徐大伟
- 作品数：18 被引量：46H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：6
- 2010年
- 本研究用纯化的H9N2亚型禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的杂交瘤细胞:3G8、2F6、5F2。间接ELISA方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达106以上。构建了真核表达载体pCAGGS-M1并转染于MDCK细胞,以用于腹水的Western blot和间接免疫荧光鉴定。间接免疫荧光结果表明,3株单克隆抗体皆与真核表达蛋白M1反应。这些单克隆抗体的制备为后期研究M1蛋白在流感病毒复制与出芽过程中的重要生物学功能奠定了基础。
- 戴晓光滕巧泱黄海碧王朝霞张树梅张旭徐大伟申之义李泽君
- 关键词：H9亚型禽流感病毒单克隆抗体间接免疫荧光蛋白免疫印迹法
- 密码子优化对鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗免疫应答的增强作用
- 2012年
- 为提高DNA疫苗用于预防鸭坦布苏病毒病的免疫原性,将鸭坦布苏病毒的E基因密码子改造为鸭偏嗜的密码子,并将其作为免疫原基因克隆到pCAGGS载体中,构建真核表达质粒pCAGGS-OptiE。将pCAGGS-OptiE和先前构建的编码野生型E基因的表达质粒pCAGGS-E分别转染293T细胞,用间接免疫荧光和Western-blot检测E蛋白的表达情况。结果显示,密码子优化的重组质粒的蛋白表达量明显高于野生型质粒。将重组质粒pCAGGS-OptiE和pCAGGS-E用脂质体包裹后分别尾静脉注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测抗体的产生情况。结果显示,质粒pCAGGS-OptiE诱导的抗体水平明显高于pCAGGS-E,表明密码子优化的E基因能够提高蛋白的表达水平,进而增强机体免疫应答反应。
- 徐大伟李国新李雪松李云章李泽君
- 关键词：DNA疫苗E基因密码子优化
- 犬子宫蓄脓的诊断及手术疗法
- 犬子宫蓄脓症是成年母犬的常见疾病，笔者描述了2009年3月-2009年6月期间诊断的6例此病诊疗过程，着重记述此病的常规诊断、发病过程和治疗方案，结果显示，犬子宫蓄脓的保守疗法疗程长，效果不确实，手术疗法虽然存在一定的危...
- 徐大伟杜山王哈申其木格李云章
- 关键词：子宫蓄脓手术疗法
- 文献传递
- 高效表达HA蛋白的重组流感病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种PR8重组流感病毒及其制备方法和应用，所述重组流感病毒含有H1、H3、H4、H5，H6、H7、H9或H10亚型流感病毒的HA和/或NA基因、含有PR8病毒的6个内部基因(PB1，PB2，PA，NP，M，N...
- 李泽君滕巧泱周洁文徐大伟
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗构建及免疫原性的初步研究被引量：15
- 2012年
- 鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染引起产蛋鸭产蛋急剧下降。目前,没有预防该病的疫苗。为研究DTMUV DNA疫苗的免疫效果,本研究将DTMUV的E基因插入pCAGGS载体,构建了重组质粒pCAGGS-E。将pCAGGS-E转染293T细胞后,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot检测E蛋白的表达情况。结果显示,两种方法均检测到了E蛋白的特异性表达。将pCAGGS-E用脂质体包裹后通过尾静脉注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测抗体的产生情况。结果表明,随着免疫次数的增加及免疫时间的延长,免疫小鼠的抗体滴度逐渐升高。本研究证明,编码E基因的重组质粒DNA免疫小鼠后能够诱导有效的免疫应答,为DTMUV DNA疫苗的研究奠定了基础。
