王坤
- 作品数：21 被引量：136H指数：8
- 供职机构：安徽医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响被引量：9
- 2017年
- 目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组(DMEM培养基)、牛血清白蛋白(BSA)组(200 mg·L^(-1)BSA)、AGEs组(200 mg·L^(-1)AGEs)、PF组(200 mg·L^(-1)AGEs+10^(-5)mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L^(-1)AGEs+30 mg·L^(-1)人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子(My D88)、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达(P<0.01)及TLR2、TLR4 mRNA表达(P<0.01),增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平(P<0.01);PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应(P<0.01)。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。
- 刘超然邵云侠徐兴欣王坤吴永贵
- 关键词：晚期糖基化终末产物炎症巨噬细胞芍药苷
- 芍药苷通过JAK2/STAT3信号通路抑制高糖诱导的RAW264.7巨噬细胞激活被引量：13
- 2019年
- 目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)抑制高糖(high glucose,HG)诱导的RAW264.7巨噬细胞激活是否通过JAK2/STAT3信号通路。方法体外HG激活巨噬细胞RAW264.7, PF及JAK2/STAT3干扰RNA(siRNA)进行干预,分别检测巨噬细胞的增殖、趋化、炎症因子表达分泌、JAK2和STAT3蛋白表达及其磷酸化水平。结果在HG刺激下,巨噬细胞趋化功能增强,诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的mRNA表达,以及细胞培养基中TNF-α、IL-1β、MCP-1分泌水平均增加(P<0.05,P<0.01),JAK2、STAT3蛋白磷酸化表达明显增加(P<0.05)。JAK2/STAT3基因沉默可抑制HG刺激下iNOS和炎症因子(TNF-α、IL-1β、MCP-1)mRNA水平和细胞培养液中炎症因子的分泌,抑制JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。PF能明显下调HG诱导的巨噬细胞趋化迁徙、炎症因子表达分泌及JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平(P<0.01)。结论 HG可通过诱导JAK2/STAT3信号通路刺激巨噬细胞激活,PF抑制巨噬细胞激活的机制主要与抑制JAK2/STAT3信号通路相关。
- 蔡建月邵云侠王坤吴永贵
- 关键词：巨噬细胞JAK2芍药苷高糖
- 尿蛋白测定方法与IgA肾病进展的相关研究被引量：5
- 2019年
- 目的探讨IgA肾病患者尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比、24 h尿蛋白定量之间的关系,并分别评估三者和IgA肾病临床及病理的关系,从而预测IgA肾病的进展。方法收集2017年5月至2018年4月在安徽医科大学第一附属医院行肾脏活检确诊为IgA肾病的患者资料,记录患者尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比、24 h尿蛋白定量、肾小球滤过率、血压、牛津分型等指标,研究尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比和24 h尿蛋白定量三者之间的关系,并探讨三者和血压、肾小球滤过率、牛津分型等之间的关系。结果 IgA肾病患者的尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比、24 h尿蛋白定量三者存在密切相关性,其中尿蛋白肌酐比和尿白蛋白肌酐比具有最高的相关性(r_s=0.929,P<0.01),尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比、24 h尿蛋白定量均和肾小球滤过率、牛津分型T、C存在明显相关性(P<0.05)。而有无高血压,牛津分型M、E、S和以上三者之间的关系无统计学差异(P>0.05)。结论 IgA肾病患者的尿蛋白肌酐比、尿白蛋白肌酐比和24 h尿蛋白定量之间密切相关,三者和肾小球滤过率、牛津分型T、C均存在明显相关性。
- 张雪静王坤吴永贵
- 关键词：IGA肾病尿白蛋白肌酐比24H尿蛋白定量
- 腹膜透析患者合并贫血的危险因素分析被引量：1
- 2020年
- 目的分析腹膜透析(PD)患者的贫血状况及相关危险因素。方法选择2011年3月至2017年6月于安徽医科大学第一附属医院肾内科行规律PD治疗1年内的患者186例为研究对象,收集其一般临床资料及实验室检查资料。根据Hb水平将患者分为对照组(Hb≥110 g/L)与贫血组(Hb<110 g/L)。分析影响PD患者合并贫血的危险因素。结果186例PD患者中,合并贫血127例,发生率为68.28%。单因素分析显示,贫血组血清白蛋白及血肌酐水平低于对照组,可溶性转铁蛋白受体水平显著高于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果提示,血肌酐水平<884μmol/L和血清白蛋白水平<35 g/L是影响PD患者合并贫血的独立危险因素(P<0.05)。结论血肌酐水平过低和低蛋白血症是影响PD患者发生贫血的独立危险因素。
