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徐建军: 作品数：37 被引量：198H指数：8; 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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溶酶体相关四次跨膜蛋白B（LAPTM4B）转录调控机制研究: ＜正＞背景和目的:溶酶体相关四次跨膜蛋白（1ysosome-associated protein transmembrane 4beta,LAPTM4B）（GenBank AC:AY057051）是由我国科学家首先发现的...; 张濛徐建军张青云

人uPA基因克隆和单克隆抗体的制备及其在乳腺癌中表达的检测被引量：1: 2009年; 目的克隆人尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)基因,制备和鉴定针对人uPA的单克隆抗体,检测uPA在乳腺癌中的表达。方法利用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MDA231总RNA中扩增克隆uPA基因,构建可表达uPA蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达GST-His-uPA融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合及次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养,并进行三次亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,纯化单克隆抗体。用Western blot、免疫组织化学等方法检测了uPA在乳腺癌中的表达。结果克隆了1 227 bp的uPA基因片段,构建了可表达uPA蛋白的原核表达质粒pET-41b-uPA;获得了3株能稳定分泌针对uPA的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为IgG2a,它们均能特异识别uPA,与其它蛋白无交叉反应。Western blot结果显示,该抗uPA单抗与GST-His-uPA融合蛋白及细胞中的天然uPA蛋白均能结合。免疫组织化学显示,该单抗在乳腺癌低侵袭低转移细胞系MCF7中呈阴性表达,而在乳腺癌高侵袭高转移细胞系MDA231中呈阳性表达,并且能与乳腺癌组织结合,呈强阳性反应。结论克隆了人uPA基因,通过原核表达体系制备并纯化了针对uPA的单克隆抗体,初步检测了uPA在乳腺癌细胞和组织中的表达,为深入研究uPA的功能和检测临床肿瘤组织及体液中的uPA奠定了可靠的基础。; 赵桂梅张青云王雅明徐建军; 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活物单克隆抗体乳腺癌免疫组织化学

人神经元特异性烯醇化酶在肿瘤细胞系中的表达检测及意义被引量：13: 2005年; 目的探讨从蛋白及细胞水平检测人神经元特异性烯醇化酶(NSE)在非神经内分泌性肿瘤细胞系中的表达及其意义。方法用NSE特异引物和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白印迹、免疫细胞化学(ICC)染色技术检测NSE在肿瘤细胞中的表达。结果从转录蛋白及细胞水平都能从黑色素瘤细胞株WM451和WM983A、前列腺癌高转移细胞株PC3M和低转移细胞株PC3、乳腺癌细胞株MCF7、结直肠癌细胞株HT29和SL180、胃癌细胞株MGC803中检测到NSE的表达,阳性率为100%。结论NSE除在神经内分泌细胞表达外,在肿瘤细胞亦有更为广泛的表达谱,其作为神经内分泌来源肿瘤标志物的作用值得深入研究。; 张青云徐建军王雅明; 关键词：肿瘤细胞系基因表达神经内分泌细胞肿瘤标志物

人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用被引量：4: 2007年; 目的克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人 PAI1的单克隆抗体,以检测 PAI1在乳腺癌中的表达。方法利用逆转录(RT)-PCR 方法从人乳腺癌细胞株MDA231总 RNA 中扩增克隆 PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达 MS2-PAI1融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫 BALB/C 小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体。利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析 PAI1在乳腺癌中的表达水平。结果克隆了1209 bp 的 PAI1基因全长片段。经 ELISA 双筛,获得2株能稳定分泌抗 PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为 IgG1,且均能特异识别 PAI1,并与其他蛋白无交叉反应。Wb 结果显示,该抗 PAI1单抗与 MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合。免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株 MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应。结论克隆了人 PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对 PAI1的单克隆抗体。初步检测 PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究 PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的 PAI1奠定了可靠基础。; 任芳张青云王雅明徐建军; 关键词：肿瘤

多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化: 2001年; 目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷酸缺陷性病毒 ;用该病毒转染大鼠REF 1细胞 ,并用G418筛选抗性细胞。通过Northernblot方法检查通读RNA的表达 ;通过细胞形态和软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果 :多聚腺苷酸化信号缺陷病毒PS可在CRIP包装细胞形成病毒 ;用该病毒感染大鼠REF 1细胞 ,可捕获下游宿主细胞序列 ;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的REF 1混合细胞中的部分细胞可使REF 1细胞集聚能力增强 ,在软琼脂中以集落式生长。结论 :多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染REF 1细胞后可通过表达病毒宿主通读RNA激活下游宿主序列使细胞发生转化。; 张青云李振甫王利民王雅明徐建军; 关键词：逆转录病毒细胞转化病毒

胶体金免疫层析技术检测食管癌患者血清中生存素的表达被引量：1: 2009年; 目的探讨生存素（survivin）胶体金免疫层析试纸条作为食管癌血清筛选方法的可行性。方法用survivin胶体金免疫层析试纸条检测158例食管癌和146名健康对照者血清标本，并评价其检测性能。结果制备直径20nm的胶体金溶液后，用不同浓度的survivin多抗标记胶体金溶液，确定最佳标记浓度12μg／ml。组装后survivin胶体金免疫层析试纸条检测临床血清标本结果显示，survivin在食管癌患者组中阳性率为51．9％（82／158），在健康对照组阳性率为15．1％（22／146），两组差异有统计学意义（χ^2=45．7，P〈0．05）。survivin阳性率在患者不同年龄组（42～54岁组47．1％，55～68岁组40．9％，69～81岁组63．9％）、不同性别组（男性患者组50．4％，女性患者组58．1％）、不同原发部位组（食管上段组56．3％，中段组46．1％，下段组32．1％）、不同分化程度组（高分化组56．3％，中分化组43．2％，低分化组32．7％）和淋巴结有无转移组（淋巴结转移组43．3％，淋巴结未转移组43．4％）的各组内差异均无统计学意义（χ^2分别为1．11、0．59、2．64、1．63和0．00，P均〉0．05）。survivin胶体金免疫层析试纸条敏感度51．9％（82／158），特异度84．9％（124／146），准确性67．8％（206／304）。结论survivin胶体金免疫层析试纸条操作简单，结果容易判定，可作为食管癌高发人群的筛选方法之一。; 宋燕张青云王雅明徐建军; 关键词：生存素试纸条胶体金免疫层析食管癌

