吴晓伟
- 作品数：9 被引量：37H指数：5
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- 鸡Mx基因2032位点单核苷酸多态性研究被引量：5
- 2009年
- 研究采用错配PCIK-IKFLP的方法对15个品种鸡的Mx基因进行筛查，旨在探索不同鸡品种Mx cDNA第2032位点抗病基因A与易感等位基因G的多态性，为生产转基因鸡的可行性提供理论基础。结果表明：15个鸡品种Mx基因的2032位点存在A、G2个等位基因，AA、AG、GG3种基因型，其中鹿苑鸡、狼山鸡、斗鸡未发现AA型个体，茶花鸡、红色原鸡未发现GG个体；携带帆抗性基因A和易感基因G的比例分别是0．350、0．650：抗性等住基因A的检测比例为0．034～0．984。红色原鸡的抗性等位基因A基因频率（0．984）高于地方鸡种的抗性等住基因A的基因频率（0．321）；地方鸡种中的观赏型、蛋肉兼用型、肉用型、蛋用型鸡种的抗性等位基因A的基因频率分别为0．221、0．297、0．425、0．462。χ^2适合性检验表明，15个品种的鸡群均处于Hardy—Weinberg平衡状态。
- 吴晓伟范敏其倪黎纲程旭梅陈强田智泉李碧春
- 关键词：MX基因抗性基因单核苷酸多态性
- 温度、无血清培养对山羊卵母细胞体外成熟的影响被引量：3
- 2005年
- 在38℃和39℃不同温度条件下培养山羊卵母细胞,成熟率分别为63．6％和57．3％,差异不显著,说明只要培养温度在山羊正常体温的变动范围内,对其卵母细胞的成熟率没有影响。10 mg/mL BSA代替10％FCS培养山羊卵母细胞成熟率为58．7％,对照组为62．5％,差异不显著,说明无血清培养可以代替血清培养。
- 吴晓峰吴晓伟戴荣亮周俊波王杏龙
- 关键词：山羊卵母细胞体外成熟
- 猪皮肤组织块冷冻保存方法的研究被引量：7
- 2008年
- 以二甲基亚砜、甘油和乙二醇为冷冻保护剂,以3种浓度(10%、20%、30%)在2种降温条件下探讨适合猪耳皮肤组织冷冻保存的最适条件和方法以及复苏后对皮肤组织生长能力的影响。结果表明:快速冷冻条件下各处理均无组织块生长。慢速冷冻条件下复苏后组织块的存活率均为100%,各冷冻保护液3种浓度的平均生长率分别为14.29%、56.52%和8.70%,差异显著。20%甘油保护液下采用慢速冷冻方法复苏后组织块的生长率达82.35%,极显著高于其他组和对照组。新鲜和冻存后的细胞培养均采用组织块培养法,EDTA-牛血浆贴覆,97.78%的新鲜样本组织块能较好生长,且扩展能力强。
- 程旭梅倪黎纲吴晓伟孙鹏翔葛剑辉戴建明李碧春
- 关键词：冷冻保存体外培养
- 家鸡Mx基因多态性及其诱变修饰的研究被引量：7
- 2008年
- 研究采用错配PCR-RFLP的方法对家鸡14个品种的Mx基因变异性分布进行了探索;并利用PCR突变技术将Mx基因全长cDNA第2032位碱基由G突变为A(即631位氨基酸的改变),并将突变的Mx基因插入真核表达载体pcDNA3.0,转染COS-Ⅰ细胞,进行RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)鉴定,研究结果显示,14个品种Mx基因的2032位点存在2个等位基因(A、G),3种基因型(AA、AG、GG),其中鹿苑鸡、狼山鸡、斗鸡未发现AA型个体,茶花鸡未发现GG个体;并成功对Mx基因进行PCR诱变修饰和构建了能够表达鸡Mx基因的重组真核表达载体,为其体内外表达及生物学活性的进一步研究奠定了基础。
- 李碧春吴晓伟倪黎纲刘铁铮
- 关键词：MX基因抗病性限制性片段长度多态性
- 山羊对不同植物蛋白质日粮养分的代谢利用研究
- 2008年
- 试验选用4只装有瘤胃瘘管、十二指肠瘘管的山羊,饲喂不同植物蛋白质的日粮(A、B、C、D4组),用全收粪尿法研究山羊在不同蛋白质日粮下对CP、CF、Ca、P和DE的影响。结果表明:①CP表观消化率,B组与C、D组均差异极显著(P<0.01),B组与A组差异显著(P<0.05),A组与C、D两组差异显著(P<0.05)。②CP表观生物学价值,B组最高,其余依次是D、C、A组,差异不显著(P>0.05)。③CF表观消化率,C组与D组差异显著(P<0.05)。④Ca的消化率,A组与D组差异极显著(P<0.01),与C组差异显著(P<0.05),而与B组无显著差异;B组与D组差异显著(P<0.05)。⑤P消化率,A组与B、C两组有极显著差异(P<0.01),B组和C组之间不存在显著差异,B组和D组之间有极显著差异(P<0.01),C组和D组之间有极显著差异(P<0.01)。⑥各组间DE差异不显著。
