吴德平
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
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- 贝氏柯克斯体重组膜蛋白抗原激活树突状细胞诱导特异性免疫应答
- 2010年
- 目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DCs;分别用Cb的5种重组膜蛋白IcmO、EnhA、SecB、Lo1A、HspB刺激DCs;用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测刺激后DCs表面分子表达。结果 SecB刺激的DCs表达CD83,CD86,CD80,CD54,CD58,和CD40水平显著高于其它4种蛋白;将SecB激活DCs或SecB激活DCs培养上清刺激T淋巴细胞,FACS检测显示刺激后CD4+和CD8+细胞高水平表达的T淋巴细胞活化标志CD69以及细胞因子IFN-γ和TNF-α。结论 SecB膜蛋白抗原能有效激活DCs和它所激活DCs能够诱导特异性细胞免疫应答,为贝氏柯克斯体潜在保护性抗原。
- 王颖王锡乐吴德平熊小路尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞表面分子流式细胞分析
- 立氏立克次体主要抗原的免疫原性研究
- 立氏立克次体(Rickettsia rickettsii R.r)，落基山斑点热(Rocky Mountain SpottedFever，RMSF)的病原体，为专性胞内寄生的革兰阴性菌。该菌的高致病性使其成为重要的生物战...
- 吴德平
- 关键词：抗原基因免疫印迹中和抗体免疫原性分子疫苗斑点热
- 文献传递
- 氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫保护性评价被引量：1
- 2009年
- 目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免疫的一半剂量腹腔注射加强免疫1次,2周后用107的贝氏柯克斯体强毒株腹腔注射感染免疫小鼠,感染第7d活杀小鼠、摘取小鼠脾脏,用荧光定量PCR检测小鼠脾脏组织的贝氏柯克斯体。结果所有Q热疫苗免疫组的小鼠脾脏荷菌量均显著少于非免疫组,100μg免疫组的荷菌量显著低于10μg免疫组,10μg疫苗组显著低于1μg免疫组。每批CMRV免疫组与相同剂量WCV免疫组之间的贝氏柯克斯体含量无显著差异。结论国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗具有与灭活Q热疫苗一样良好的抗贝氏柯克斯体感染的免疫保护性。
- 王锡乐邢洪光熊小路陈梅玲吴德平王世斌王颖温博海
- 关键词：Q热疫苗贝氏柯克斯体免疫保护性
- 贝氏柯克斯体新桥株激活人树突状细胞的表型分析
- 目的意义：树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体新桥株(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多...
- 王颖吴德平王锡乐尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞单核细胞流式细胞分析
- 立氏立克次体蛋白抗原基因的表达和重组蛋白抗原的免疫印迹分析被引量：4
- 2009年
- 目的表达立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)主要抗原基因,免疫印迹初步分析重组蛋白抗原的抗原性。方法根据立氏立克次体全基因组序列选出主要抗原相关基因,采用PCR从全基因组中扩增抗原相关基因,将扩得的基因片段插入原核表达质粒构建抗原基因重组表达质粒,将重组质粒转化大肠杆菌并诱导转化菌表达重组蛋白抗原。采用立氏立克次体感染的豚鼠血清和斑点热患者血清分别与纯化的重组蛋白抗原做免疫印迹分析。结果经PCR扩增后获得43个目的基因片段,其中36个基因片段在大肠杆菌中高效表达重组蛋白抗原,其中5个蛋白抗原在免疫印迹中与感染豚鼠血清和斑点热患者血清反应均为阳性。结论免疫印迹筛选出5种立氏立克次体重组蛋白抗原,结果提示它们是能够诱导机体产生特异性免疫应答的主要抗原,可作研制斑点热诊断试剂或亚单位疫苗的新候选蛋白抗原。
- 吴德平王颖王锡乐陈梅玲温博海
- 关键词：重组蛋白免疫印迹
- 贝氏柯克斯体新桥株刺激人树突状细胞的表型分析被引量：1
- 2009年