抗人肝癌相关基因LAPTM4β胞内肽段单克隆抗体的制备与鉴定及其表达的检测: 2009年; 目的制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础。方法利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-N1-99,在大肠杆菌中表达融合蛋白GST-LAPTM4β-IC-N1-99。用纯化的蛋白LAPTM4β-IC-N1-99免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体(LAPTM4β-IC-N1-99McAb)。进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测LAPTM4β-IC-N1-99在肿瘤中的表达。结果诱导并纯化了重组GST-LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子质量约为32000;纯化得到LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子量约为10000。筛选出6株能稳定分泌抗LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体的杂交瘤细胞株(D7,B12,H2,H8,A9和A10),D7、H8、A10分泌抗体亚类为IgG1,B12、A9、H2为IgG2b。Western blotting鉴定显示,抗LAPTM4β-IC-N1-99单抗可与融合蛋白及细胞内LAPTM4β蛋白特异性结合,具有高度特异性。免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中LAPTM4β基因的表达。结论以纯化的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白免疫,获得了效价高、特异性好的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白的单克隆抗体,用其可检测到LAPTM4β肿瘤细胞中的表达,这为LAPTM4β蛋白的生物学功能研究奠定了基础。; 张瑞娟李琦张青云王雅明徐建军赵桂梅; 关键词：单克隆抗体杂交瘤

人神经元特异性烯醇化酶基因克隆及单克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 2005年; 目的研究建立克隆人神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法。方法用NSE特异引物,通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增NSE基因,构建重组质粒pGEMTNSE,并测序鉴定NSE基因序列。再将NSE基因定向克隆于原核高效表达载体pMS31b,当表达MS2NSE融合蛋白后,免疫BALB/C小鼠。并用常规杂交瘤技术,制备鼠抗人NSE单克隆抗体(NSEMcAb)。最后,采用免疫细胞化学(ICC)技术检测NSE在肿瘤细胞株中的表达。结果克隆岀全长1305bp的NSE基因,其表达的MS2NSE融合蛋白为57000,表达量142mg/L。获得2株能稳定分泌抗NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经检测其分泌抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a。ICC检测证明所得NSEMcAb能检测到肿瘤细胞中NSE的表达。结论成功克隆了NSE基因,并获得鼠抗人NSEMcAb,为深入研究NSE基因的表达提供了有力的工具。; 朱爱萍张青云王雅明徐建军; 关键词：NSE 单克隆抗体神经元特异性烯醇化酶 MS 定向克隆克隆人

荧光定量PCR检测血清微小RNA-21方法的建立及对乳腺癌诊断的初步应用被引量：9: 2011年; 目的建立一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,并初步探讨其对乳腺癌诊断的应用价值.方法用Trizol试剂提取血清总RNA.用茎环引物将miR-16（作为miR-21内参基因）与miR-21分别逆转录成相应cDNA.再用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR对cDNA进行扩增、检测.然后,通过信噪比（signal to noise ratio,SNR）分析试验的准确性；通过熔解曲线评价试验的特异性；通过标准曲线的R2评估试验的精确性；通过批内和批间差异计算试验的稳定性.另外,用自建方法检测33例乳腺癌患者、18例乳腺良性疾病和49名健康人群血清miR-21和miR-16水平,并根据乳腺癌组与健康对照组中miR-21相对表达量确定临界值,以评价其对乳腺癌诊断的敏感度、特异度.结果通过PCR退火与延伸在温度和时间上的优化,本试验所建立方法SNR≥99.36％；熔解曲线为单峰；标准曲线R3=0.994 8；批内CV＜ 1.5％,批间CV＜ 4％.以miR-16为内参,用自建SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳腺癌组、良性疾病组与健康对照组血清miR-21的相对表达量分别为20.83±18.18、20.86±10.11和9.33±4.44,经Kruskal Wallis检验,3组间表达量差异有统计学意义（x2=16.92,P＜0.001）,且健康对照组与乳腺癌组、健康对照组与良性疾病组间的差异均有统计学意义（Z值分别为-2.58、-4.42,P均≤0.01）,而乳腺癌组与良性疾病组血清miR-21表达量差异无统计学意义（Z=-0.51,P=0.608）.以miR-21相对表达量18.32为临界值,其对乳腺癌诊断的敏感度为51.5％（17/33）,特异度为93.9％（46/49）.结论建立了一种较敏感、特异、稳定的SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,该方法对乳腺癌的诊断可能有一定价值.; 李雪峰徐建军张青云; 关键词：聚合酶链反应微小RNAS

人抗-HBs Fab段基因的序列分析及表达被引量：35: 1995年; 对已建的噬菌体抗体库中分离的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现１９个克隆都具有相同的重链可变区基因，轻链可变区基因有４个相同，其余１５个未进行序列测定。ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ、ＪＨ分属ＶＨＶＨⅢ和ＪＨ６，Ｄ段为二个Ｄ基因的融合，ＶＫ，ＪＫ属于ＶＫＩ和ＪＫ４。; 王琰刘群英徐建军王雅明陈竞华; 关键词：HBSAG 噬菌体抗体

徐建军

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