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热激损伤对牛孤雌激活胚胎后续发育的影响: 2010年; 为了研究早期胚胎核与胞质对热激的应激反应,以及产生应激后二者之间的相互作用对胚胎体外发育、合子期激活基因的表达及胚胎细胞凋亡的影响。本研究将孤雌激活胚随机分为2组分别于38.5或41℃培养7h;随后将二者核进行置换,使用正常培养的胚胎与热激胚胎进行核置换,分别构建热激核-正常胞质重构胚以及热激胞质-正常核重构胚,检测了核质置换胚胎的体外发育率、合子激活基因的表达和胚胎凋亡情况。结果,当正常核移入41℃热激的卵胞质,重构胚的发育率显著下降;热激后的核质置换胚胎中存在合子基因激活不完全的现象,这种情况主要存在于热激胞质-正常核重构胚中;热激能诱导胚胎发生细胞凋亡,早期胚胎的胞质对热激更敏感,并在后期的诱导凋亡中起到主导作用。这些结果表明,虽然热激对核和胞质都有损伤,但胞质对热激损伤更为敏感。早期胚胎受到热激后导致发育能力降低的易感性主要是由胞质所引起的;早期胚胎受到热激可能会损伤到卵胞质中的母源因子,即使与正常核构成重构胚也依然会导致合子基因表达异常;并且胞质受到热激损伤会在热激诱导的凋亡机制中起到比核更大的作用。; 徐薇唐爽吕志一苏锋华松张涌; 关键词：热激核质相互作用凋亡

西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞体外培养被引量：6: 2005年; 用无菌手术法取健康的泌乳期西农萨能奶山羊的乳腺组织,用组织块法进行体外条件下的培养。基础培养液为D-MEM/F-12,含10%胎牛血清,添加EGF(0.01mg/L)、氢化可的松(1mg/L)、孕酮(1mg/L)、胰岛素-转铁蛋白-硒钠(5mg/L)、青霉素(0.05g/L)及链霉素(0.05g/L)。结果表明,获得良好的山羊乳腺上皮细胞原代培养物,传代培养细胞增殖旺盛,长势良好。; 高亚军唐爽孙苏军张涌; 关键词：乳腺上皮细胞西农萨能奶山羊体外培养

核质相互作用对供体核重编程的影响: 在农业生产和生物医学研究中,体细胞核移植都有着极其重要的应用,但是,克隆效率低下一直阻碍着体细胞核移植的进一步应用和发展。核移植的技术步骤较为复杂,很多相关的研究也一直围绕核移植操作流程中的受体卵母细胞的去核方法、融合过...; 唐爽; 关键词：核质相互作用重编程异种核移植; 文献传递

人胎盘TRAIL基因的cDNA克隆及序列测定被引量：1: 2005年; 　根据GeneBank(U37518)中TRAIL(肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)的cDNA序列,设计扩增引物。采用RT-PCR从人胎盘中扩增出TRAIL基因的全长cDNA。产物纯化后连至pGEM-TEasy载体,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆菌,酶切鉴定并进行序列测定。结果表明,本试验成功地克隆了TRAIL基因的1039bp全长cDNA。; 张明烽唐爽宋红卫张涌; 关键词：RT-PCR 人胎盘

山羊BLG基因5′调控序列克隆及其调控GFP基因细胞的表达被引量：3: 2005年; 通过PCR扩增出2.2kb的山羊β-乳球蛋白基因5′端的调控序列,包括第一外显子和第一内含子。测序结果表明,该序列与GenBank中登录序列相比,同源性为99.5%。用其替代表达载体pEGFP-c1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺细胞中的瞬时表达,结果发现该调控序列可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊乳球蛋白(BLG)基因表达调控序列的有效性。表明克隆的调控序列可用于乳腺生物反应器的研究。; 宋红卫郑月茂张明烽唐爽张涌; 关键词：山羊 Β-乳球蛋白基因 GFP基因

山羊β-酪蛋白基因调控区的克隆及启动子活性的检测被引量：1: 2007年; 为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点HindⅢ融合成一个长为6.7 kb的片段,用其替代表达载体pEGFP-C1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达。结果表明,克隆的GC 3.3、GC 4.3、GC 6.6 3个片段与GenBank中登录的山羊CSN2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了TATA box、GC island、CAAT box、SAR、AP1、Oct-1、Sm、Glyco、Pu-1、CAC等复合元件和转录翻译调节因子的作用位点,并且5′调控区可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊CSN2基因5′调控区的有效性,表明克隆的调控区可用于乳腺生物反应器的研究。; 郑艳玲唐爽张涌; 关键词：山羊调控区 PCR GFP基因

山羊基因组文库的构建研究: 2005年; 构建了山羊基因组文库,为筛选山羊乳蛋白基因,构建山羊乳蛋白基因定点整合的转基因敲入载体奠定基础.全血提取基因组DNA,Sau3AI部分酶切,分级分离回收15～23 kb片段,将片段插入Lambda BlueSTAR BamHI vector,连接并包装后,NotI酶切鉴定.结果表明,文库滴度为3.4×106;共得到1.7×106个有效克隆,插入片断长度在15～23kb范围,成功构建了西农萨能奶山羊基因组文库.; 唐爽安志兴张明烽宋红卫张涌; 关键词：基因组文库西农萨能奶山羊萨能奶山羊基因组文库 LAMBDA VECTOR 酶切鉴定

山羊基因组文库构建: 山羊是建立乳腺生物反应器的良好材料。近年来在转基因山羊研究方面取得了一定的进展。西农萨能奶山羊是在原种瑞士萨能奶山羊的基础上，经过五十多年精心选育而形成的我国优良奶山羊品种，具有个体大，产奶量高，适应性广，抗病性强的优良...; 唐爽; 关键词：西农萨能奶山羊基因组文库乳腺生物反应器山羊乳优良基因; 文献传递

亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响被引量：4: 2009年; 为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min。然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞)。各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率。分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数。结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05)。BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05)。另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05)。表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率。; 曹泽磊苏建民胡广卫王勇胜唐爽张涌; 关键词：卵母细胞体细胞核移植

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唐爽