程琳
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人胚胎干细胞来源的肝细胞:一种具有潜力的乙肝病毒研究模型
- 2014年
- 目的:初步探索应用人胚胎干细胞来源的肝细胞作为乙肝病毒(HBV)体外研究模型的潜力。方法:定向分化人胚胎干细胞为肝细胞(hESC-Heps);采用免疫荧光方法检测肝性因子如肝细胞核因子-4α(HNF4α)、白蛋白(ALB)和HBV功能性受体钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)受体的表达;实时荧光定量PCR检测Ⅲ型干扰素受体表达,Western blotting检测hESC-Heps在Ⅲ型干扰素刺激下干扰素通路中磷酸化转录信号传导子与激活子2(STAT2)的表达。结果:成熟的hESC-Heps表达肝性因子HNF4α和ALB,表达HBV功能性受体NTCP受体,并且具有人原代肝细胞特异性的Ⅲ型干扰素反应。结论:人胚胎干细胞来源的肝细胞hESC-Heps可能成为一种具有潜力的HBV研究模型。
- 孙平楠周小玲杨少哲程琳姚伟城
- 关键词：人胚胎干细胞肝细胞
- 预扩增qPCR方法检测少量小鼠早期胚胎细胞中DNA甲基化相关基因的表达
- 2016年
- 目的:比较3种实时定量PCR(qPCR)方法对少量小鼠早期胚胎细胞中甲基化相关基因表达水平的检测效果,以期获得适合日常检测的方法。方法:分别应用常规qPCR方法、基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增的qPCR方法3种方案对少量小鼠早期胚胎细胞样本中甲基化相关基因TET1、TET2、TET3、DNMT3A的mRNA表达进行检测。结果:3种方法的灵敏度由高到低依次为基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增qPCR方法、常规qPCR方法。前两种方法均能在合适的循环数下对少量小鼠胚胎细胞中的多个甲基化相关基因表达进行定量。而基于PCR预扩增的qPCR方法比基于等温预扩增的qPCR方法更经济,适合日常检测。因此,我们选择应用基于PCR预扩增的qPCR方法,检测了小鼠卵细胞以及卵细胞受精后22 h甲基化相关基因表达的变化,结果发现该过程中TET1表达量很低,不易检测到;TET2表达呈降低趋势;TET3和DNMT3A表达显著升高(P<0.01),与文献报遁基本一致。结论:基于等温预扩增的qPCR方法检测少量细胞样品中甲基化相关基因的表达的灵敏度在3种qPCR方法中最高。而基于PCR预扩增的qPCR方法操作简单、灵敏度较高、成本相对低,适合少量细胞样本中多个相关基因表达的实时定量日常检测。
- 程琳孙平楠谢庆东周小玲
- 关键词：实时定量PCR
