杨红涛
- 作品数：10 被引量：51H指数：3
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- 发文基金：重庆市科技攻关计划博士科研启动基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：化学工程生物学医药卫生理学更多>>
- 聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的过程优化被引量：5
- 2011年
- 采用分子量20000直链单甲氧基PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)对毕赤酵母表达的重组人干扰素ω(rhIFNω)进行氨基化学修饰,以期获得抗原性降低及稳定性增加的单链PEG修饰产物(PEG-rhIFNω)。建立了PEG修饰rhIFNω的反应体系,考察了修饰反应各因素对单修饰产物得率的影响,优化修饰工艺条件为:反应体系起始pH值8.5,rhIFNω/PEG摩尔比1∶7,rhIFNω浓度0.75 mg.ml-1,磷酸盐缓冲液浓度50mmol.L-1,于25℃振荡反应4 h,用30%冰醋酸终止反应。在优化条件下,单链PEG-rhIFNω含量和修饰率分别达到0.25 mg.ml-1和34.63%。纯化后的单链PEG-rhIFNω具有典型PEG修饰蛋白的特性,体外抗病毒活性保留了天然rhIFNω抗病毒活性的15%。
- 潘红春刘红程永刚彭力徐波杨红涛
- 关键词：聚乙二醇抗病毒活性
- 单链聚乙二醇化重组人干扰素ω的制备及其性质被引量：1
- 2012年
- 采用直链PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)选择性修饰重组人干扰素ω(rhIFNω),离子交换色谱和凝胶过滤色谱组合分离纯化单链PEG修饰产物(PEG-rhIFNω),基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定单链PEG-rhIFNω的相对分子量,并利用RP-HPLC和SDS-PAGE对修饰产物进行分析。在优化的工艺条件下,分离纯化收集液的单链PEG-rhIFNω,平均含量达182μg.mL-1,分离纯化收率超过22%,纯度大于98%,SDS-PAGE法测得表观分子质量为60 810,MALDI-TOF MS法测得相对分子质量为43 790;单链PEG-rhIFNω具有典型PEG修饰蛋白的特性,抗病毒活性保留率为15.0%,抗原性降低了64倍,酸稳定性、抗胰酶水解能力、血清稳定性和热稳定性均显著提高。单链PEG-rhIFNω的药学性质获得显著改善,有望开发为安全、长效的新型干扰素。
- 刘红程永刚潘红春徐波彭力杨红涛郭伟
- 关键词：聚乙二醇化纯化稳定性抗原性
- 原子吸收分光光度法分析注射用头孢替安中钠的含量被引量：1
- 2018年
- 目的:测定注射用头孢替安中钠的含量;方法:采用原子吸收分光光度法(AAS)测定钠的含量;结果:该法测定的Na元素浓度在0.87~1.74μg/m L范围内线性关系良好,平均回收率为100.29%(n=9),RSD=0.58%;结论:采用原子吸收分光光度法测定注射用盐酸头孢替安样品中钠的含量,方法简便、准确。
- 杨红涛陈真文肖中元彭亦新周玲
- 关键词：原子吸收分光光度法碳酸钠
- 发酵条件对毕赤酵母表达重组人干扰素ω糖基化的影响被引量：22
- 2005年
- 发酵条件是影响毕赤酵母 (P .pastoris)表达外源重组糖蛋白时糖基化的重要因素。通过菌体浓度、起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、装液量等摇瓶发酵实验 ,研究不同发酵条件对毕赤酵母表达分泌型重组人干扰素ω(rhIFNω)过程中糖基化的影响 ;同时 ,在连续培养过程中考察pH值变化对rhIFNω糖基化的影响和分批发酵过程中rhIFNω糖基化的变化。结果表明 ,控制菌体密度 2 5 0g L(WCW)、起始pH值 6 0、装液量小于 30mL、甲醇诱导浓度 15g L、甲醇诱导 3次 (每 2 4h诱导一次 )等发酵条件 ,有利于摇瓶发酵过程中rhIFNω的糖基化 ;控制pH值 7 0～ 7 5可促进rhIFNω的糖基化 ;分批发酵过程中 ,糖基化与非糖基化rhIFNω的含量有同比变化趋势 ,但糖基化rhIFNω所占比例明显低于摇瓶发酵实验的结果 ,其原因有待进一步研究。
- 刘红潘红春蔡绍皙陈真文郑小峰杨红涛肖中元
- 关键词：糖基化毕赤酵母发酵条件
- 酶解-超声法破碎大肠杆菌提纯包含体被引量：16
- 2004年
- 大肠杆菌的破碎方法对包含体的纯度有较大影响。采用酶解和超声波相结合的方式进行了大肠杆菌的破碎实验研究,考察了溶菌酶用量、酶解温度、超声处理功率和时间等因素对菌体破碎程度的影响,通过测定破碎液的A650,A280,A260nm来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况。在优化的条件下,每克湿菌体添加2mg溶菌酶,30℃酶解60min、500W超声破碎50次后,经分离洗涤可获得纯度达57%的包含体。本方法可获得纯度更高的包含体,利于重组蛋白的进一步纯化。
- 刘红潘红春蔡绍皙李玉林杨红涛
- 关键词：酶解超声波大肠杆菌包含体
- 大肠杆菌重组人成骨蛋白-1的非诱导表达特性
- 2004年
