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潘福星: 作品数：10 被引量：6H指数：2; 供职机构：青岛农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域国家高技术研究发展计划现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

合作作者

比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析被引量：1: 2014年; 从比格犬的脾中提取基因组DNA,采用RT-PCR方法扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因。将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,PCR检测及测序鉴定结果表明,克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100%。在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中。该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约38.4ku处出现了目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经Bandscan软件分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5%。用Protein Refolding Kit对包涵体进行纯化复性,重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性。; 潘福星朱梅胜冯培祥王冬冬范丹丹齐娟王祖荣尹燕博; 关键词：比格犬克隆原核表达抗病毒活性

比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3: 2014年; 为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立荧光定量RT-PCR标准曲线。结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL^1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994。组内组间变异系数均小于3%,特异性和重复性较好。同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43%和96.55%。本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段。; 潘福星王冬冬曹志伟冯培祥刘宏齐娟孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：SYBR 比格犬 Β-干扰素

比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 　　为检测比格犬α-和β-干扰素(CAIFN-α 和CAIFN-β)，本研究根据GENBANK 中登录的IFN-α和IFN-β 基因序列，分别设计合成特异性引物，以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)MRNA为内参，建立S...; 潘福星王冬冬曹志伟冯培祥刘宏齐娟孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：实时荧光定量RT-PCR 比格犬 Β-干扰素

引物及其该引物用于制备比格犬抗菌肽β-防御素重组蛋白CBD127的方法: 本发明涉及生物技术领域，具体来说是一种引物及其该引物用于制备比格犬抗菌肽β-防御素重组蛋白CBD127的方法；该引物序列如下：上游引物：5’-ATGAAGCTCATCCTGATCAT-3’，下游引物：5’-TTATGTA...; 尹燕博冯培祥潘福星; 文献传递

比格犬α7干扰素成熟肽基因的克隆、原核表达及活性分析: 　　本实验通过RT-PCR 的方法从比格犬的脾脏中提取基因组DNA 扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因.将纯化的PCR 产物克隆至PMD19-T 载体,转化入感受态细胞DH5α 中,经PCR 检测及测序鉴定表明,所克隆的目的...; 潘福星朱梅胜冯培祥王东东范丹丹齐娟王祖荣尹燕博; 关键词：基因克隆原核表达活性分析

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定: 2014年; 为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。; 冯培祥潘福星毕玉敏郭学金陈欣杨莉徐守振王建琳郭妍妍尹燕博; 关键词：比格犬 Β-防御素原核表达

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定: 　　为获得比格犬 β-防御素CBD1基因的表达产物,根据 GENBANK 发表的犬β-防御素基因 CBD1(CANIS FAMILIARIS BETA-DEFENSIN-LIKE PEPTIDE 1)的序列设计引物,提取...; 冯培祥尹燕博潘福星毕玉敏郭学金陈欣杨莉徐守振王建琳郭妍妍; 关键词：比格犬 Β-防御素原核表达

鸡β-防御素Gal-9 cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的研究: 本实验从鸡食道克隆得到鸡β-防御素基因Gal-9,将该基因和鸡β-防御素基因及大部分哺乳动物的β-防御素基因进行遗传进化分析,原核表达重组Gal-9蛋白并测定其体外抑菌活性及理化特性,为重组鸡β-防御素在家禽生产中的应用...; 冯培祥朱梅胜杨莉檀学进潘福星齐娟郭妍妍张毅尹燕博; 关键词：Β-防御素基因克隆原核表达抑菌活性; 文献传递

鸡β-防御素Gal-9 cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的研究被引量：2: 2014年; 旨在克隆鸡β-防御素Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达,并对产物进行抑菌活性的检测。根据GenBank发表的鸡β-防御素基因Gal-9(NM_001001611.2)设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)的EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃进行诱导表达。结果扩增出Gal-9,其cDNA为204bp,成熟肽编码42个氨基酸。SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在。重组鸡Gal-9蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、酵母菌(GS115)都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50、31.75、125.00、31.75mg·L-1。成功获得了鸡β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础。; 冯培祥朱梅胜杨莉檀学进潘福星齐娟郭妍妍张毅尹燕博; 关键词：Β-防御素重组蛋白表达抑菌活性