- 任琳王坤王金霞吴永贵
- 关键词：腹膜透析肾性贫血血肌酐低蛋白血症
- 单次大剂量对比多次小剂量STZ诱导昆明小鼠糖尿病肾病的研究被引量：9
- 2017年
- 目的研究单次大剂量注射与多次小剂量连续注射链脲佐菌素(STZ)诱导昆明小鼠糖尿病肾病的成模率,以得出最佳的建模方法。方法 26只昆明小鼠随机分为3组:阴性对照组6只(注射等量的柠檬酸盐缓冲液)、单次大剂量组10只(150 mg/kg单次腹腔注射)、多次小剂量组10只(40 mg/kg连续注射5 d)。末次注射后,每天记录饮水量,且于注射后第3、7、14、28天检测随机血糖,在注射STZ后4、10周各处死一半的小鼠,处死前分别测量小鼠体重和随机血糖,并记录小鼠成模后第2、4、10周24 h尿量;眼球取血测定血肌酐,血尿素氮;以及取肾脏组织作肾脏病理。结果与单次大剂量组相比,多次小剂量组成模率高,死亡率低。单次大剂量组、多次小剂量组分别与阴性对照组相比,10周时24 h尿蛋白值均差异有统计学意义(P<0.05)。4周小鼠肾组织光镜无明显变化;10周出现肾小球肥大,系膜增生等。结论多次小剂量注射STZ(40 mg/kg,连续注射5 d)是合理的诱导糖尿病小鼠发生肾病的方法。
- 姚亚兰王金霞阚春明吴永贵王坤
- 关键词：链脲佐菌素糖尿病肾病昆明小鼠
- 多种免疫抑制剂对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中MMP-9的表达影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨免疫抑制剂霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9表达的影响。方法制备肾毒血清性肾炎大鼠模型,并随机分为病理对照组、霉酚酸酯治疗组、来氟米特治疗组和他克莫司治疗组,每组各10只。各治疗组均给予相应药物灌胃给药每天1次,2周后观察血清总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平。应用免疫组织化学观察肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达。结果基质金属蛋白酶-9在病理对照组肾小球和肾小管中的表达均较正常对照组增高(P<0.01);与病理对照组比较,霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗后可使其表达减少(P<0.01),且来氟米特治疗组较其它两用药组下降明显(P<0.05)。各治疗组与病理对照组比较Tp、Alb增加(P<0.01),Scr、BUN降低(P<0.01)。结论霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗均能减少肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达,改善肾功能,其中来氟米特效果最理想。
- 江洁龙张伯科任伟王坤赵珉钱浩戴宏梁维龙阚春明
- 关键词：霉酚酸他罗利姆明胶酶B
- 白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织Txnip、Trx与ASK1表达的调节作用被引量：8
- 2015年
- 目的了解白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)、硫氧还蛋白(Trx)与凋亡信号激酶1(ASK1)表达的影响,探讨TGP对糖尿病肾组织Trx系统调节作用。方法将链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠随机分为模型组、TGP[50、100、200 mg/(kg·d)]给药组,另取正常大鼠为对照组,8周后测定大鼠尿白蛋白排泄率(UAER)。应用免疫组化、Western blot法及实时定量PCR法检测大鼠肾组织Txnip、Trx与ASK1表达。结果实验8周后TGP[50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组大鼠UAER水平均低于模型组(P<0.01);免疫组化和(或)Western blot法显示TGP[50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组大鼠肾组织Txnip、ASK1表达低于模型组(P<0.05,P<0.01),而Trx高于模型组(P<0.05,P<0.01);实时定量PCR显示TGP[50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组Txnip mRNA低于模型组(P<0.01,P<0.05),Trx mRNA高于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论糖尿病肾病大鼠肾组织存在Trx系统异常,TGP对糖尿病大鼠肾组织保护作用可能与抑制Txnip表达、提高Trx表达有关。
- 王喆吴永贵章超群武晓旭徐兴欣王坤
- 关键词：糖尿病肾病硫氧还蛋白ASK1白芍总苷
- FK506对肾毒血清肾炎大鼠上皮细胞转分化的影响被引量：3
- 2006年
