石金磊
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 呋喃妥因代谢物AHD单抗的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 将呋喃妥因代谢物1-氨基-乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)分别与牛血清蛋白(BSA)和Jeffamine修饰的卵清蛋白(OVA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原CPAHD-BSA和包被抗原CPAHD-Jeffamine-OVA。应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得了稳定分泌抗4-NPAHD单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为B10E7。使用本细胞株制备的McAb对4-NPAHD的半数抑制质量浓度(IC50)为3.65 ng/mL,与同类抗生素及其代谢物未发现交叉反应,显示高度的灵敏性和特异性。本抗体的研制为建立间接竞争酶联免疫方法奠定了基础。
- 石金磊陈永军刘迎春蒋蔚张花景李欣彤乔元彪王权
- 关键词：单克隆抗体
- 呋喃妥因代谢物AHD单抗的制备及鉴定
- 本研究将呋喃妥因代谢物1-氨基-乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)分别与牛血清蛋白(BSA)和Jeffamine修饰的卵清蛋白(OVA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原C...
- 王权石金磊陈永军刘迎春蒋蔚张花景李欣彤乔元彪
- 呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清抗体效价为1∶8×104,对NPAMOZ的半数抑制量为26.55μg/L,间接竞争ELISA鉴定小鼠血清多克隆抗体,与NPAMOZ、CPAMOZ的交叉反应率分别为100%、44.8%,与AMOZ、对醛基苯甲酸、对硝基苯甲醛以及同类其他三种药物呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮等原药及其代谢物以及代谢物衍生物的交叉反应均小于0.01%。结果表明,制备的AMOZ多克隆抗体效价高、特异性强,灵敏度高,为进一步制备AMOZ单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
- 刘迎春蒋蔚陈永军高艺林石金磊王权
- 关键词：人工抗原化学合成
- 呋喃妥因残留代谢物人工抗原的合成与鉴定被引量：2
- 2012年
- 利用对醛基苯甲酸对呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(1-Aminohydantoin hydrochloride,AHD)进行衍生化,衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)通过混合酸酐法与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联,用紫外扫描(UV)和变性凝胶电泳(SDS-PAGE)对偶联物进行验证。将偶联成功的人工全抗原(CPAHD-BSA)免疫BALB/c小鼠,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清抗体效价为1:32 000。用间接竞争ELISA鉴定抗体特性,结果显示:抗体对AHD与对硝基苯甲醛的衍生物(NPAHD)的灵敏度高,IC50为30.63μg/L,特异性好,与CPAHD有部分交叉反应外,与其他3类硝基呋喃类药物及代谢产物无交叉反应(交叉反应率<0.01%)。结果表明,用CPAHD-BSA作免疫原免疫小鼠可诱导产生针对AHD衍生物(NPAHD)的特异性抗体,为进一步制备AHD单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
- 宋宁宁刘迎春陈永军蒋蔚石金磊杨康王权
- 关键词：人工抗原
- 四碘甲状腺原氨酸单克隆抗体的制备
- 2013年
- 采用碳二亚胺(EDC)法合成游离3,3',5,5'-四碘甲状腺原氨酸(FT4)的完全抗原FT4-BSA和FT4-OVA,将FT4-BSA作为免疫原,免疫BALB/c雌鼠,以FT4-OVA为包被原,利用ELISA方法确定抗FT4多克隆抗体的效价和敏感性。通过杂交瘤技术筛选出分泌抗T4单克隆抗体(T4 McAb)的杂交瘤细胞株,制备腹水单抗。经检测,腹水单抗效价是1∶9.0×104,以此建立的间接竞争ELISA方法,半数抑制质量浓度(IC50)是24.7 ng/mL;FT4单抗与游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的交叉反应率是4.2%,与促甲状腺激素(TSH)无交叉反应;经抗体类型鉴定,获得的单抗重链属于IgG1亚类,轻链属于κ型。结果表明:本试验制备的单抗特异性强、敏感性高,能够为T4免疫学检测方法的建立和相关研究奠定良好基础。
- 高艺林王权卫君超邓志瑞张文举刘迎春蒋蔚陈永军石金磊陈沁
- 关键词：单克隆抗体
- 一种抗流感病毒的单链抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗流感病毒的单链抗体ScFv及其制备方法和应用，以及编码该单链抗体的基因，含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗流感病毒的单链抗体，其是下列蛋白质之一：1)由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成的单链...
