宓怡德
- 作品数：6 被引量：38H指数：4
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 萤火虫荧光素酶基因在家蚕中的表达被引量：6
- 1994年
- 萤火虫荧光素酶Luciferase(EC1.13.12.7)在MgATP存在时,催化D-荧光素氧化脱羧,同时发出可见光,最大发射波长为562nm.总反应式如下:Luciferin+ATP+O_2(?)Oxyluciferin+AMP+PP_i+H_2O+hv医学中用荧光素酶测定ATP的含量,不仅简便、准确、而且灵敏,可以检测到10^(-14)mol/L水平的ATP.近年来分子生物学中应用荧光素酶基因作报道基因.应用现代检测仪器可以检测到10^(-19)mol的酶量,比检测CAT灵敏100—1000倍.
- 雷向东宓怡德袁中一李载平吴祥甫
- 关键词：基因基因表达萤科家蚕
- 利用家蚕生产慈姑蛋白酶抑制剂被引量：8
- 1995年
- 将慈姑蛋白酶抑制剂Ｂ（ＡｒｒｏｗｈｅａｄＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｂ，ＡＩＢ）基因插入转移载体ｐＵＢＭ—４中，得到重组转移载体ｐＵＢＭ（ＡＩＢ）；与Ｂｍ—ＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕细胞，经空斑纯化，得到不含多角体的重组病毒ＢｍＮＰＶ（ＡＩＢ）；感染家蚕幼虫，利用家蚕高效表达了ＡＩＢ，其表达量为１．０×１０５Ｕ／ｍＬ血淋巴，比活为３．２９×１０３Ｕ／ｍｇ。
- 季平张志芳何家禄宓怡德吴祥甫
- 关键词：家蚕核型多角体病毒
- 人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达被引量：8
- 1993年
- 人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
- 徐扬张洪涛宓怡德吴祥甫胡美浩
- 关键词：昆虫杆状病毒尿激酶原CDNA
- 应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原被引量：1
- 1995年
- 人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０￣６细胞．
- 周耐明宓怡德金伟李载平吴祥甫
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原昆虫细胞基因表达