- 目的树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多糖(LPS)、去除LPS的Cb对DC的激活作用,探讨Cb逃逸宿主免疫清除的机理。方法从健康成年人的外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DC;分别用灭活Cb、Cb LPS、去LPS Cb刺激体外培养未成熟DC,大肠杆菌LPS作为阳性对照刺激因子;刺激后24h,用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测DC表面分子:成熟标记分子CD83与共刺激分子CD40、CD58、CD80、CD86。结果去LPS Cb刺激DC表面分子表达水平与大肠杆菌LPS刺激最相近,显著强于未刺激DC,而灭活Cb、Cb LPS刺激DC表面分子CD83、CD40、CD80、CD86的表达在一低水平。结论LPS遮盖了Cb激活DC所需的表面分子,除去LPS后暴露的分子与DC相互作用,对DC的成熟刺激作用显著高于灭活Cb、Cb LPS的刺激作用。LPS的存在有利于贝氏柯克斯体逃逸宿主的免疫清除。
- 王颖吴德平王锡乐陈梅玲尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞表面分子流式细胞分析
- 贝氏柯克斯体感染小鼠血清与其毒力相关蛋白的免疫印迹反应
- 2008年
- 目的筛选与贝氏柯克斯体感染血清反应的贝氏柯克斯体毒力相关蛋白。方法以贝氏柯克斯体标准株九里株为模板,采用PCR扩增包括IV型分泌系统、分泌性蛋白和膜蛋白在内的毒力及毒力相关的基因,将扩得目的基因片段与原核表达质粒pET32a重组,将重组质粒转化大肠杆菌,用贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清与转化大肠杆菌作免疫印迹。结果设计173对引物共扩增出170个目的基因,经PCR及酶切鉴定,有155个基因与pET32a质粒重组成功,SDS-PAGE电泳分析发现,共有104个转化菌表达目的蛋白,在104个重组蛋白中,筛选到32个与贝氏柯克斯体感染小鼠血清反应的重组蛋白。结论这些与贝氏柯克斯体感染血清反应的毒力相关蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。
- 王锡乐陈梅玲吴德平孙长俭杨晓温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体毒力重组蛋白免疫印迹
- 立氏立克次体蛋白抗原基因表达和重组蛋白抗原免疫印迹分析
- 目的：表达立氏立克次体主要抗原基因，免疫印迹初步分析重组蛋白抗原的抗原性。
方法：根据立氏立克次体全基因组序列选出主要抗原相关基因，采用PCR从全基因组中扩增抗原相关基因，将扩得的基因片段插入原核表达质粒构建抗...
- 吴德平王颖王锡乐陈梅玲温博海
- 关键词：基因表达免疫印迹
- 文献传递
- 氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的安全性评价被引量：2
- 2009年
- 目的评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的安全性。方法分别用3批CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)致敏豚鼠,4w后用相同疫苗对致敏豚鼠作皮肤试验。结果CMRV致敏豚鼠与WCV致敏豚鼠的皮试点红肿大小在皮试后1～6d无显著差异,但是从第7d开始,差异显著。皮试后第14d采集接种部位组织做病理切片,WCV致敏豚鼠皮试点的表皮组织有局灶性变性、坏死,并见大量炎性细胞浸润。CMRV致敏豚鼠的皮试点组织基本正常,少数豚鼠偶见局灶性变性,但无坏死现象。3批CMRV致敏豚鼠皮试点组织病变程度相似,均显著轻于WCV致敏豚鼠。结论采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫副作用显著轻于灭活Q热疫苗,具有更好的安全性。
- 王锡乐熊小路邢洪光吴德平陈梅玲王世斌王颖温博海
- 关键词：Q热疫苗安全性
- 贝氏柯克斯体抗原诱导人树突状细胞活化的研究
- 贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)为Q热(Q fever)病原体,专性胞内寄生的革兰阴性嗜酸菌.树突状细胞(dendritic cells,DCs)作为吞噬细胞的一种,是体内专职的抗原提呈细胞,在启动和调...
- 王颖吴德平王锡乐熊小路温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞免疫功能