- 蒋蔚王权陈永军刘迎春史子学马志永顾惠明杨康宋宁宁石金磊李欣彤
- 文献传递
- 呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备
- 本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证.然后采用混合酸酐法使CPAMOZ与载体蛋白偶联,紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证.将确证成功偶...
- 刘迎春蒋蔚陈永军高艺林石金磊王权
- 检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺的化学发光间接竞争免疫分析方法的建立被引量：6
- 2013年
- 将莱克多巴胺(RAC)与戊二酸酐反应,用混合酸酐法使反应产物与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成免疫原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备RAC单克隆抗体,建立检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺化学发光间接竞争免疫分析法。结果显示:飞行质谱法测得RAC-戊二酸单酯分子量为416.2,RAC-戊二酸单酯与BSA偶联比为3.4∶1;RAC单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶8×104,包被抗原最佳质量浓度为0.5μg/mL;标准曲线呈线性,回归方程为Y=-0.188 2x+0.392 2,R2=0.993 4,IC50值为0.267 ng/mL;与RAC类似化合物及其他药品无明显的交叉反应。尿样回收率为76.8%～90.8%,批内变异系数为6.8%～11.5%,批间变异系数为7.2%～13.8%;猪肉样回收率为75.2%～87.4%,批内变异系数为7.1%～11.6%,批间变异系数为8.6%～14.1%。结果表明:用RAC-戊二酸单脂与BSA偶联物作免疫原成功地研制了针对RAC的特异性抗体,以单抗为基础建立了检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺化学发光间接竞争免疫分析法,为进一步研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
- 王权赵新宇蒋蔚陈永军刘迎春宋宁宁石金磊
- 关键词：莱克多巴胺单克隆抗体
- 呋喃妥因代谢物AHD快速检测技术研究
- 近年来，动物源性食品中兽药残留问题越来越受到人们的关注。随着抗菌药物的广泛应用，发现大剂量或长时间使用硝基呋喃类药物会对动物机体产生一系列不良反应并具有三致毒害，且其代谢物在体内残留时间长达数周，为了保证动物源性食品的安...
- 石金磊
- 关键词：兽药残留呋喃妥因单克隆抗体
- 文献传递
- 弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定被引量：2
- 2014年
- 为深入研究弓形虫烯醇化酶的生物学功能,根据已发表的eno2基因序列设计引物,通过RTPCR方法扩增弓形虫RH株的eno2基因。将eno2克隆到载体pET-28a(+)中后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其免疫活性。结果显示,eno2基因全长1 353bp,编码444个氨基酸,与GenBank中登录的弓形虫烯醇化酶基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性均高达99.8%,与其他物种的烯醇化酶的同源性较低。在pH7.5、28℃和IPTG终浓度0.1mmol/L条件下,重组蛋白ENO2得到高效可溶性表达,分子质量约为55ku。Western-blot结果显示,重组蛋白能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明ENO2具有较好的反应原性,可以作为血清学诊断抗原。IFA表明,NO2在弓形虫的细胞质和细胞核中均有分布。结果表明,本研究成功获得了可溶性、具有良好免疫活性的弓形虫重组蛋白ENO2,为深入研究其生物学功能奠定了基础。
- 张花景蒋蔚刘迎春陈永军李欣彤石金磊乔元彪薛俊欣张梦王权
- 关键词：弓形虫原核表达反应原性
