杨红波
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 反转录病毒介导的斑马鱼全基因组高效突变
- 我们发展了一套高效的斑马鱼反转录病毒插入突变技术。通过在斑马鱼胚胎中注射源于鼠莫勒氏白血病病毒的假型反转录病毒和 LM-PCR 技术定位病毒插入的位点等方法,我们可以得到大量携带有反转录病毒插入的斑马鱼。通过对～3000...
- 郑乃中王冬梅Li-En JaoKyle DolanJessica IveySeth ZoniesXiaolin Wu邬康迈杨红波孟庆超朱作言Shawn M．Burgess林硕张博
- 关键词：斑马鱼反转录病毒
- 文献传递
- 应用双荧光报告系统检测斑马鱼microRNA的动态表达被引量：2
- 2012年
- microRNA(miRNA)是一类细胞内源表达的小分子非编码RNA,主要通过降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻译,在动植物的发育以及其他重要的生理过程中起调控作用。miRNA的功能跟它的表达位置与时间密切相关,但是目前尚缺乏一个能够在活体与个体水平稳定、持续地实时观察miRNA动态表达的方法。文章以斑马鱼为模式,建立了一个双荧光报告系统(我们称之为miRNA Tracer),用于在斑马鱼整体胚胎中追踪特定miRNA的表达谱及动态变化过程。该系统以Tol2转座子为基础,采用来自斑马鱼hsp70基因的热激启动子分别驱动eGFP和mRFP1荧光报告基因,同时在其中一个报告基因的3′-UTR区连接待测miRNA的互补序列,构成Tracer质粒。该互补序列与斑马鱼胚胎中相应的内源miRNA结合后能够使对应报告基因的荧光信号强度减弱,通过比较两个报告基因在表达谱上的差异辨别miRNA的表达区域,检测斑马鱼胚胎中miRNA起作用的位置和时间。文章选择在肌肉系统特异表达的miR-206以及在神经系统特异表达的miR-219,分别在显微注射瞬时表达和转基因稳定整合等两个层次上验证了上述Tracer系统。结果表明,所用的方法能够如实地在单细胞水平和整体水平检测到目标miRNA的时空表达动态变化。miRNA Tracer系统为在斑马鱼发育过程中对miRNA进行活体、实时的时空定位提供了一个独特而有效的方法,也为对miRNA进行功能与作用机制等更深入的研究奠定了基础。
- 杨红波梁巍刘新星朱作言林硕张博
- 关键词：斑马鱼MIRNA
- COS-7细胞中小发卡RNA介导的RNA干涉被引量：5
- 2003年
- 利用U6启动子转录小发卡RNA介导的RNA干涉是最近发展起来的在哺乳动物细胞中特异性抑制指定基因表达的新技术 ,已有实验证明它在小鼠畸胎瘤P19等细胞系中具有强烈的抑制基因表达的作用。本文对COS 7细胞系中U6启动子转录GFP基因的小发卡RNA介导的RNA干涉现象进行了研究 ,结果表明 :U6启动子转录的小发卡RNA具有RNA干涉作用 ,即可以在COS 7细胞中特异性地抑制含有对应序列的基因GFP的表达 ,这一结果为今后在COS 7细胞系中利用RNA干涉技术研究目的基因的功能奠定了基础。
- 汤富酬杨红波孟国良李成建尚克刚张博薛友纺
- 关键词：RNA干涉COS-7绿色荧光蛋白
- 过小分子改变蛋白构象调控smoothened蛋白
- 七次跨膜蛋白 Smoothened(smo)是 Hedgehog(Hh)通路的一个重要组分,在胚胎发育和恶性肿瘤中发挥重要作用。在研究 Hh 通路相关的生物学过程中,方便的调控 Smo 蛋白的激活或者抑制很重要。利用依赖...
- 杨红波张博林硕
- 文献传递
- 以斑马鱼为模式筛选Hh通路的调节小分子及建立miRNA表达的活体分析方法
- 本论文的工作包括两部分，首先我利用小分子库在斑马鱼中筛选能够调节Hedgehog(Hh)通路的小分子。将Hh信号通路的下游转录因子Glil的特异性DNA结合位点重复8次后插入gata2基因的最小启动子前，以GFP为报告基...
- 杨红波
- 关键词：斑马鱼小分子化合物转录因子蛋白构象
