王颖旺
- 作品数：21 被引量：20H指数：3
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- 多头带绦虫TM16和TM18抗原基因的克隆与表达
- 采用RTR-PCR技术从多头带绦虫的六钩蚴总RNA中扩增得到长度分别为569bp和552bp的2个目的片段。通过分析发现,扩增出的2个目的片段分别包含了多头带绦虫的Tm16基因的完整开放阅读框(长度为399bp)和Tm1...
- 王颖旺杨光友
- 文献传递
- 多头带绦虫Tm18抗原基因的克隆、表达与免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 目的为分析多头带绦虫Tm18重组蛋白的免疫原性。方法利用RT-PCR技术从激活的多头带绦虫六钩蚴中扩增Tm18基因,将扩增产物亚克隆入pGEX-4T-1载体中,构建pGEX-4T-rTm18表达载体,转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达融合蛋白;表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析后,将纯化的Tm18重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其血清抗体。结果多头带绦虫Tm18基因序列长为552 bp,包括1个396 bp的开放性阅读框。表达的重组蛋白大小约为39.4 kDa,与脑包虫患羊血清的免疫印迹分析呈阳性反应;小鼠免疫1周后血清中即可检测到抗Tm18蛋白的特异性抗体,并于免疫后第5周达到高峰。结论 Tm18重组蛋白具有较好的免疫原性,可作为脑包虫疫苗的候选抗原。
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- 关键词：克隆原核表达
- 多头带绦虫四川株的生物学特性被引量：6
- 2010年
- 通过对2只试验犬在人工感染脑多头蚴后节片排出情况和对随机选取的50个孕卵节片内虫卵数量与大小的观察,以及用终浓度为10g/L次氯酸钠溶液,在显微镜下对虫卵孵化过程的观察,期望能为动物脑包虫病预防措施的制定以及进一步开展该虫的相关研究奠定基础。结果显示,2只试验犬分别在感染后的第45、50d开始排出节片且试验犬体内孕卵节片排出的持续时间分别为142d和54d,每日排节片数最高可达64片;孕卵节片内虫卵数最少约为780枚,最多约为16 035枚,平均为5 278.800±3 696.769枚,虫卵数量主要集中在2 000～6 000范围内,共占总节片数的52%;虫卵大小为(33.74±2.71)μm×(32.33±2.09)μm;虫卵的整个孵化过程大致需要4～5min,且随着孵化时间的延长虫卵原有的外形和整个胚膜结构消失,可见透明的六钩蚴。
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- 关键词：脑多头蚴孵化
- 多头带绦虫Tm18基因的克隆与原核表达
- 脑多头蚴病又称脑包虫病，是多头带绦虫（Taenia multiceps）的中绦期幼虫(脑多头蚴Coenurusce cerebralis)寄生于羊和其他有蹄类动物的的脑、脊髓内，引起中枢神经系统的功能障碍的一种人畜共患寄...
- 王颖旺
- 文献传递
- 细粒棘球绦虫基因型与抗原研究进展
- 细粒棘球绦虫(Echinococcus gronulosus,Eg)的中绦期幼虫—细粒棘棘球坳是引起人和家畜包虫病的主要病原之一，也是我国卫生部规划防治的五大寄生虫病之一。本次实验感染的结果表明，部分宠物鼠对多房球黝的感...
- 王颖旺杨光友蒋忠荣邓仕金
- 关键词：细粒棘球绦虫包虫病宠物饲养抗原分析
- 细粒棘球绦虫基因型与抗原研究进展被引量：2
- 2010年
- 细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)是一种重要的人兽共患寄生虫。现已报道细粒棘球绦虫有10个基因型(G1～G10),我国仅发现G1和G6。细粒棘球绦虫六钩蚴阶段的Eg95,原头蚴阶段的EgFABP,成虫阶段的EgM9和Eg31分别被认为是最有前途的用于免疫保护的抗原。其中Eg95基因工程疫苗已经商业化生产,对羊免疫保护率达到了95%以上。
- 王颖旺杨光友蒋忠荣邓世金
- 关键词：细粒棘球绦虫基因型抗原疫苗
- 多头带绦虫六钩蚴Tm45W基因的克隆表达与免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 为分析多头带绦虫Tm45W重组蛋白的免疫原性,利用RT-PCR技术首次从激活的多头带绦虫六钩蚴中扩增出多头带绦虫Tm45W基因。将扩增产物重组于原核表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-Tm45W表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白;表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析后,将纯化的Tm45W重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其血清抗体。结果显示,Tm45W基因全长为813bp,其开放阅读框为765bp,编码255个氨基酸,与多头带绦虫新疆株多头蚴45m基因(序列号:EU326106)的部分序列同源性为90.60%;表达的重组蛋白大小为45ku,与脑多头蚴病羊血清的免疫印迹分析呈阳性反应;小鼠免疫后第1周血清中即可检测到抗Tm45W蛋白的特异性抗体,并于免疫后第35天达到高峰。结果表明Tm45W重组蛋白具有较好的反应活性,能引起机体较强的体液免疫反应。
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- 关键词：六钩蚴克隆原核表达免疫原性
- PCV2 ORF2 B细胞表位与PPV VP2真核表达质粒的构建及其免疫原性被引量：3
- 2012年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2B细胞表位与猪细小病毒(PPV)VP2重组真核表达质粒的免疫原性,将PCV2ORF2的B细胞表位基因(141～257bp)重组到PPV SC-1株VP2基因的N端,构建了真核表达质粒pCI-VP2.ORF2B。用脂质体转染法将重组质粒pCI-VP2.ORF2B转染至Vero细胞中,利用间接免疫荧光法检测其在体外的表达情况。将重组质粒免疫小鼠,并设猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗和空载体对照组,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法分别对免疫小鼠脾淋巴细胞的转化功能,外周血CD4+和CD8+淋巴细胞比例,PCV2和PPV IgG抗体效价进行了检测。结果表明,转染Vero细胞后第48小时用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达;pCI-VP2.ORF2B免疫组脾淋巴细胞从第7天开始对ConA有明显反应,显著高于对照组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组;在免疫后第14天检测到PPV/PCV2IgG抗体。提示pCI-VP2.ORF2B能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。
- 梅淼陈燕凌朱玲熊丁杰郭万柱王颖旺吴云飞徐志文
- 关键词：VP2基因ORF2基因B细胞表位
- 多头带绦虫TM16和TM18抗原基因的克隆与表达
- 王颖旺杨光友
- 多头带绦虫Tm16基因的克隆表达与免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 为分析多头带绦虫Tm16重组蛋白的免疫原性,利用RT-PCR技术从激活的多头带绦虫六钩蚴中扩增Tm16基因,将扩增产物亚克隆入pET32a(+)载体中,构建pET32a-Tm16表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白;表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析后,将纯化的Tm16重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其血清抗体。结果显示,多头带绦虫Tm16基因序列长569bp,包括1个399bp的开放阅读框,与已报道的Tm16基因(序列号:EF672036)的序列同源性为99.8%。表达的重组蛋白大小约为30.69ku,与脑多头蚴病羊血清的免疫印迹分析呈阳性反应;小鼠免疫1周后血清中即可检测到抗Tm16蛋白的特异性抗体,并于免疫后第5周达到高峰。结果表明Tm16重组蛋白具有较好的免疫原性,可作为脑多头蚴病疫苗的候选抗原。
- 王颖旺杨应东杨光友牟静安晓雪古小彬王淑贤边尧
- 关键词：克隆免疫原性
