杨凤娇
- 作品数：18 被引量：25H指数：5
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金贵州省科技厅社会发展攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 猪带绦虫重组Bb—TS045W-4B—TSOL18疫苗诱导仔猪的保护性免疫应答被引量：4
- 2015年
- 目的探讨猪带绦虫重组Bb．TS045W-4B．TSOL18疫苗免疫仔猪后，对猪带绦虫卵攻击感染后的保护性免疫应答。方法将20头40日龄健康仔猪按体质量（约15kg）采用随机数字表法分为5组，每组4头。分别为重组b-TS045W．4B—TSOL18疫苗灌胃组、重组Bb—TS045W-4B疫苗灌胃组、重组Bb-TSOLl8疫苗灌胃组、空载体对照组和双歧杆菌液体培养基（MRS）对照组。各疫苗的免疫剂量为1×10“菌落形成单位（CFU），间隔2周免疫1次，共免疫2次。于末次免疫仔猪4周后，各组仔猪用猪带绦虫卵攻击感染，攻击感染后3个月剖杀仔猪，分离猪囊尾蚴，计算减蚴率；前腔静脉取血，分离血清和制备外周血淋巴细胞（PBMC）。酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测血清免疫球蛋白（Ig）G、IgGl、lgG2a水平和PBMC培养上清液中白细胞介素（IL）．2、干扰素（IFN）．1、IL4及IL-10水平；四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测PBMC增殖情况。结果猪带绦虫重组Bb．TS045W．4B．TSOLl8、重组Bb—TS045W．4B、重组Bb—TSOLl8疫苗灌胃组减蚴率分别为83．09％、71.36％和74．85％。仔猪血清IgG、IgGl和IgG2a水平组间比较差异均有统计学意义（F=132．348、106．336、596．091，P〈0．05）。其中重组Bb-TS045W-4B-TSOL18、重组Bb-TS045W-4B、重组Bb．TSOL18疫苗灌胃组IgG、IgG2a水平[（366．81±3．84）、（334．94±11．65）、（333．52±11．09），（87．74±0．95）、（84．48±0．80）、（84．30±1．09）mg／L]均高于MRS对照组[（245．94±8．81）、（62．61±0．84）mg／L，P均〈0．05]，IgGl水平[（26．55±1．06）、（33．24±1．92）、（32．60±1．94）mg／L]低于MRS对照组[（42．78±0．87）mg／L，P均〈0．05]。仔猪PBMC培养上清原液中IL-2、IFN-1、IL．4和IL．10水平组间比较差异均有统计学意义（F=139．522、1053．102、769．097、962．298，P均〈0．05）。其中重组Bb．TS045W．4B．T
- 贾启刘美辰周泠杨凤娇江楠王灵军周必英
- 关键词：猪带绦虫保护性免疫应答仔猪
- 猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗不同保存条件下的稳定性研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组双歧杆菌(Bb)疫苗在不同保存条件下的稳定性。方法分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4BTSOL18电转入长双歧杆菌(B.longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEXTSO45W-4B-TSOL18/B.longum,分别置于不同条件下保存,取出菌液,抽提质粒,电泳检测,进行稳定性分析。结果阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum分别在常温下、4℃、-20℃、-80℃、-196℃(液氮中)分别保存48h、1周、1月、2月,抽提质粒,电泳发现阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum在液氮中、-80℃、-20℃中比较稳定,而在普通的室温环境下,很快发生质粒丢失现象。结论猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组Bb疫苗低温保存最稳定,常温最差,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫稳定性
- 猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗诱导仔猪保护力及其免疫机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗,研究该疫苗诱导仔猪产生的保护力及其免疫机制。方法以猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗1×1011 CFU灌胃免疫40日龄健康仔猪,同时设空载体对照组和双歧杆菌液体培养基(MRS)对照组,每组4头。每两周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫后4周,用猪带绦虫卵进行攻击感染,攻击感染后3个月解剖猪体,摘取囊尾蚴,计算减蚴率;前腔静脉取血,分离血清和制备外周血淋巴细胞(PBMC)。酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测血清IgG、IgG1、IgG2a水平和PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测PBMC增殖情况。结果猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗免疫仔猪获得71.36%的保护力;与空载体对照组和MRS对照组比较,血清IgG和IgG2a水平显著升高(F=95.055、650.293,P<0.05),IgG1水平显著降低(F=78.422,P<0.05);加抗原刺激时,PBMC增殖水平显著升高(F=107.019,P<0.05);PBMC培养上清液中IL-2和IFN-γ水平显著升高(F=229.668、2251.690,P<0.05),IL-4和IL-10水平显著降低(F=274.832、1168.768,P<0.05)。结论猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗能够诱导仔猪产生一定的保护力,其中Th1型免疫应答在其诱导的保护性免疫机制中起重要作用。
- 江楠刘美辰周泠杨凤娇贾启王灵军周必英
- 关键词：猪带绦虫保护力免疫机制仔猪
- 猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法:将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B电转化入长双歧杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析表达情况。结果:酶切、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序证实,重组质粒p GEX-TSO45W-4B成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为40 k D,经谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)亲和层析后可获得纯度为85%以上的重组蛋白。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗TSO45W-4B血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论:猪带绦虫TSO45W-4B基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫长双歧杆菌