- 郭熠洁吴晓伟顾小卫王潍波赵国琦
- 关键词：山羊植物性蛋白代谢
- 鸡抗病毒Mx蛋白修饰及其真核表达载体的构建被引量：8
- 2008年
- 利用高保真RT-PCR的方法从Poly(I).Poly(C)诱导的鸡成纤维细胞总RNA中扩增出鸡全长MxcD-NA,扩增产物克隆到pMD19-T Simple载体上,利用PCR突变技术将其第2 032位的碱基由G突变为A,经克隆测序证实突变成功后,将已突变的Mx基因插入真核表达载体,通过PCR、酶切鉴定插入片段正确,提取质粒转染COS-Ⅰ细胞进行RT-PCR鉴定。结果表明:正确克隆了鸡Mx基因,并成功对该基因进行PCR诱变修饰,构建了能够表达鸡Mx基因的重组真核表达载体,为Mx基因体内外表达及生物学活性的进一步研究奠定了基础。
- 倪黎纲何先红余飞李碧春高波谢飞程旭梅吴晓伟
- 关键词：MX蛋白真核表达载体
- 鸡Mx-EGFP融合表达蛋白的细胞亚定位及其抗病毒活性研究被引量：1
- 2010年
- 为探索鸡Mx基因在细胞中表达的位置,以及Mx-EGFP融合表达时的抗病活性。构建了真核表达载体pcDNA3.0/EGFP-Mx,转染NIH-3T3细胞,通过报告基因EGFP的表达来定位Mx基因在细胞中表达的位置;通过抗VSV病毒试验来研究Mx-EGFP融合蛋白的抗病毒活性。结果显示,融合蛋白大部分在细胞质中表达,而细胞核中也有一部分表达;转染有质粒pcDNA3.0/EGFP-Mx的NIH-3T3细胞感染VSV病毒48h内,细胞没有发生病变;而只转染pcDNA3.0空载体的阴性对照组中,NIH-3T3细胞48h内已经发生病变。研究结果表明,Mx-EGFP融合蛋白主要分布在细胞质中,具有抗VSV病毒活性,能够延缓病毒感染病变时间。
- 田智泉倪黎纲吴晓伟任丽伟杨海燕孙敏丁爱军李碧春
- 关键词：MX基因VSV
- 人瘦素基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 为了获得大量的、可供试验研究和制作生物反应器的人瘦素蛋白,从人脂肪组织中提取总RNA,用RT-PCR法获得了编码人瘦素(leptin)167个氨基酸残基的cDNA序列,并克隆至载体pMD19-TSimple上进行序列分析。以克隆的人瘦素cDNA为模板,用特异引物扩增瘦素基因,经EcoRI和BamHI双酶切,定向插入高效原核细胞表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE检测。结果:用RT-PCR法扩增得到的cDNA片断序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank公布的人瘦素基因序列一致;SDS-PAGE分析基因表达产物,在20 ku处有一特异条带,说明重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达人瘦素蛋白。
- 陈强田智泉倪黎纲任利伟吴晓伟杨海燕孙敏李碧春
- 关键词：瘦素克隆瘦素基因原核表达
- 鸡Mx蛋白基因诱变修饰及抗病活性被引量：13
- 2008年
- 【目的】进一步研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸的变异与鸡群抗病性的相关性。【方法】本实验利用PCR突变技术将鸡Mx蛋白基因的全长cDNA第2032位的碱基由G突变为A(既631位氨基酸的改变),并将突变的Mx基因插入真核表达载体pcDNA3.0,重组表达载体转染COS-Ⅰ细胞后,进行RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)鉴定。【结果】对鸡Mx蛋白基因的cDNA进行PCR诱变修饰正确,构建了能够正确表达鸡Mx蛋白的重组真核表达载体;诱变修饰重组Mx蛋白对抗新城疫病毒(NDV)感染分析结果显示,重组Mx蛋白具有较强的抗新城疫病毒生物活性。【结论】为下一步研究鸡Mx蛋白的抗病机理与制备抗病转基因鸡奠定了坚实的基础。
- 倪黎纲吴晓伟程旭梅陈昊陈强宋成义徐琪李碧春
- 关键词：MX蛋白抗病毒活性新城疫病毒
