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利用间接免疫荧光染色检测生精细胞核蛋白的方法: 利用间接免疫荧光染色检测生精细胞核蛋白的方法，是从动物的睾丸组织中分离曲精小管，利用低渗液处理生精细胞，采用间接免疫荧光染色方法检测生精细胞核蛋白，其中，所述的低渗液中包括有17mM柠檬酸钠、50mM蔗糖、5mMEDTA...; 郭睿闫萍于保锋梁样红杨丽娟张小曼刘丹李春锋高然朋解军; 文献传递

Canopy2对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响被引量：2: 2022年; 目的探讨Canopy2(Canopy FGF signaling regulator 2,CNPY2)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemiareperfusion injury,MIRI)心肌细胞凋亡的影响。方法H_(2)O_(2)分别作用于感染腺病毒Ade-hCNPY2-Flag和Ade-NC-Flag的H9c2细胞,细胞核Hoechst 33258染色法检测过表达CNPY2对体外缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,同时采用Western blot法检测多聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase,PARP)的活化情况。通过免疫荧光染色法检测CNPY2在心肌细胞的定位。建立大鼠MIRI模型,同时给与Ade-hCNPY2-Flag和Ade-NC-Flag注射,收集再灌注4 d的大鼠心肌组织,TUNEL染色法检测过表达CNPY2对大鼠MIRI心肌细胞凋亡的影响,Western blot法检测PARP的活化情况。结果Ade-hCNPY2-Flag+H_(2)O_(2)组H9c2细胞的凋亡率和PARP活性均明显低于Ade-NC-Flag+H_(2)O_(2)组(P<0.05)。CNPY2在心肌细胞的胞浆中表达。大鼠经注射Ade-hCNPY2-Flag后,MIRI心肌细胞的凋亡率和PARP活性均明显低于注射Ade-NC-Flag的大鼠(P<0.01)。结论体内外过表达外源性CNPY2蛋白均可明显抑制缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡。; 宋丽茹孙晨马佳乐杨滨郭睿闫萍; 关键词：心肌缺血再灌注损伤心肌细胞细胞凋亡

原癌基因Pokemon的克隆原核表达及纯化被引量：3: 2006年; 目的克隆小鼠Pokemon(POKeryhroidmyeloidontogenicfactor)基因并进行原核表达及重组蛋白的纯化。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,克隆人pGEM-T-easy载体,经鉴定后,以限制性核酸内切酶分别消化重组质粒及原核表达载体pET-30a(+),体外定向连接,进行PCR、内切酶酶切及DNA序列分析,阳性重组表达质粒进一步转化到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达,经Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,Westernblotting检测其特异性。结果限制性核酸酶切及序列分析表明重组表达质粒包含Pokemon基因编码区,阅读框架无移位;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示有预期相对分子质量为36000的重组蛋白表达,经亲和层析纯化后,融合蛋白的纯度达到90%以上;Westernblotting印迹表明纯化的融合蛋白具有特异的免疫反应特性。结论采用基因克隆技术成功构建了Pokemon原核表达载体,并获得了高纯度的重组蛋白,为后期抗体的制备及进一步研究该基因与肿瘤发生的关系奠定了基础。; 郎旭宇闫萍王惠珍张悦红程牛亮郭睿; 关键词：原癌基因原核表达

小鼠精子细胞变态成形过程中manchette的免疫荧光染色分析被引量：5: 2008年; 目的通过观察manchette结构在小鼠精子细胞中的定位和形态变化,探讨其在小鼠精子细胞变态成形过程中的作用和意义。方法利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术显示manchette结构在小鼠精子细胞变态成形各阶段的细胞内定位,观察精子细胞成熟过程中manchette结构的形态学改变。结果manchette结构紧密附着在精子细胞核表面;该结构在圆形精子细胞核变形和延伸的起始阶段形成,并随着精子细胞核的浓缩和变长逐渐向精子细胞尾部移位,直至精子变态成形后消失;在精子细胞变态成形过程中,manchette随着精子细胞核形态的改变逐渐从"帽状"结构变形为"微管样"结构。结论Manchette结构的形成和消失与精子细胞核的浓缩及延伸同步,其形态变化和位置改变与精子细胞核的形态学变化相吻合,在小鼠精子细胞变态成形过程中具有重要意义。; 郭睿闫萍李喜霞张栋; 关键词：MANCHETTE 精子细胞免疫荧光小鼠

分离地龙DNA裂解蛋白过程中组织破碎法、pH及温度的选择(英文): 2009年; 目的观察分离过程中三种处理方法制备的地龙组织匀浆及pH、温度对地龙DNA裂解蛋白(EWDNase)的影响。方法采用糖溶解法、机械法和超声破碎法制备地龙组织匀浆;不同温度、pH条件下进行EWDNase的粗提取。测定地龙组织匀浆及不同温度、pH条件下制备的粗提取液中EWDNase活性和蛋白含量,计算其比活性。结果三种方法获得地龙组织匀浆中EWDNase比活性大小无显著性差异(P>0.05);EWDNase耐热(75℃,30min仍有活性),pH3.4-5.4具有较高比活性。结论机械法因其操作简便、经济实用、误差小、重复性高可以用来处理地龙组织制备组织匀浆。提取EWDNase过程中宜采用酸性缓冲体系和较高温度(65-75℃)的热变性条件。; 闫萍郭睿张栋王建华王惠珍牛勃; 关键词：地龙温度 PH

