- RNA干扰技术及其在心脑血管疾病中的应用
- 2013年
- RNA干扰(RNAi)是外源和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象。RNAi过程分为三个阶段,即起始阶段、效应阶段及扩增阶段。RNAi是一种高效特异性的阻断基因表达的基因阻断技术,不仅在生物学功能方面起到作用,如病毒防御,抑制转座子的转座,保护基因组的稳定性,以及调节基因表达,在医学领域也有着广泛的应用,包括高血压、心肌病变、心力衰竭及脑血管疾病等。
- 徐莹和姬苓孙洪英
- 关键词：RNA干扰心肌病变心力衰竭脑血管疾病
- RNA干扰抑制大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原表达的实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的 研究RNA干扰技术对大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原（AGT）表达的抑制。方法构建携带AGT基因特异短发夹RNA（shRNA）编码序列的质粒载体,与脂质体转染剂以最佳配比复合,转染传代3~5代的大鼠主动脉细胞,于转染后24 h、48 h、72 h在倒置荧光显微镜下检测转染效率,采用RT-PCR法检测AGT mRNA的表达水平,应用BCA蛋白定量试剂盒来测定大鼠内皮细胞的蛋白浓度,应用Wwestern blot法检测转染前和转染后的大鼠主动脉内皮细胞AGT的蛋白表达。结果 （1）当质粒与脂质体转染剂TMETAFECTENE EASY＋以1∶4的最佳配比复合时,转染48 h时细胞转染效率最高为（67.25±2.49）%。（2）空白对照组、阴性对照组与干扰组转染后的大鼠主动脉内皮细胞的AGT mRNA相对表达量分别为100%、98.4%和24.3%,且干扰组的AGT mRNA相对表达量明显低于空白对照组、阴性对照组（均P〈0.05）。（3）大鼠内皮细胞的蛋白浓度的标准曲线方程为y=0.4563x,所提取的大鼠主动脉内皮细胞AGT的蛋白含量为0.0456~0.9126μg/μl。（4）转染p AGT-shRNA1、p AGT-shRNA2、p AGT-shRNA3、p AGT-shRNA4的AGT蛋白表达量分别为（0.11±0.02）、（0.12±0.03）、（0.14±0.01）、（0.14±0.08）;与空白对照组（0.58±0.07）和阴性对照组（0.52±0.04）相比,干扰组的AGT蛋白表达受到了明显的抑制（均P〈0.05）,抑制率分别为81.1%、79.3%、75.8%和75.9%。4种不同靶位点的质粒载体所干扰的表达之间无明显差异（均P〉0.05）。结论携带AGT基因特异shRNA编码序列的质粒载体p AGT-shRNA可以通过RNA技术特异性抑制大鼠主动脉内皮细胞的AGT基因的表达,为治疗缺血性脑血管疾病提供新的治疗方法。
- 和姬苓孙洪英杨国安徐莹敖媛媛张佳刘晶
- 关键词：RNA干扰基因沉默内皮细胞血管紧张素原缺血性脑血管疾病
