刘杞 作品数:143 被引量:712 H指数:13 供职机构: 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市卫生局医学科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
人中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道黏液高分泌细胞模型的建立及其机制的初步研究 被引量:4 2008年 目的:以人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)为诱导因素,研究建立黏蛋白(MUC)5AC和5B高表达的细胞模型,同时对黏蛋白高表达机制进行初步研究。方法:培养人肺腺癌细胞A549,以HNE为刺激因素,EGFR中和抗体、表皮细胞生长因子受体(EGFR)磷酸化阻断剂AG1478为干预因素,分组培养。采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测HNE对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量分析MUC5AC和MUC5B蛋白含量的差异;细胞免疫化学以及激光共聚焦技术进一步直观观察MUC5AC,MUC5B,p-EGFR蛋白表达的变化。结果:HNE对A549细胞活力的影响呈剂量依赖性;HNE刺激组的MUC5AC,MUC5B基因转录和蛋白表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.01);HNE刺激组p-EGFR蛋白表达显著增多,EGFR中和抗体、AG1478能显著降低HNE诱导的MUC5AC高表达,但对MUC5B高表达无干预作用。结论:人肺腺癌细胞A549同时表达MUC5AC和MUC5B,HNE能有效刺激A549细胞高表达MUC5AC和MUC5B,黏蛋白高表达细胞模型的建立为研究气道粘液高分泌疾病提供了实验基础。HNE通过激活EGFR信号转导通路诱导MUC5AC的高表达,但MUC5B高表达机制与之不同,有待进一步研究。 兰箭 孙航 刘杞 周向东关键词:黏蛋白5AC 表皮细胞生长因子受体 细胞模型 乙型肝炎病毒标志物低水平复制的检测及方法学比较 被引量:8 2006年 由于免疫学技术的不断发展,抗原抗体检测的灵敏度不断提高,使得低水平乙型肝炎病毒(HBV)感染或复制得以检出,实验检测技术的准确性及高灵敏度对临床诊断、治疗、疗效观察及流行病学调查有重要意义。 罗娅 周智 刘杞关键词:肝炎病毒 乙型 肝炎 乙型 血清学 人胎肝细胞生长刺激物质在实验性肝坏死中抗肿瘤坏死因子的作用机理研究 1991年 本文应用实验性肝坏死大白鼠研究人胎肝细胞生长刺激物质(HSS)、抗肿瘤坏死因子(TNF)的作用及其机理。结果显示HSS能对抗D-氨基半乳糖、内毒素引起的肿瘤坏死因子水平升高,对抗肝糖原、血糖浓度的降低,明显提高实验性肝坏死大白鼠的存活率。实验大鼠血清中葡萄糖醛酸苷酶及肝细胞内酸性磷酸酶活性一致性低下,提示HSS可以稳定溶酶体并对抗肿瘤坏死因子对溶酶体的激活作用。 郭树华 刘杞 陈国民 刘林 张定凤关键词:肝坏死 TNF 人肝再生增强因子对体外单个核细胞PKCα-NF-κB及IL-2的影响 被引量:5 2009年 目的观察人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)对人外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cell,PBMC)PKCα-NF-κB及IL-2的影响,探讨hALR免疫抑制机制。方法用梯度离心法分离正常人PBMC,分成正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)刺激组(ConA组)和hALR干预组(ConA+hALR组)。ConA组用5μg/mlConA刺激细胞增殖和分泌细胞因子IL-2;ConA+hALR组用30μg/mlhALR对ConA刺激进行干预。于细胞培养0、8、16、32、40h时,用MTT法测定细胞增殖程度,Westonblot检测细胞内信号通路PKCα-NF-κB表达含量,Fluo-3AM装载检测胞内钙离子浓度,用双抗夹心酶联法检测上清细胞因子IL-2含量。结果ConA组细胞增殖逐渐加强,16h时与正常对照组比较具有统计学意义(P<0.05);PKCα、NF-κB表达上调及上清IL-2含量增加趋势一致,在16h达到高峰(P<0.05)。ConA+hALR组细胞没有增殖,PKCα-NF-κB表达及上清IL-2含量最高峰后移至32h。每个时间点各组细胞内Ca2+浓度没有差别。结论hALR可能通过抑制PKCα-NF-κB通路阻碍IL-2的产生速度进而抑制免疫。 王新国 刘杞 孙航关键词:人肝再生增强因子 外周血单个核细胞 IL-2 重组大鼠肝再生增强因子抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的机制研究 被引量:1 2009年 目的:探讨重组大鼠肝再生增强因子(rrALR)在体外对庆大霉素(GM)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法:将NRK-52E细胞分为正常对照组、庆大霉素处理组(GM1.6g/L)和rrALR干预组(分别加入GM和不同浓度的rrALR),培养细胞24h、48h。吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及Annexin V/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡状态。