蚯蚓提取物中蛋白质含量测定方法的研究被引量：21: 2007年; 目的寻找能够精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;分别使用2法测定标准牛血清白蛋白(BSA)水溶液在碱性蛋白酶水解前后的蛋白质含量。结果改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。BSA水溶液酶解前,2法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法测定BSA水溶液蛋白质含量时,酶解后的测定值较酶解前出现大幅下降。结论在测定多肽含量多的供试品中蛋白质含量时,改良Lowry法测定更为精确。蚯蚓提取物中存在大量的多肽成分,所以对其进行蛋白质含量测定时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。; 闫萍牛勃张悦红张建林王惠珍刘德文; 关键词：蛋白质蚯蚓提取物

人纤溶酶原半胱氨酸卷曲区5(hPK-5)基因在4种工程菌株中表达差异性研究: 2004年; 目的 :探索表达人纤溶酶原半胱氨酸卷曲区 5 (hPK 5 )的最佳菌株 ,为研究其抑制内皮细胞增殖和迁移的活性 ,开发肿瘤治疗和预防肿瘤转移的新药提供前提。方法 :在将人纤溶酶原半胱氨酸卷曲区 5 (hPK 5 )基因与原核表达载体pBV2 2 0进行体外重组获得表达质粒 pBV2 2 0 /hPK 5 ,采用氯化钙转化法将重组质粒分别导入BL2 1(DE3)、DH5α ,JM10 9和BL2 1(DE3) pLyss 4种工程菌 ,在温控诱导表达条件下进行相同表达条件和优化表达条件下的hPK 5因子表达差异性研究。结果 :工程微生物 (本研究为工程菌株 )的筛选、培养条件的建立、外源基因表达条件的建立是优化基因工程技术体系的重要技术环节。结论; 张建林陈显久闫萍牛勃程牛亮杨琦张悦红; 关键词：基因克隆原核表达

小鼠Spata3蛋白结构和功能的生信分析及初鉴: 2022年; 目的对小鼠精子发生相关蛋白3(spermatogenesis associated protein 3,Spata3)的序列进行分析,探讨其结构和功能。方法利用NCBI数据库比对小鼠Spata3的同源性、ExPASy ProtParam软件分析理化特征、SOPMA及GOR4预测空间构象、NetPhos3.1及STRING数据库分析蛋白修饰位点及蛋白间相互作用关系等信息、免疫组化和免疫荧光染色检测其组织细胞定位。结果小鼠和人的Spata3基因CDS序列64%相同,是碱性不稳定亲水蛋白,无信号肽,属于非跨膜的胞内蛋白,主要定位于睾丸组织各级精子细胞核和胞质,以圆形精子细胞表达量最高。小鼠Spata3含1个内在无序区结构域,30个潜在的磷酸化位点,11个潜在的O-型糖基化位点,可能与Spata46、Spert等蛋白相互作用。结论小鼠Spata3是精子发生过程中的保守蛋白,可能调节精子发生变形过程。; 李美宁马庆弓韬张引红闫萍翟翔郭睿; 关键词：精子发生生物信息学蛋白质相互作用

生精细胞阶段特异性表达基因的cDNA芯片筛选及初步功能研究: 郭睿赵全明于保锋王惠珍闫萍张栋; 该研究属于医药卫生领域的发育生物学：主要研究内容研究了雄性小鼠精子发生过程中不同发育阶段生精细胞的基因表达谱，并从分子水平揭示了多个目标基因可能的作用机制。1.利用Cdna芯片技术研究了不同发育阶段生精细胞的基因表达情况...; 关键词：; 关键词：发育生物学精子细胞疾病诊断

减数分裂特异基因sycp_1在小鼠精母细胞中的表达: 2008年; 目的检测减数分裂基因sycp1在小鼠精子发生过程中的特异表达及其蛋白产物在小鼠精母细胞中的定位。方法利用半定量RT-PCR技术分析了sycp1基因在1,2,3,5,8周龄小鼠睾丸发育过程中的阶段特异性表达,以及脑、心脏、肺、肝脏、肾脏、脾、胸腺和睾丸中的组织特异性表达;采用免疫组织化学染色方法检测了SYCP1在小鼠曲细精管中的细胞定位;通过间接免疫荧光染色初步显示了SYCP1在粗线期精母细胞中的分布。结果RT-PCR分析证实sycp1 mRNA具有明显的组织特异性和阶段特异性表达特征;免疫组织化学染色结果显示,SYCP1只存在于减数分裂期的精母细胞核内;间接免疫荧光分析表明SYCP1在粗线期精母细胞核内的分布与核染色体的分布相一致。结论sycp1为减数分裂特异基因,其编码蛋白在雄性小鼠精母细胞核内的表达与SC的形成和成熟同步,参与了同源染色体之间的联会和重组。; 郭睿于保锋闫萍崔慧林; 关键词：联会复合体减数分裂同源染色体

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闫萍

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