- 徐大伟李国新李雪松姬希文李云章李泽君
- 关键词：DNA疫苗E基因
- 高增殖性能犬流感CIV-PR8重组病毒的制备被引量：2
- 2012年
- 为获得高效表达犬流感病毒(CIV)HA和NA抗原的疫苗株,本实验通过反向遗传操作技术将A/canine/Zhejiang/01/2010(H3N2)犬流感病毒(简称ZJCIV)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒(PR8)的6个内部基因进行重组,拯救并获得了一株重组病毒CIV-PR8。分别用含100 EID50的CIV-PR8和ZJCIV感染SPF鸡胚,含2×103TCID50的CIV-PR8和ZJCIV感染MDCK细胞,不同时间段取病毒样品测定血凝效价和TCID50值。两者比较表明,CIV-PR8分别在接种后36 h和48 h时血凝效价达到峰值,鸡胚尿液中效价可达210,为野生病毒株的16倍;细胞上清血凝价可达28,为野生病毒株的4倍;病毒增殖曲线表明通过鸡胚扩增和细胞扩增,CIV-PR8的滴度均高于野生病毒株ZJCIV。结果表明,拯救的CIV-PR8增殖能力明显高于野生病毒株ZJCIV,该重组病毒有望成为犬流感疫苗研制的候选病毒株。
- 周洁文滕巧泱闫丽萍边延峰张旭徐大伟石迎周雨霞李泽君
- 关键词：血凝效价病毒滴度
- 表达3个外源基因真核表达载体的构建被引量：5
- 2011年
- 为构建可以同时表达3个外源基因的真核表达载体,本实验以pCAGGs载体为骨架,引入SV40启动子及单疱疹病毒(HSV)TK基因的polyA序列,并且在β-actin启动子下游插入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建了能够同时表达3个外源基因的真核表达质粒pCAGGs-IRES。本研究将PR8流感病毒的M基因、绿色荧光蛋白基因EGFP及H1N1猪流感病毒的HA基因,分别克隆于pCAGGs-IRES载体的3个启动子下游,转染细胞后,通过间接免疫荧光和western blot表明本实验构建的pCAGGs-IRES载体能同时表达3个外源基因。该载体有望为基因疫苗、基因操作及蛋白质相互作用等研究提供新的真核表达载体。
- 张树梅黄海碧滕巧泱闫丽萍颜丕熙徐大伟戴晓光张旭呼和巴特尔李泽君
- 关键词：基因表达
- 骆驼喉蝇蛆病的研究进展
- 2009年
- 骆驼喉蝇蛆病是由骆驼喉蝇(Cephalopina Titillator)的幼虫感染引起的一种重要寄生虫病,幼虫主要寄生在骆驼鼻腔的鼻甲、咽喉和额窦等部,蝇蛆在整个寄生期间均有致病作用。此病由于死亡率较低未引起我国骆驼养殖户的足够重视,但其较高的感染率多年来给养驼业造成较大危害,严重影响着牧民的经济收入。近年来,许多学者对骆驼喉蝇蛆病进行了深入研究,本文针对该病的病原、流行病学、免疫学、生活史、病理学等方面进行了简要的概述,为进一步研究提供资料。
- 石丽华赵治国杜山徐大伟李云章
- 关键词：寄生虫病
- 犬子宫蓄脓的诊断及手术疗法
- 犬子宫蓄脓症是成年母犬的常见疾病,笔者描述了2009年3月～2009年6月期间诊断的6例此病诊疗过程,着重记述此病的常规诊断、发病过程和治疗方案,结果显示,犬子宫蓄脓的保守疗法疗程长,效果不确实,手术疗法虽然存在一定的危...
- 徐大伟杜山王哈申其木格李云章
- 关键词：子宫蓄脓手术疗法
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒与鸭坦布苏病毒的生物学特性研究及疫苗的初步研制
- H9N2亚型禽流感病毒在全世界流行广泛,危害巨大。通常该亚型禽流感病毒为低致病性,感染禽类后不会引起大批死亡。但最近发现感染该亚型病毒的禽类死亡率很高,应用多聚酶链式反应/(PCR/)方法诊断,发现感染本病禽类脏器中同时...
- 徐大伟
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型生物学特性疫苗
- 文献传递
