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重组人干扰素ω在对数生长期毕赤酵母中的高效表达特性研究被引量：1: 2006年; 用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性，通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验，优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhlFNω的摇瓶条件。结果表明，μ对毕赤酵母表达rhlFNω有显著影响。μ为0．1612h^-1的毕赤酵母表达rhlFNω最高为558mg／L，较μ为0．1321、0．0505和0．0052h^-1的毕赤酵母分别提高50％、68％和99％。对数生长期的毕赤酵母表达rhlFNω的最适摇瓶表达条件为：250mL摇瓶装入30mL BMMY，控制菌体浓度达到200～300g／L（WCW），起始pH值自然，每24h添加甲醇15g／L一次。诱导表达周期为4d。通过表达条件的优化，rhlFNω的表达量达到1070mg／L。较优化前提高149％。; 潘红春刘红王伯初陈真文郑小峰杨红涛肖中元; 关键词：毕赤酵母比生长速率

pH对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制被引量：2: 2005年; pH对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的产生有很大的影响。通过对不同缓冲体系试验和对摇瓶发酵过程pH变化的分析,了解摇瓶发酵过程中pH对L-天冬酰胺酶合成的影响。采用流加磷酸自控L-天冬酰胺酶发酵过程的pH,可延长发酵周期,有效地防止菌体的过早自溶,大大促进L-天冬酰胺酶的合成,较分批发酵提高产酶 83%,达到 110u/mL。发酵动力学特性分析表明,该发酵方式L-天冬酰胺酶的合成与菌体生长不相关,控制比生长速率μ为 0. 15~0. 30h-1,均有利于L-天冬酰胺酶的合成,可使比产酶速率的最大值Qpmax达到 3 922u/(g·h)。; 潘红春王伯初刘红陈真文周玲李玉林; 关键词：PH值大肠杆菌 L-天冬酰胺酶发酵动力学

发酵条件对毕赤酵母表达重组人干扰素ω糖基化的影响被引量：22: 2005年; 发酵条件是影响毕赤酵母 (P .pastoris)表达外源重组糖蛋白时糖基化的重要因素。通过菌体浓度、起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、装液量等摇瓶发酵实验 ,研究不同发酵条件对毕赤酵母表达分泌型重组人干扰素ω(rhIFNω)过程中糖基化的影响 ;同时 ,在连续培养过程中考察pH值变化对rhIFNω糖基化的影响和分批发酵过程中rhIFNω糖基化的变化。结果表明 ,控制菌体密度 2 5 0g L(WCW)、起始pH值 6 0、装液量小于 30mL、甲醇诱导浓度 15g L、甲醇诱导 3次 (每 2 4h诱导一次 )等发酵条件 ,有利于摇瓶发酵过程中rhIFNω的糖基化 ;控制pH值 7 0～ 7 5可促进rhIFNω的糖基化 ;分批发酵过程中 ,糖基化与非糖基化rhIFNω的含量有同比变化趋势 ,但糖基化rhIFNω所占比例明显低于摇瓶发酵实验的结果 ,其原因有待进一步研究。; 刘红潘红春蔡绍皙陈真文郑小峰杨红涛肖中元; 关键词：糖基化毕赤酵母发酵条件

酶解-超声法破碎大肠杆菌提纯包含体被引量：16: 2004年; 大肠杆菌的破碎方法对包含体的纯度有较大影响。采用酶解和超声波相结合的方式进行了大肠杆菌的破碎实验研究,考察了溶菌酶用量、酶解温度、超声处理功率和时间等因素对菌体破碎程度的影响,通过测定破碎液的A650,A280,A260nm来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况。在优化的条件下,每克湿菌体添加2mg溶菌酶,30℃酶解60min、500W超声破碎50次后,经分离洗涤可获得纯度达57%的包含体。本方法可获得纯度更高的包含体,利于重组蛋白的进一步纯化。; 刘红潘红春蔡绍皙李玉林杨红涛; 关键词：酶解超声波大肠杆菌包含体

大肠杆菌重组人成骨蛋白-1的非诱导表达特性: 2004年; 目的　研究大肠杆菌重组人成骨蛋白 1的非诱导表达特性。方法　通过水质、起始pH、接种量、葡萄糖添加量、甘油添加量、装液量、转速等实验研究不同营养条件和培养条件对OP 1非诱导表达的影响。通过传代实验 ,考察该系统OP 1表达的稳定性。结果　水质对OP 1的表达没有明显影响 ,2 %～ 4 %的接种量有利于OP 1的表达 ,起始pH以 6 0为宜。葡萄糖对OP 1的表达有较大影响 ,2 %～ 4 %的葡萄糖添加量可以获得较高表达。甘油的添加能明显促进OP 1的表达 ,最适添加量为 0 3% ,较对照提高表达 81 7%。该表达系统对溶氧的需求不大 ,装液量和转速分别以 12 5～ 15 0ml和 15 0r min为宜。在优化条件下 ,最适表达时间为 2 4～ 2 6h ,OP 1的表达量可达到菌体蛋白的 4 0 %。优化的营养条件和培养条件对本系统OP 1的表达和质粒的稳定有利 ,10次传代可保持 90 %表达。结论　建立了非诱导表达的摇瓶发酵工艺 ,对其非诱导表达特性有了较为深入的了解 ,为进一步放大研究奠定了基础。; 刘红潘红春蔡绍皙杨红涛朱列文; 关键词：大肠杆菌

重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达被引量：1: 2005年; 目的　研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法　利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果　扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论　克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。; 潘红春刘红王伯初杨红涛陈喜文周玲; 关键词：成熟肽基因成骨克隆大肠杆菌正常胎儿骨蛋白

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潘红春