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基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法被引量：3: 2009年; 为建立一种基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法。以T7噬菌体作为展示载体,在其表面展示蛋白质的抗原表位肽,提取重组噬菌体作为免疫原免疫动物,通过ELISA、Western blot和细胞免疫荧光技术检测抗体的滴度及特异性。结果表明,以展示蛋白质抗原表位的T7噬菌体免疫动物,得到的抗体能特异识别相应的表位肽,其中针对Pif1-α抗原表位的抗体,还能特异识别Pif1-α蛋白。结论是,表面展示小肽的T7噬菌体具有很好的免疫原性,如果展示的小肽确为蛋白质抗原表位,则可作为完整蛋白质抗原的替代抗原免疫动物来制备识别完整蛋白的抗体。; 周游吴峰范国才吴祖泽王清明; 关键词：表位肽噬菌体展示抗体

抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2: 2010年; 目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定，该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，该抗体检测HPPCn的极限为0．1μg／L；Western blot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为，该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13（IHLELRN）。结论：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。; 霍景瑞姚西宁刘英富刘保才吴峰范国才王清明; 关键词：单克隆抗体效价噬菌体肽库

基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体: 2010年; 目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法：将GW／3蛋白N末端的肽段（AAAERGAVELK）展示于T7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot等方法检测mAb的特异性。结果：利用表面展示GP73抗原表位的重组噬菌体为抗原免疫小鼠，通过细胞融合和筛选得到了能识别GP73蛋白的mAb，且特异性较好。结论：将蛋白质抗原的合适抗原表位展示在T7噬菌体表面，用这种重组噬菌体作为替代抗原可以制备识别全蛋白的mAb。; 姚西宁霍景瑞刘英富刘保才吴峰范国才王清明; 关键词：噬菌体展示 GP73 抗原表位

紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的蛋白质组研究被引量：13: 2006年; 目的研究紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的分子机制。方法以100 nmol/L紫杉醇作用MCF-7细胞24 h后提取细胞总蛋白,利用蛋白质组技术,对紫杉醇诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后的细胞蛋白进行二维电泳图谱分析,通过质谱鉴定差异蛋白质。结果通过对凋亡前后的蛋白质组二维电泳图谱分析,找到了17个差异较大的蛋白质,其中6个蛋白质通过质谱得到了鉴定,它们是烯醇化酶、细胞核氯离子通道蛋白、角蛋白8、核糖体蛋白S12、galectin-1和Hint。结论通过蛋白质组技术,发现了在紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后发生变化的6种蛋白质；这些差异蛋白质在紫杉醇诱导细胞凋亡中发挥一定的作用。; 吴峰王清明范国才陈吉中陈惠鹏; 关键词：紫杉醇 MCF-7乳腺癌细胞蛋白质组

靶向HER-2的siRNA治疗乳腺癌的实验研究: HER-2/(c-erbB-2,neu/)基因是EGF受体家族的重要成分,它在20/%～40/%的乳腺癌中高表达,并与乳腺癌的发生、转移、预后密切相关。HER-2高表达的乳腺癌患者采用化疗、放疗、内分泌治疗及联合治疗等多...; 吴峰; 关键词：HER-2 乳腺癌 RNAI SIRNA 重组腺病毒基因治疗; 文献传递

利用siRNA抑制HER-2表达的研究被引量：2: 2006年; 目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达。方法针对HER-2mR-NA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达。结果siRNA3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA2P和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少。结论靶向HER-2mRNA的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗。; 吴峰王清明范国才陈吉中陈惠鹏; 关键词：HER-2 乳腺癌

通过RNA干涉沉默SARS病毒的研究前景被引量：6: 2003年; RNA干涉(RNAi)是双链RNA介导的转录后基因沉默作用的重要机制之一。RNAi在后基因组时代的基因功能研究和药物开发中具有广阔应用前景。本文综述了RNAi在抗SARS病毒药物研究中的应用前景。; 吴峰陈惠鹏; 关键词：RNA干涉 SARS病毒基因沉默药物

基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素的抗体被引量：2: 2009年; 目的:基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素(HPO)的抗体。方法:根据HPO的空间结构选择了2个候选B细胞表位,展示在T7噬菌体的表面,将提取的重组噬菌体免疫动物,采用ELISA法检测抗血清的效价,通过杂交瘤技术制备针对HPOC端表位的单克隆抗体。结果:2个候选B细胞表位KDGSCD和DGWKDGSC均能诱导抗相应表位多肽的多克隆抗体的产生,免疫6周后血清中抗体效价均达到1∶103,产生的抗体还能够特异识别HPO全蛋白;针对HPOC端表位KDGSCD的单克隆抗体也能识别HPO全蛋白,且具有良好的特异性。结论:基于T7噬菌体展示的B细胞表位可作为免疫原用于制备识别该B细胞表位来源的全蛋白质的抗体。; 周游吴峰范国才王清明; 关键词：肝细胞生成素 B细胞表位噬菌体展示抗体

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吴峰