张瑞芹
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BCG对小鼠RAW264.7巨噬细胞miR-203、miR-142-3p、miR-21表达的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:检测卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)刺激巨噬细胞后miR-203、miR-142-3p、miR-21表达量的变化,为研究microRNA(miRNA)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌免疫应答中的调控作用提供依据。方法:利用浓度为1.0×107ml-1的BCG刺激培养的小鼠RAW264.7细胞,分别在4、8、12、24小时提取细胞small RNA,并利用相应的茎环反转录引物,反转录成cDNA,同时构建成熟miR-203、miR-142-3p、miR-21的T载体,绘制标准曲线,利用Real-Time PCR检测miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达量。结果:BCG作用RAW264.7细胞4、8、12、24小时后,miR-21表达显著性上调(10倍以上,P<0.05),miR-142-3p表达显著性下调(20倍以上,P<0.05),miR-203在4、8、12小时表达下调(3倍以上,P<0.05),24小时后表达上调(2倍以上,P<0.05)。结论:BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达发生显著性变化,说明这些miRNA可能通过调控免疫相关基因在巨噬细胞抗结核分枝杆菌的免疫应答中发挥着重要的作用。
- 张兆波魏军汤建中赵志军张一琳张瑞芹徐广贤
- 关键词：MIRNABCGPCR
- 结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。
- 张瑞芹汤建中贾伟魏军张一琳张一琳
- 关键词：结核分枝杆菌基因克隆原核表达
- 结核分枝杆菌PPE37蛋白对RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA表达的影响
- 目的结核分枝杆菌全基因组测序完成后，研究者发现PE和PPE家族基因占结核分枝杆菌编码区的10％，并且在致病分枝杆菌与非致病的分枝杆菌中存在差异表达。PPE家族中的PPE37蛋白同时位于结核分枝杆菌毒力有关的RD区。本论文...
- 张瑞芹
- 关键词：结核分枝杆菌RAW264.7巨噬细胞
- 文献传递
- 结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化并复性。利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析。分别用浓度为100ng/mL、500ng/mL、5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24h、48h、72h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量的变化。结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50kDa。经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2%,并成功的进行了蛋白复性。浓度分别为100ng/mL,500ng/mL,5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF-αmRNA的表达没有影响(P>0.05),而IL-6mRNA的表达上调(P<0.05);48h、72h后NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应。
- 张瑞芹汤建中赵志军贾伟魏军张一琳张兆波徐广贤
- 关键词：结核分枝杆菌
