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赵函芳
作品数:
2
被引量:4
H指数:1
供职机构:
上海第二医科大学
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相关领域:
生物学
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合作作者
卢健
第二军医大学长征医院
程枫
第二军医大学长征医院
陈诗书
第二军医大学长征医院
戚文航
第二军医大学长征医院
于金德
第二军医大学长征医院
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王亚新
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人血小板内皮舒张因子合酶互补脱氧核糖核酸克隆
1996年
目的:建立人血小板互补脱氧核糖核酸(cDNA)文库,筛选出血小板内皮舒张因子合酶(NOS)cD-NA克隆。方法:用新鲜血小板悬液纯化血小板,提取总核糖核酸(RNA),以RNA为模板合成cDNA,将cDNA连接λgt11臂,用噬菌体包装蛋白包装,然后转染宿主菌Y1090建库。用地高辛标记探针进行杂交,挑出阳性克隆,扩增后纯化脱氧核糖核酸(DNA)。将重组DNA用EcoRI酶解,电泳,并将插入片段切下,纯化得到内皮舒张因子合酶cDNA。结果:从血小板中获得RNA约1.5mg,RNA变性电泳可见较清晰的18S和28S条带且无RNA降解。第一条cDNA链产量为1.82μg,第二条链为3.79μg,放射性自显影显示双链cDNA分子大小范围在0.5~5.0kb,大部分位于1.0~4.0kb之间。人血小板内皮舒张因子合酶cDNA克隆约3.0kb左右。结论:人血小板内皮舒张因子合酶cDNA克隆约3.0kb,与其它组织的相似。
王华梁
龚兰生
孔宪涛
蔡伟箐
于金德
戚文航
吴春芳
王海英
赵函芳
陈诗书
程枫
王亚新
卢健
关键词:
血小板
内皮舒张因子
合酶
DNA
克隆
人血小板cDNA文库的建立
被引量:4
1996年
为建立人血小板cDNA文库,作者用人新鲜血小板悬液纯化血小板,加入变性液作匀浆,经苯酚、氯仿、异丙醇等抽提RNA,以所得RNA为模板合成cDNA,并将其连接λgt11臂,用噬菌体包装蛋白“包装”,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转染宿主菌Y1090。结果:从纯化血小板2.8×1012中获得约1.5mgRNA,其A(吸光度,曾称光密度OD)260nm/A280nm为1.721,RNA变性电泳可见18s和28s条带,且无RNA降解。由该RNA合成的第一条cDNA链产量为1.82μg,第二条cDNA链产量为3.79μg,放射自显影显示双链cDNA分子大小范围在0.5~5.0kb,大部分位于1.0~4.0kb之间。基因库效价为:总效价1.52×108,重组子效价1.38×108,重组百分比83.1%;克隆效率6.90×108。
王华梁
龚兰生
孔宪涛
蔡伟箐
于金德
戚文航
吴春芳
王海英
赵函芳
陈诗书
程枫
王亚新
卢健
关键词:
血小板
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