- 目的探讨FK506对肾毒血清肾炎大鼠上皮细胞转分化的影响。方法建立大鼠肾毒血清肾炎模型,随机分为正常对照组、病理组、FK506干预组〔1mg/(kg·d),灌胃〕。2周末检测尿蛋白含量、血清学指标;观察肾小球病理形态学及免疫组化变化。结果病理组新月体形成率明显高于干预组(P<0.01)。干预组大鼠蛋白尿明显减轻,血清学指标尿素氮、肌酐、胆固醇明显低于病理组(P<0.01),白蛋白水平明显高于病理组(P<0.01)。干预组肾小球细胞增生减轻,新月体形成率减低,新月体病变程度减轻。αSMA和ColⅠ在病理组大量表达,并与新月体的形成密切相关,干预组αSMA表达明显减轻。结论FK506对肾毒血清肾炎大鼠有明显肾保护作用,其机制可能部分与抑制肾小囊上皮细胞转分化有关。
- 王坤王强赵珉钱浩梁维龙戴宏张伯科
- 关键词：他罗利姆肾小球肾炎细胞分化
- 芍药苷减轻糖尿病小鼠肾组织炎症与JAK2/STAT3信号通路的关系被引量：13
- 2018年
- 目的研究芍药苷(PF)对糖尿病小鼠肾组织炎症的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为5组:对照组、模型组、PF 25 mg/kg组、PF 50mg/kg组和PF 100 mg/kg组。于实验12周末测定各组小鼠血糖、相对肾重(肾重/体质量)及24 h尿白蛋白排泄率(UAER);光镜下观察各组小鼠肾组织病理学改变并评分;免疫组化检测肾组织CD68、p-JAK2及p-STAT3表达;Western blot检测肾组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达;实时定量PCR法检测肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)与诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的mRNA表达。结果实验12周末,模型组小鼠血糖、相对肾重、UAER及肾组织病理学评分较对照组明显升高(P<0.05,P<0.01),PF给药可使小鼠相对肾重、UAER及肾组织病理学评分较模型组明显减少(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肾组织CD68、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和i NOS的mRNA表达均显著增加(P<0.01),PF 25、50、100 mg/kg给药组小鼠肾组织CD68、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和i NOS的mRNA表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论 PF能够明显改善糖尿病小鼠肾损伤,这种保护作用的机制可能部分与抑制肾组织JAK2/STAT3信号通路激活及炎症反应有关。
- 李新玉邵云侠王坤吴永贵
- 关键词：糖尿病肾脏疾病芍药苷JAK2/STAT3信号通路炎症巨噬细胞
- 芍药苷对高糖刺激的小鼠骨髓来源的巨噬细胞TLR4信号通路的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨芍药苷(PF)对高糖刺激的小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。方法分离骨髓来源的巨噬细胞作为研究对象,高糖作为刺激因素,芍药苷作为干预因素分组。将BMDMs分为7组:正常糖对照组(LG组)、正常糖对照+PF组(LG+PF组)、高糖刺激组(HG组)、高糖刺激+PF组(HG+PF组)、TLR4-/-对照组(TLR4-/-组)、TLR4-/-对照+高糖刺激组(TLR4-/-+HG组)、TLR4-/-对照+高糖刺激+PF组(TLR4-/-+HG+PF组)。流式细胞术鉴定巨噬细胞的纯度及成熟度;CCK-8检测PF对BMDMs活力的影响;Transwell检测各组BMDMs的趋化功能;激光共聚焦法检测各组的TLR4和诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的协同表达;qRT-PCR测定各组细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及i NOS mRNA的转录表达;Western blot法检测各组总蛋白中i NOS、TLR4、髓样分化因子88(My D88)、TIR结构域衔接蛋白(Trif)、磷酸化白介素-1受体相关激酶(p-IRAK1)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、核因子κB(NF-κB)p65和NF-κBp-p65蛋白的表达;ELISA法检测各组细胞培养上清液中促炎因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌情况。结果与LG组比较,高糖刺激可以增加巨噬细胞的趋化功能;明显上调细胞TNF-α、IL-1β、MCP-1及i NOS mRNA的转录表达(P<0.01);同时HG组的i NOS及TLR4、My D88、Trif、p-IRF3、NF-κBp65和NF-κBpp65等信号通路蛋白表达水平明显增强(P<0.01);细胞培养上清液中分泌的TNF-α、IL-1β及MCP-1水平增高(P<0.01)。PF和敲除TLR4基因均可以抑制高糖刺激导致的巨噬细胞的激活效应。结论高糖可以诱导BMDMs细胞内的TLR4及下游信号传导通路表达上调,同时使巨噬细胞激活导致促炎因子表达上调;PF和敲除TLR4基因均可抑制TLR4信号通路的激活,并且使巨噬细胞促炎因子的表达下调。
- 杨雯雯段分分邵云侠王坤吴永贵
- 关键词：芍药苷巨噬细胞TOLL样受体4
