朱辉
- 作品数：11 被引量：31H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家林业局大熊猫国际合作项目陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 秦岭大熊猫IFN-γ基因的克隆、表达及免疫活性研究
- 干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ对机体免疫系统具有强大的调节作用,是机体发挥免疫功能、清除体内病原体...
- 朱辉
- 关键词：秦岭大熊猫IFN-Γ基因克隆生物学活性
- 文献传递
- 大熊猫秦岭亚种IL-2基因的克隆表达及其生物活性研究被引量：3
- 2009年
- 目的:明确大熊猫四川种群和秦岭种群IL-2在基因水平是否存在差异;得到具有具有生物活性的秦岭大熊猫IL-2原核表达产物。方法:采用RT-PCR方法从ConA诱导培养的秦岭大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到IL-2的cDNA片段,利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32a-IL-2,转入BL21(DE3)中,以IPTGBL21(DE3)表达IL-2融合蛋白。融合蛋白进行SDS-PAGE和Western blot进行鉴定及可溶性分析;用纯化的融合蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体;采用淋巴细胞增殖试验测定融合蛋白生物活性。结果:通过重组表达获得IL-2抗原蛋白,相对分子质量(Mr)为34000;免疫家兔得到特异性的抗IL-2抗体,该抗体能够检测细胞内源性IL-2蛋白的表达;融合蛋白具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性,并且它的这种作用可被本研究制备的多抗所抑制。结论:成功克隆了秦岭大熊猫IL-2基因,与四川大熊猫核苷酸同源性为99.4%表达了具有生物活性的融合蛋白。
- 乔琦马清义朱辉陈德坤
- 关键词：秦岭大熊猫IL-2克隆多克隆抗体生物活性
- 淹水水稻土中典型异化铁还原微生物群落结构分析
- 作为最早的生物能量代谢途径，Fe（Ⅲ）还原及其典型微生物以其特有的生态意义而越来越受到重视。本实验采用非种植淹水水稻土模式系统，研究采自吉林、天津、江西和宁夏等地区的4个水稻土中梭菌、芽孢杆菌和地杆菌随淹水时间的群落结构...
- 朱辉
- 关键词：群落结构DGGE
- 文献传递
- 秦岭大熊猫IFN-γ基因的表达及其生物活性分析被引量：3
- 2009年
- 【目的】探讨大熊猫秦岭种群和四川种群IFN-γ基因的差异,获得具有生物活性的秦岭大熊猫重组γ干扰素蛋白。【方法】采集秦岭大熊猫血样,采用RT-nested PCR技术扩增秦岭大熊猫IFN-γ基因,将其克隆到表达载体pET32a中,转入DH-5α,进行菌液PCR和双酶切鉴定,经序列测定与分析,构建表达质粒pET32a-IFN-γ,将其转入BL21(DE3)受体菌后,用IPTG诱导表达秦岭大熊猫IFN-γ蛋白。对重组IFN-γ蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析后,用镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白。采用淋巴细胞增殖试验检测重组IFN-γ的活性。【结果】大熊猫秦岭种群和四川种群的IFN-γ基因序列在434位核苷酸处存在差异,秦岭大熊猫的为G,而四川大熊猫的为C;氨基酸序列相同。重组IFN-γ主要以可溶性形式存在,其分子质量为35.3 ku,约占菌体总蛋白的20%;纯化的可溶性蛋白经SDS-PAGE分析,纯度可达90%以上;重组IFN-γ具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。【结论】获得的重组IFN-γ蛋白表达量高且具有生物学活性。
- 朱辉马清义乔琪朱小甫陈德坤
- 关键词：秦岭大熊猫IFN-Γ基因基因表达生物活性
- TAK免疫增强剂对奶牛乳房炎的疗效观察被引量：8
- 2003年
- 根据临床症状及应用亚临床乳房炎快速诊断试验检出试验用奶牛。将确诊的泌乳期临床乳房炎奶牛 10头设为 A组 ,干奶期临床乳房炎奶牛 8头设为 B组 ,泌乳期隐性乳房炎奶牛 18头设为 C组 ,C组中另设肌肉注射组 (肌注组 6头 )、乳房注射组 (乳注组 6头 )及对照组 (6头 )。用 TAK免疫增强剂进行治疗试验 ,A,B组的给药途径为肌肉注射 ,每次每头 10 m L / d;C组肌注组给药方法同 A,B组 ,乳注组在每个患病奶牛乳区注射 ,剂量为每乳每区 10 m L / d。临床乳房炎治愈效果以患病奶牛临床症状消失作为主要指标 ,隐性乳房炎奶牛采用称量法测定每头奶牛不同时期的日均泌乳量 ,并用 BMT诊断液检测治疗效果。治疗试验结果表明 ,TAK免疫增强剂对临床乳房炎特别是泌乳期临床乳房炎奶牛治愈率达 80 % ,对干奶期奶牛治愈率为 37.5 % ,对隐性乳房炎奶牛也有较好的疗效 ,尤其可使肌注组奶牛产奶量明显增加 ,且肌注组和乳注组乳头阳性率分别比治疗前下降了 2 1.6 %和16 .7%。