Western blotting和RT-PCR检测各组细胞不同时点Bcl-2和Bax蛋白、mRNA的表达。结果:(1)rrALR对庆大霉素诱导的NRK-52E细胞凋亡具有抑制作用(P<0.05)。(2)rrALR能够呈剂量依赖方式增加细胞Bcl-2蛋白及核酸的表达(P<0.05)、降低细胞Bax蛋白及核酸的表达(P<0.05),使Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论:rrALR可以通过调节Bcl-2家族Bax和Bcl-2蛋白及核酸的表达水平,抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡,减轻肾毒性药物对小管上皮细胞的损伤。 张玲 刘杞 周飞 廖晓辉关键词:肝再生增强因子 肾小管上皮细胞 庆大霉素类 人抗HBV-前S2抗体轻链基因的克隆及序列分析 被引量:2 2001年 目的获得人源性乙型肝炎病毒前S2抗体轻链基因。方法用人工合成的乙型肝炎病毒前S2短肽(Pre-S2,120—145),从已构建的人源性噬菌体抗体库中,得到了针对Pre-S2阳性克隆,经竞争抑制实验证明其特异性和活性,合成一对轻链引物,经PCR扩增,亚克隆入质粒PUC18进行序列测定及分析、结果筛选到的阳性克隆具有乙型肝炎病毒前S2特异性亲和力。构建了pUC18- Pre-S2k。轻链重组质粒,序列分析其为人k轻链,包括了完整的恒定区和可变区,大小为 645 bp。结论利用抗原抗体特异性反应原理。 石小枫 刘杞 王志毅 张定凤关键词:乙型 ALR对急性缺血性肾损伤大鼠模型肾小管上皮细胞凋亡的影响 廖晓辉 张玲 刘杞 孙航二甲双胍对高脂饲养大鼠肝脏脂肪变的干预作用 被引量:4 2007年 目的:探讨胰岛素抵抗在非酒精性脂肪性肝发病中的作用及机制,观察二甲双胍对高脂饲养大鼠肝脏脂肪变的干预效果.方法:21只(?) Wistar大鼠分为3组,每组7只,普通饮食组(SD),高脂饮食组(HF),二甲双胍组(HF- Met)在高脂饮食的同时给予二甲双胍,共8wk.8 wk末处死大鼠,称量附睾脂肪,计算肝指数,生化方法测定ALT、AST、TG、TC、FFA、SOD和MDA.放免法测定空腹胰岛素,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法检测肝脏TNF-αmRNA和蛋白的表达,用葡萄糖输注率(GIR)来评价胰岛素敏感性,并观察肝组织病理变化.结果:与HF相比,HF-Met肝细胞脂肪变和小叶炎症明显减轻,肝指数、胰岛素、AST、ALT、TG、FFA显著下降(3.25±0.26 vs 4.29±0.12,33.37±8.34 vs 46.73±5.24,17.29±5.34 vs 43.48±6.21,4.10±2.47 vs 12.05±4.05,P<0.01;106.0±31.04 vs 141.37±24.87,48.31±16.11 vs 88.34±21.94,P<0.05)TNF-α的表达也显著下降,GIR增加(7.58±1.05 vs 6.31±1.28,P<0.05).结论:二甲双胍干预能明显改善高脂饲养大鼠的胰岛素抵抗,降低肝脏TG、FFA和TNF-α的表达,减轻肝脏脂肪变的程度,提示胰岛素增敏治疗可能是NAFLD防治的一种积极策略. 陈世清 黎华 刘杞关键词:胰岛素抗药性 聚合酶链式反应 酶联免疫测定 肝再生增强因子对外原性抗原引起机体免疫应答影响的研究 被引量:8 2007年 目的研究rALR对HBsAg及BSA免疫大鼠产生抗体、细胞因子和对脾脏细胞增殖的影响。方法甲醇诱导表达rALR,测定活性并进行以下研究。①rALR对HBsAg免疫的影响:实验分为:生理盐水、HBsAg20μg/只、HBsAg20μg+rALR100μg/kg、HBsAg20μg+rALR25μg/kg、HBsAg20μg+pPIC9K表达上清、HBsAg20μg+CsA10mg/kg,共6组;②rALR对BSA免疫的影响:实验分为:生理盐水、BSA25μg/只、BSA25μg+rALR100μg/kg、BSA25μg+pPIC9K表达上清、BSA25μg+CsA10mg/kg,共5组。以上均皮下注射免疫大鼠,1次/周×4次,ELISA检测血清中相应抗体、IL-2和IFN-γ。③rALR对大鼠脾细胞增殖的影响:Wistar大鼠先皮下注射HBsAg(20μg/只)1次,2周后处死,分离脾单核细胞,种板,再加HBsAg1μg/孔和/或相应处理因素(rALR、空质粒表达产物等),48h后加3H-TdR,12h后收集细胞,检测cpm值。结果rALR100μg/kg+HBsAg组的8只动物中,有2只出现抗HBs的抗体,空质粒对照组和单用HBs Ag组8只动物均出现抗HBs。rALR100μg/kg+BSA组的8只动物中,有3只出现抗BSA抗体,空质粒对照组和单用BSA组8只动物均出现抗BSA的抗体。rALR100μg/kg能明显抑制细胞因子IL-2及IFN-γ的产生。rALR4μg体外能明显抑制脾细胞的增殖。结论rALR能抑制HBsAg和BSA诱导大鼠产生相应抗体及IL-2、IFN-γ的产生;体外能抑制经体内致敏的脾细胞的增殖,说明rALR有免疫抑制作用。 石小枫 孙航 唐琳 陈学华 刘杞关键词:肝再生增强因子 免疫抑制 新生大鼠肝细胞的分离纯化及冻存条件分析 被引量:6 2004年 研究针对当前采用非灌注法消化肝细胞的不足加以改进,同时探索肝细胞的最佳冻存、复苏条件,评价冻存细胞作为供者细胞的可行性,为今后临床应用时出现供者细胞短缺提供解决办法. 刘杞 袁刚关键词:肝细胞 肝组织 血细胞