- 目的 研究大肠杆菌重组人成骨蛋白 1的非诱导表达特性。方法 通过水质、起始pH、接种量、葡萄糖添加量、甘油添加量、装液量、转速等实验研究不同营养条件和培养条件对OP 1非诱导表达的影响。通过传代实验 ,考察该系统OP 1表达的稳定性。结果 水质对OP 1的表达没有明显影响 ,2 %～ 4 %的接种量有利于OP 1的表达 ,起始pH以 6 0为宜。葡萄糖对OP 1的表达有较大影响 ,2 %～ 4 %的葡萄糖添加量可以获得较高表达。甘油的添加能明显促进OP 1的表达 ,最适添加量为 0 3% ,较对照提高表达 81 7%。该表达系统对溶氧的需求不大 ,装液量和转速分别以 12 5～ 15 0ml和 15 0r min为宜。在优化条件下 ,最适表达时间为 2 4～ 2 6h ,OP 1的表达量可达到菌体蛋白的 4 0 %。优化的营养条件和培养条件对本系统OP 1的表达和质粒的稳定有利 ,10次传代可保持 90 %表达。结论 建立了非诱导表达的摇瓶发酵工艺 ,对其非诱导表达特性有了较为深入的了解 ,为进一步放大研究奠定了基础。
- 刘红潘红春蔡绍皙杨红涛朱列文
- 关键词：大肠杆菌
- 异烟肼片微生物限度检查法的建立被引量：2
- 2019年
- 建立一种适用于异烟肼片的微生物限度检查方法,并对方法进行验证。需氧菌、霉菌和酵母菌总数计数法、控制菌(大肠埃希菌)检查均采用薄膜过滤法,供试液浓度为1∶10。需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数法方法验证各试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间,大肠埃希菌检查法适用性试验符合要求。该方法可行性强,适用于异烟肼片的微生物限度检查。
- 肖中元周玲杨红涛陈真文马迪
- 关键词：异烟肼片微生物限度检查薄膜过滤法
- HPLC梯度洗脱法测定美洛西林钠有关物质被引量：2
- 2013年
- 目的:建立测定美洛西林钠有关物质的HPLC梯度洗脱法。方法:使用ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾4.9 g和磷酸氢二钾0.45 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH至5.7,即得)和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,柱温为31℃,检测波长为215 nm。结果:美洛西林钠样品中有关物质完全洗出,美洛西林主峰与有关物质峰均达到基线分离;美洛西林钠质量浓度在11.2～33.5 mg.L-1范围内线性关系良好(r=0.997),美洛西林的检测限和定量限分别为12.20和40.25 ng,而美洛西林钠样品中有关物质检测限可达美洛西林钠含量的0.03%。结论:该法对美洛西林钠有关物质的测定灵敏、准确、专属性强,适用于美洛西林钠产品质量控制。
- 彭力陈华毛先兵徐波杨红涛肖中元
- 关键词：HPLC法梯度洗脱美洛西林钠
- 高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠中有关物质被引量：2
- 2013年
- 目的建立HPLC梯度洗脱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠有关物质的方法。方法使用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),以磷酸盐缓冲液(5.44 g L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH至3.8,即得)和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL min-1,柱温为31℃,检测波长为215 nm。结果样品中有关物质完全洗出,美洛西林和舒巴坦主峰与有关物质峰均达到基线分离,舒巴坦杂质A、B分离度符合要求;舒巴坦杂质A、舒巴坦杂质B、舒巴坦和美洛西林与峰面积线性关系良好,相关系数(r)均>0.997 2;舒巴坦杂质A相对舒巴坦校正因子为0.6,舒巴坦杂质B相对舒巴坦校正因子为0.5;舒巴坦杂质A、B检测限分别为3.11 ng和5.98 ng,定量限分别为10.36 ng和17.93 ng,舒巴坦检测限和定量限分别为8.46 ng和31.01 ng;美洛西林的检测限和定量限分别为12.20和40.25 ng;舒巴坦杂质A、B平均回收率(n=9)分别为100.9%和102.0%。结论该方法对注射用美洛西林钠舒巴坦钠有关物质的测定灵敏、准确、专属性强,适用于产品质量控制。
- 彭力陈华徐波陈真文李玉林杨红涛
- 关键词：高效液相色谱法梯度洗脱美洛西林钠舒巴坦钠
- 重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达被引量：1
- 2005年
- 目的 研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法 利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果 扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论 克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。
- 潘红春刘红王伯初杨红涛陈喜文周玲
- 关键词：成熟肽基因成骨克隆大肠杆菌正常胎儿骨蛋白
