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柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析被引量：33: 2000年; 本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序列分析 ,均表明克隆成功。序列分析结果显示 ,克隆片段与已知相应序列间同源性达 98.6 %。该研究为制备柑桔黄龙病病原 DNA分子探针奠定了基础。; 孔维文邓晓玲梁志慧唐伟文; 关键词：柑桔黄龙病 PCR技术病原

膜吸附法结合可视化环介导等温扩增技术检测柑橘黄龙病菌被引量：4: 2022年; 【背景】柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是由候选韧皮部杆菌亚洲种(‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,CLas)侵染引起的一种柑橘病害。对于该病害的防治主要采取综合措施,包括实施检疫、种植无病苗木、及时挖除病树和集中大面积联防联控柑橘木虱等。前3种方法都需要依靠准确的柑橘黄龙病诊断技术。【目的】利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),结合膜吸附法DNA快速提取和Gelgreen荧光染料可视化,建立黄龙病田间核酸快速检测方法。【方法】以黄龙病菌β-操纵子与原噬菌体DNA聚合酶基因为模板设计LAMP特异性引物,包括外引物F3/B3、内引物FIP/BIP、环引物LoopF/LoopB和茎引物StemF/StemB。通过对环引物和茎引物设定不同的用量组合,对LAMP引物体系进行优化,确定合适的引物浓度。用优化后的LAMP引物体系对188份田间柑橘叶片进行检测,并构建受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析实时荧光LAMP(qLAMP)在CLas检测上的准确性。对qLAMP预混反应液进行两步的常温干燥,分别设定不同的存放条件,评估LAMP常温干燥试剂的稳定性。用本研究建立的CLas可视化LAMP快速检测方法,对田间71个柑橘叶片样品和35个柑橘果实样品进行检测,与实时荧光定量PCR(qPCR)比较两者的符合率。【结果】在LAMP体系中加入环引物、茎引物或增加其浓度都能促进反应速率的提升,并且同时加入终浓度均为1.6μmol·L-1的环引物和茎引物能进一步提高LAMP反应速率。LAMP预混液通过两步法干燥在不同温度存放1—4周均能保持反应活性基本不变,表明制备的两步法干燥LAMP试剂检测性能较好,在低温和常温环境下的稳定性尚可,仅35℃高温存放会略微增加LAMP试剂的反应时间。使用孔径0.1μm尼龙膜代替纤维素滤纸作为核酸吸附材料能提升CLas快速诊断技术的灵敏度。结合DNA快速提�; 李镇希李文婷黄家权郑正许美容邓晓玲; 关键词：柑橘黄龙病 DNA快速提取

柑橘黄龙病菌在寄主根部的消长规律研究: 柑橘黄龙病是目前柑橘生产上最严重的病害,分布广泛。该病为系统性病害,且病原菌在植株体内分布不均匀。以往的观察和研究黄龙病所取的植株材料多为地上部位,而对根部的研究较少。黄龙病菌侵染到根部后,对根系造成严重破坏,进而影响植...; 李敏鲍敏丽黄家权吴丰年邓晓玲; 关键词：根系; 文献传递

柚木虱体内韧皮部杆菌亚洲种多基因位点的分子鉴定被引量：8: 2012年; 利用与柑桔黄龙病相关的韧皮部杆菌("Candidatus Liberibacter sp.",简称Ca.L.sp.)16SrDNA基因、β-操纵子核糖体蛋白基因、外膜蛋白基因以及16S-23SrRNA间隔转录区基因位点的4对特异性引物,对采自云南瑞丽柠檬园的柚木虱(Psylla citrisuga)DNA样品进行PCR扩增,将扩增产物进行纯化、回收,连接至PEASY-T3载体并转化大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1,筛选阳性克隆进行测序,利用NCBI Blastn软件以及MEGA5.05软件对所克隆的序列进行同源性分析与聚类分析。结果表明:柚木虱体内韧皮部杆菌亚洲种在这4个基因位点与已报道的Ca.L.asiaticus psy62株系全基因组相应基因位点的同源率均为99%。本研究证实柚木虱能够携带韧皮部杆菌亚洲种,是该菌新的昆虫宿主。; 周汶静蒲雪莲张丽娜岑伊静邓晓玲; 关键词：柑桔黄龙病柠檬