- 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性研究被引量：5
- 2017年
- 目的研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性。方法将猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18电穿孔转化入卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG),获得猪带绦虫重组BCG-TSOL18菌株,实验设野生型BCG对照,连续培养10d,用分光光度计测定600nm处吸光度A值,绘制生长曲线;人工传代10次,通过PCR分析其稳定性。结果同期培养的野生型BCG与重组BCG-TSOL18第1~7d为对数生长期。培养10d时野生型菌株A600由0.09升至1.24,重组型菌株A600由0.11升至1.28。此后分别进入平台期,且略有下降,其A600分别降至1.12和1.15。重组BCG-TSOL18第1~10代菌落均经PCR检测到TSOL18目的基因,未发生TSOL18基因丢失。结论重组BCGTSOL18对数生长期为前7d,且能稳定遗传至少10代,为猪带绦虫重组BCG疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 江楠杨凤娇周必英
- 关键词：猪带绦虫稳定性
- 猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗人工传代后的稳定性研究被引量：5
- 2014年
- 目的研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌(Bb)疫苗人工传代后的稳定性。方法分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转入长双歧杆菌(Bifidobacteria longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/Bl、pGEX-TSOL18/Bl和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl,分别经人工传代10次后抽提质粒,进行PCR鉴定和稳定性分析。结果经PCR鉴定,从第7代开始,pGEX-TSOL18/Bl菌株出现质粒丢失的现象,随着培养时间的延长,质粒丢失现象越来越严重,第8代,第9代均出现丢失现象。而pGEX-TSO45W-4B/Bl菌株从第8代开始出现质粒丢失现象,随后的第9代,第10代也陆续出现丢失现象。pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl菌株相对稳定,但从第10代开始,开始出现了质粒丢失现象。结论重组质粒转化菌pGEX-TSO45W-4B/Bl、pGEX-TSOL18/Bl和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl人工培养时分别从人工传代培养第8代、第7代和第10代开始出现质粒丢失现象,可稳定遗传7代、6代和9代,显示具有不同程度的遗传稳定性,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫传代稳定性
- 贵州湄潭农村居民寄生虫感染与卫生习惯调查被引量：1
- 2015年
- 目的:调查贵州湄潭农村居民寄生虫感染与卫生习惯。方法:对湄潭兴隆镇、湄江镇农村居民227人进行现场问卷调查。结果:该县农村居民曾经感染寄生虫者达31.7%;未接受过任何寄生虫科普知识宣教的居民占42.7%;居民与家中饲养动物密切接触、喜生食蔬菜习惯及经常与别人共用餐具占不良卫生习惯前三位。结论:应加强贵州农村居民寄生虫病防治知识的卫生宣教工作。
- 任小红杨凤娇殷瑜霞裴显郭侃刘晖
- 关键词：农村居民寄生虫感染卫生习惯健康教育
- 贵州省医学科研单位专利情况调查被引量：4
- 2019年
- 目的在近几年我国加强自主创新能力建设政策驱动下,贵州省专利申请量猛增,本文通过对贵州省医学科研单位的专利申请及授权情况进行分析,对其存在的问题做出探讨,并提出对策。方法通过佰腾专利数据检索网站,对包括医学高等院校及其附属医院、医学高等专科学校、各级省市人民医院等贵州省医学科研单位的专利进行检索,从专利申请量、申请类型、技术构成、法律状态、法律事件进行分析,对专利申请存在的问题进行分析,并提出了相应对策。结果目前贵州省医学科研单位在专利申请上还存在量多质低、重申请轻维护、专利交易少、科研人员专利知识欠缺、专利咨询服务少等问题。结论可通过健全知识产权管理部门、加强信息素养教育、运行校企合作新模式、增设专利服务机构等方法解决上述问题。
- 苏炼杨凤娇
- 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导仔猪的保护性免疫应答
- 2017年
- 研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗免疫仔猪,猪带绦虫卵攻击后诱导其保护性免疫应答的情况。将12头40d龄健康仔猪均分为3组:分别为1011 CFU重组BCG-TSOL18疫苗灌胃组、BCG对照组和PBS对照组。每2周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫4周后用猪带绦虫卵进行攻击感染,3月后剖杀仔猪,分离囊尾蚴,计算减蚴率;取前腔静脉血,分离血清和制备外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cell,PBMC)。采用ELISA法检测血清IgG、IgG1及IgG2a水平以及PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10的水平;MTT比色法检测PBMC增殖水平。重组BCG-TSOL18疫苗免疫组猪带绦虫卵攻击后诱导仔猪获得79.44%的保护力。与BCG和PBS对照组比较,重组BCG-TSOL18疫苗组血清IgG、IgG2a水平显著升高(t=13.026,P=0.000;t=13.253,P=0.000;t=7.284,P=0.000;t=8.453,P=0.000),IgG1水平显著降低(t=-9.118,P=0.000;t=-10.372,P=0.000);抗原刺激下PBMC显著增殖(t=14.929,P=0.000;t=14.665,P=0.000);PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ水平显著升高(t=9.768,P=0.000;t=10.496,P=0.000;t=22.504,P=0.000;t=23.204,P=0.000),IL-4和IL-10水平显著降低(t=-18.659,P=0.000;t=-19.495,P=0.000;t=-26.258,P=0.000;t=-27.402,P=0.000)。猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗可诱导仔猪产生Th1型的保护性免疫应答,从而抵抗猪带绦虫卵的感染攻击。
- 周必英杨凤娇刘美辰周泠贾启江楠王灵军
- 关键词：猪带绦虫保护性免疫应答仔猪
- 猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,目的蛋白相对分子质量(Mr)约为41KD,与预期结果相一致。Western blot显示,目的蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSOL18基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的目的蛋白具有抗原性。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫TSOL18长双歧杆菌
