- 枯草杆菌RecQ解旋酶精氨酸指与HRDC结构域的功能研究
- RecQ解旋酶是一种重要的大分子代谢物质,对维持遗传物质的稳定性起到关键作用。研究发现RecQ解旋酶参与多种代谢过程,如DNA复制、修复、转录重组、核糖体组装、RNA拼接、蛋白翻译,端粒稳定等。虽然目前发现的RecQ解旋...
- 吴海丽
- 关键词：枯草杆菌蛋白表达蛋白纯化
- 文献传递
- Bacillus subtilis RecQ酶精氨酸突变体表达纯化及活性检测
- 2013年
- RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)RecQ解旋酶中精氨酸可能在其对ATP水解和结合中起到重要的作用。通过PCR以Bacillus subtilis 168中抽提的基因组DNA为模板扩增得到大小为1.5kb的RecQ基因片段,并用重叠PCR定点突变法将该RecQ基因中的精氨酸残基(arg319和arg322)分别进行单突变和双突变,并将野生型和突变型基因克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,所有目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,检测野生型和突变型蛋白的ATP水解活性。结果表明,Bacillus subtilis RecQ解旋酶具有DNA依赖性和蛋白浓度依赖性的ATP水解活性。其arg319和arg322突变后,RecQ酶的ATP水解活性明显减弱,表明这两个精氨酸残基参与RecQ酶与ATP的相互作用。实验为RecQ解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。
- 吴海丽张三军杜冰钱旻任华
- 关键词：枯草芽孢杆菌蛋白表达蛋白纯化
- E.coliRecQ解旋酶克隆表达纯化及生物学活性检测被引量：4
- 2013年
- RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。通过PCR从E.coli DH5α菌株的基因组中扩增出E.coli RecQ基因并克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,应用生物化学和生物物理学技术研究E.coli RecQ解旋酶的生物学活性。结果表明,E.coli RecQ解旋酶具有DNA依赖性和蛋白浓度依赖性的ATP水解活性。在等蛋白质浓度下,E.coli RecQ酶结合DNA活性强弱依次为开叉dsDNA,ssDNA,平末端dsDNA。其还具有ATP依赖的dsDNA解链活性和时间依赖的DNA退火活性。实验为RecQ解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。
- 黄振蓉吴海丽张三军杜冰钱旻任华
- 关键词：蛋白表达蛋白纯化生物学活性