- 陈德坤雷莉辉朱辉孔庆波王磊
- 关键词：奶牛乳房炎临床症状泌乳期
- 猪瘟流行毒株E2基因主要抗原区的原核高效表达被引量：1
- 2008年
- 【目的】构建猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)E2基因主要抗原区原核表达质粒载体,高效表达E2蛋白,为进一步研究E2亚单位疫苗提供物质基础。【方法】用RT-nested PCR技术扩增CSFV流行毒株SX-YL株E2基因主要抗原区,克隆于表达载体pET32a中,成功构建表达质粒pET32a-E2,将pET32a-E2转入BL21(DE3)受体菌并用IPTG诱导表达E2蛋白,对E2蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析和可溶性鉴定。【结果】CSFVE2基因得到了高效表达,表达蛋白量占菌体蛋白量的33.2%,表达蛋白E2主要以包涵体形式存在;免疫印迹分析结果表明,表达蛋白E2能识别天然猪瘟多克隆抗体。【结论】E2蛋白表达量高并具有生物学活性。
- 朱小甫董志强朱辉张文丽乔琦吴旭锦陈德坤
- 关键词：猪瘟E2基因原核表达
- 1株山东猪瘟病毒流行毒株全基因组的克隆与序列分析被引量：4
- 2009年
- 【目的】对分离自山东的猪瘟病毒流行毒株SD02进行全基因组序列克隆分析,揭示SD02分子生物学特征,为猪瘟流行毒株分子流行病学研究积累资料。【方法】根据Genbank上发表的古典猪瘟Shimen毒株及HCLV株全基因序列,参考有关文献合成12对引物,应用RT-PCR技术,从SD02毒株的细胞毒中成功扩增出了11段cDNA,将这11段cDNA与pMD18-T载体连接并进行克隆、测序,测得的序列经过拼接得到全基因组序列。将SD02与13株参考毒株(39、ALD、Alfort187、Brescia、CAP、Glentorf、GPE、GXWZ02、HCLV、LPC、Parderborn、Riems和Shimen)的核苷酸序列及开放阅读框架编码的氨基酸序列进行比较。【结果】拼接后SD02全长12300bp,SD02与13株参考毒株的核苷酸序列同源性为85.4%～99.1%;氨基酸序列同源性为92.5%～98.8%。SD02与我国Shimen经典强毒株核苷酸序列同源性高达99.1%,氨基酸序列同源性为98.8%。系统发生树分析表明,SD02与Shimen、HCLV、Riems、Glentorf、Alfort187、ALD等毒株同属于GroupⅠ。【结论】SD02毒株在遗传特性和抗原性上仍属于经典毒株。
- 吴旭锦朱小甫朱辉
- 关键词：猪瘟病毒全基因组
- 一起猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染病例分析
- 本文介绍了一起猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的病例的临床症状、病理变化、实验室诊断及处理措施，通过处理，45头发病猪最终有21头恢复，能够恢复的病猪主要是处于发病初期，症状较轻。仍有24头陆续死亡，这是由于治疗...
- 朱小甫吴旭锦朱辉
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒病例分析
- 文献传递
- 用分子标记鉴别猪瘟病毒疫苗毒株和流行毒株被引量：8
- 2009年
- 建立一种检测CSFV的套式RT-PCR方法,旨在鉴别CSFV疫苗毒和流行毒。根据GenBank上公开发表的CSFV全基因序列,设计并合成了2对引物,建立了检测CSFV的套式RT-PCR方法,并对疫苗毒、SXYL株和SX01株扩增片段进行了序列测定和分析。结果表明,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为3.4×10-5ng/mL;特异性检测发现从PRRSV、SIV、PCV2和PRV阳性毒未扩增出特异性条带。序列分析表明,只有疫苗毒3-′NCR存在分子标记CTTTTTTCTTTT,SXYL株和SX01株均没有这一标记。建立的检测CSFV的套式RT-PCR方法灵敏度高,特异性强,是一种可行的检测方法。通过目的片段的序列分析,寻找分子标记CTTTTTTCTTTT,可以准确鉴别CSFV疫苗毒和流行毒。
- 鲁建民虎文君朱辉
- 关键词：猪瘟病毒套式RT-PCR分子标记
- 不同年龄犬红细胞培养上清对淋巴细胞增殖的作用被引量：3
- 2008年
- 【目的】测定不同年龄犬红细胞刺激淋巴细胞增殖的能力，探索红细胞的免疫功能及其实现方式。【方法】无菌采取1～3月龄幼犬及18～20月龄成年犬的犬肝素抗凝血，分离红细胞，制备5．0×10^7mL。红细胞悬液，接种在24孔细胞培养板中培养56h后，收集红细胞上清；采用淋巴细胞转化增殖试验，分析了红细胞培养上清液单独及协同刀豆蛋白A（ConA）对淋巴细胞转化增殖的影响。【结果】无论自体或是异体，幼犬的红细胞培养上清对淋巴细胞的刺激效果均明显优于成年犬（P〈0．05）；无论幼犬还是成年犬的红细胞培养上清，其自体刺激淋巴细胞增殖的效果均明显优于异体（P〈0．05）。【结论】幼体红细胞参与T细胞免疫调控的作用强于成年个体，这对于幼体免疫系统的快速发育成熟非常有益。
- 张文丽乔琦朱辉陈德坤
- 关键词：红细胞培养上清淋巴细胞
