吴诗坡
- 作品数：13 被引量：5H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 埃博拉病毒截短型糖蛋白GPdmucin的表达与纯化
- 2017年
- 目的:确定黏蛋白区缺失的埃博拉病毒包膜糖蛋白(GPdmucin)的最佳表达系统,并获得纯化的GPdmucin。方法:从埃博拉病毒的包膜糖蛋白(GP)全长基因上扩增GPdmucin序列,构建至pET32a、pFast Bac1和pcDNA3.4三种不同表达系统的质粒中,分别在原核、昆虫和哺乳动物表达系统中进行表达,并用特异抗体鉴定表达情况。结果:原核系统表达的GPdmucin不稳定,活性差;在昆虫表达系统中,GPdmucin在细胞内以不溶形式表达;利用Expi293瞬时蛋白表达系统,GPdmucin在哺乳动物细胞中可溶性表达,Ni柱亲和层析获得的目的蛋白纯度达90%以上,且与特异抗体具有很好的结合活性。结论:获得哺乳动物细胞表达系统表达的GPdmucin蛋白,将用于GPcl的制备、GP抗体筛选、疫苗效果评价及病毒致病机理的研究。
- 范鹏飞迟象阳宋小红房婷吴诗坡陈旖王潇霖张冠英于长明陈薇
- 关键词：埃博拉病毒生物学活性
- 3株肠道病毒71型毒株的全基因组序列分析
- 2013年
- 目的:对获得的3株肠道病毒71(EV71)型毒株进行全基因组序列测定,并对其进化特点及分型进行初步分析。方法:提取病毒RNA,反转录得到cDNA,PCR分段扩增覆盖病毒全长序列的6个重叠片段(不包括多聚腺苷酸尾);用软件将3株EV71的各片段序列进行拼接、编辑和校正,随后进行氨基酸翻译及序列比较;用MEGA4.1软件构建系统进化树。结果:获得了3株EV71的全长序列:GDV103株基因组全长7404 nt,包括741 bp的5'端非编码区(UTR)、6582 bp的病毒基因组编码区(ORF)及81 bp的3'UTR;安徽株(Anhui2007)基因组全长7405 nt,包括742 bp的5'UTR、6582 bp的ORF及81 bp的3'UTR;VR1432株基因组全长7408 nt,包括743 bp的5'UTR、6582 bp的ORF及83 bp的3'UTR长。经同源性比对和进化树分析,证实GDV103和安徽株EV71属于C基因型的C4基因亚型,而VR1432株则属于C基因型的C2基因亚型。结论:获得了3株EV71的全长基因组序列,并进一步探讨了其型别,为下一步的干扰素保护实验奠定了基础。
- 刘颖樊红艳赵兴卉张晓鹏于蕊吴诗坡张哲付玲侯利华
- 关键词：肠道病毒71型全基因组
- 特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选
- 细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发...
- 赵陶然董韵竹张金龙吴诗坡侯利华赵兴卉徐俊杰陈薇
- 关键词：AML1-ETO白血病蛋白表达
- 文献传递
- 一种以人Ad5复制缺陷型腺病毒为载体的寨卡病毒病疫苗
- 本发明公开了一种能够表达寨卡病毒Env蛋白，并且密码子得到优化的核苷酸序列，所述序列可以与密码子得到优化的寨卡病毒prM蛋白以及prM蛋白内源信号肽融合，插入穿梭载体pDC316后，与辅助载体pBHGlox_E1,3Cr...
- 陈薇郭强侯利华吴诗坡宋小红付玲王步森张金龙
- 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的埃博拉病毒病疫苗
- 本发明公开了埃博拉病毒GP蛋白密码子优化的一种核苷酸序列，还公开了能够表达该核苷酸序列的人复制缺陷重组腺病毒及在制备预防埃博拉病毒病疫苗中的应用。所述核苷酸序列以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺...
- 陈薇吴诗坡侯利华宋小红张金龙付玲
- 一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白的单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白GP的单克隆抗体，所述抗体具有独特的CDR区，并具有独特的作用位点，计算机模拟分析及生物学实验结果证实所述抗体既作用于GP的NPC1受体结合区，同时也作用于GP的聚糖帽区域，通过...
- 陈薇于长明迟象阳范鹏飞侯利华李建民徐俊杰吴诗坡刘威岑宋小红陈旖张晓鹏房婷付玲
- 文献传递
- 基于重组腺病毒载体的烈性病原体疫苗研究
- 埃博拉病毒和炭疽芽孢杆菌均为A类生物战剂，可用于生物恐怖袭击。对此，非常有必要开发一种能快速引起免疫反应的疫苗以应付不时之需。在这里，我们以复制缺陷型重组腺病毒作为载体，制备了埃博拉和炭疽重组腺病毒，并在小鼠及大鼠模型上...
- 吴诗坡
- 关键词：腺病毒载体炭疽疫苗
- 文献传递
- 一种以人Ad5复制缺陷型腺病毒为载体的寨卡病毒病疫苗
- 本发明公开了一种能够表达寨卡病毒Env蛋白，并且密码子得到优化的核苷酸序列，所述序列可以与密码子得到优化的寨卡病毒prM蛋白以及prM蛋白内源信号肽融合，插入穿梭载体pDC316后，与辅助载体pBHGlox_E1,3Cr...
- 陈薇郭强侯利华吴诗坡宋小红付玲王步森张金龙
- 文献传递
- EV71抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3的核转位被引量：2
- 2013年
- 目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染对Ⅰ型干扰素信号通路中核转位复合物干扰素刺激基因因子3(ISGF3)核转位的影响。方法 Western印迹检测VR1432感染VeroE6对干扰素诱导的STAT1和STAT2磷酸化的影响。将pEGFP-C1-STAT1重组质粒转染Vero E6细胞,随后进行EV71感染以及IFN-α2b刺激,将细胞进行亚细胞分离检测ISGF3的核转位情况。结果 VR1432以感染复数(MOI)为1感染Vero E6细胞后未影响干扰素刺激的STAT1和STAT2的磷酸化;亚细胞分离后Western印迹检测磷酸化的STAT1,结果显示VR1432感染后,p-STAT1在细胞核内表达水平明显降低,说明EV71感染抑制了p-STAT1的核转位。结论 EV71感染抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3(STAT1/STAT2/IRF9)的核转位,从而影响干扰素效应途径中抗病毒蛋白的表达。
- 刘颖赵兴卉张晓鹏于蕊吴诗坡张哲戴萌萌付玲侯利华
- 关键词：肠道病毒71型干扰素I型信号通路核转位
- 4型腺病毒载体疫苗的构建
- 腺病毒是一种无包膜双链DNA病毒，以其滴度高，宿主范围广，无插入突变等优点被广泛用作疫苗和基因治疗的载体.5型腺病毒载体应用广泛，但是普存在的预存免疫对载体的抗原递呈效率产生了较大影响，如何解决预存免疫的问题成为腺病毒载...
- 王步森吴诗坡
- 关键词：腺病毒疫苗
- 文献传递
