生成一些较稳定的新蛋白片段,Tricine-SDS-PAGE结果表明在1.7—18 k D之间无新蛋白片段生成。Western-blot表明消化后分解生成的小分子蛋白与六种抗体发生不同程度结合,其中全蛋白抗体和No.4抗体几乎与生成的所有小分子蛋白结合,在22 k D左右处生成的稳定新蛋白片段均与No.3、4、5抗体有较强的结合,而与No.1、2抗体结合较弱甚至无结合,表明该蛋白携带No.3、4、5表位,而基本无No.1、2表位。ci-ELISA结果显示,Pen a 1经SGF消化后对全蛋白抗体和5个表位抗体的抑制率均显著下降,说明经过消化后Pena1及其抗原表位的免疫原性均明显降低,各抗原表位消化稳定性排序为No.4>No.2>No.1>No.3>No.5,其中No.2、1、3之
探讨了延长银白杏的贮藏期的方法。首先对八成熟的银白杏进行1.0μL/m L 1-甲基环丙烯熏蒸处理,然后用不同保鲜袋（PVC袋,PE袋,PE打孔袋）与乙烯吸收剂组合处理,测定在4℃条件下贮藏期间呼吸强度、理化和感官指标的变化。试验结果表明,在7周的贮藏期中,乙烯吸收剂对银白杏果实的保鲜效果无有益影响。在不加乙烯吸收剂的情况下,与其他两种包装和冷藏对照相比,贮藏两周后PVC袋内O2和CO2含量分别保持在3%和3%~5%,达到最佳的气调贮藏条件,使杏果实的呼吸高峰推迟1周,且呼吸强度明显降低;PVC包装在贮藏期内显著延缓果皮、果肉硬度和可滴定酸的下降;3种包装对VC和可溶性固形物含量均无显著影响。经1-甲基环丙烯熏蒸处理,用PVC包装使银白杏的贮藏期于4℃延长至6周,达到较好的贮藏保鲜效果。
本文研究了56个花生品种中8种主要过敏蛋白及其过敏原性的差异,为低致敏性花生的育种和消费提供支持。收集了33个中国花生品种和23个日本花生品种并统一种植,收获后进行花生品种间的致敏性差异性研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成像系统分析了花生主要过敏原的种类和含量,用免疫印迹和间接ELISA方法测定各花生品种的致敏蛋白及其过敏原性。结果发现,过敏原Ara h 1在56个品种中的相对含量最高,其次是Ara h 2(20 kDa)和Ara h 3(14 kDa)。中国花生品种中绥中大花生和沭阳大站秧缺失过敏蛋白Ara h 3(35 kDa),新金伏大、兴城大花生和如东碗儿青缺失过敏蛋白Ara h 3(24 kDa),日本花生品种JP-16与JP-19中过敏蛋白Ara h 3(24 kDa)缺失。用中国花生过敏患者的血清进行间接ELISA试验,发现中国花生的过敏原性较日本花生强,这可能与所用的血清来源于中国病人有关。中国花生品种中致敏性最低的是铁岭四粒红,最高的是营口四粒红。日本花生品种中JP-10的致敏性最强,JP-6的致敏性最低。决定花生的致敏性强弱的因素复杂,单纯过敏条带的缺失或含量高低和花生致敏性并不存在线性关系。
研究了γ射线辐照对鲜切蔬菜的重要评价指标——维生素C和亚硝酸盐的影响。结果表明:辐照对苦瓜和圣女果中维生素C的影响不明显;2.32 k Gy剂量辐照能使鲜切圆生菜、彩椒和紫甘蓝的维生素C含量分别下降45%,34%和45%。辐照能明显降低三者贮藏期间维生素C的下降速率。辐照对鲜切黄瓜和水萝卜的亚硝酸盐基本上无影响,1.81 k Gy剂量辐照能使鲜切苦瓜和彩椒的亚硝酸盐含量分别由未辐照组的0.77 mg/kg和0.12 mg/kg升至1.03 mg/kg和0.35 mg/kg。辐照对鲜切蔬菜贮藏期间亚硝酸盐含量无显著影响。
【目的】建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法。【方法】Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85—105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体。以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性。【结果】经Ellman试剂测定多肽与KLH、BSA的偶联比分别为12﹕1和8﹕1。间接非竞争ELISA测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA(icELISA)测定该多克隆抗体对多肽的IC50和IC10分别为0.4324μg.mL-1和0.0004μg.mL-1,表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵敏性。免疫印迹试验结果表明,此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1蛋白,对所选其它物种蛋白无响应。【结论】通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析,该方法快捷灵敏,且具有较高的特异性。