通过比较基因组学方法分析柑橘溃疡病菌A和A^W型菌株的差异: 2017年; 本研究选取采自江西的感染柑橘溃疡病的脐橙样品进行病原分离,采用Illumina Miseq测序平台对分离得到的A型jx-6菌株进行全基因组测序,并与已发表的2株A型菌株和2株A^W型菌株进行比较基因组学分析。直系同源分析表明两种菌株核心基因簇3 887个,只有A^W型菌株具有特异基因簇,特异基因簇为216个。对这些特异基因簇进行分析结果显示大部分与生物代谢和细胞代谢过程有关。基因组共线性分析结果显示相比于A型菌株,A^W型菌株基因组存在翻转、易位、倒位等基因组重排事件。另外,对A型菌株和A^W型菌株的全基因组上存在的前噬菌体进行预测分析,结果显示A型菌株基因组含有3个前噬菌体区域,A^W型菌株基因组含有5个前噬菌体区域。通过比对发现A型菌株中的prophage2与A^W型菌株中的prophage2属于同一种噬菌体,其中A^W型菌株中的prophage4和prophage5两个前噬菌体区域正好插入在两个菌株共线性程度较低的部分。这些前噬菌体的插入及基因组重排有可能是导致A^W型菌株寄主专化性的原因所在。基于7个看家基因(atp D,dna K,efp,fyu A,gln A,gyrB,rpoD)的系统发育进化分析表明所有的A型菌株聚为一支,A^W型菌株聚为一支,这一结果与基因同源聚类分析的结果相一致。; 陈峰郑正邓晓玲; 关键词：柑橘柑橘溃疡病菌比较基因组学前噬菌体

一种柑橘黄龙病菌荧光定量分析的内参基因及其应用: 本发明公开了一种柑橘黄龙病菌荧光定量分析的内参基因及其应用，内参基因为<I>gyrA</I>和<I>ftsZ，</I>其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本发明首次筛选出适用于柑橘黄龙...; 许美容郑永钦郑正邓晓玲; 文献传递

基于短串联重复和PAGE的柑橘黄龙病菌‘Candidatus Liberibacter asiaticus’种间遗传多样性分析(英文)被引量：10: 2014年; 韧皮部杆菌亚洲种（‘Candidatus Liberibacter asiaticus’，‘Ca．L．asiaticus’）是目前流行范围最广、危害最严重的柑橘黄龙病致病菌。本研究利用‘Ca．L．asiaticus’基因组中全套串联重复基因（shorttandemrepeat，STR）开发了一套系统的方法用于‘Ca．L．asiaticus’遗传多样性和黄龙病分子流行学研究。PCR和PAGE分析筛选到的36个STR位点中，有33个获得了有效扩增。其中20对引物对不同来源的32个样品的扩增产物多态性较好，最多的可扩增出9种条带类型。采自我国6省的32个‘Ca．L．asiaticus’阳性样品之间的Shannon’S信息指数为0．14～1．90，平均为0．68；Nei’S基因多样性指数为0．06。0．8l，平均为0．38，各省的菌株表现出较高的遗传多样性，特别是来自福建、广西和云南三省的。聚类分析发现可能为中国黄龙病发源地的广东省的黄龙病菌株具有一定的遗传特异性；其余邻省之间存在由木虱传播引起的菌株交流的可能性可以解释该病害在省际间传播。研究表明，开发的STR标记结合PAGE的方法可作为今后菌株遗传多样性和病害分子流行学分析的高效方法。; 许美容郑正李昕昱洪虹霞邓晓玲; 关键词：黄龙病短串联重复

长春花感染黄龙病菌多酚氧化酶基因的表达及活性分析被引量：5: 2017年; 【目的】分析长春花Catharanthus roseus受黄龙病菌Candidatus Liberibacter asiaticus侵染后多酚氧化酶(PPO)基因的表达及活性变化。【方法】根据不同作物多酚氧化酶基因PPO序列的相似性,筛选出长春花多酚氧化酶基因Pw PPO引物,PCR扩增得Pw PPO基因片段,运用qRT-PCR和生理生化方法分析长春花嫁接黄龙病芽后,不同时间长春花叶、主茎和根中Pw PPO基因的表达量和酶活性变化。【结果】长春花受黄龙病菌侵染后,叶、主茎和根中Pw PPO基因的表达分别在嫁接后30、35和40 d上调表达4.23、12.64和33.80倍,不同组织中Pw PPO基因上调表达的时间和幅度不同。染病长春花的叶、主茎和根中PPO活性分别在嫁接后30、35和45 d为对照的2.87、2.10和1.89倍。【结论】Pw PPO基因表达量与PPO活性成正比,与长春花抵抗黄龙病菌侵染的能力密切相关。; 李亚贾奥琳鲍敏丽许美容邓晓玲; 关键词：黄龙病菌多酚氧化酶基因表达

柑橘黄龙病症状与“Candidatus Liberibacter asiaticus”PCR检测结果的相关性分析被引量：17: 2016年; 柑橘黄龙病症状较为复杂,且因寄主品种、生长期、病程等因素而异。利用PCR检测其病原菌"Candidatus Liberibacter spp."是目前柑橘黄龙病诊断的可靠方法之一。分析柑橘黄龙病症状与PCR检测结果的相关性有助于提高黄龙病的田间诊断准确率。本研究结果表明,与PCR检测相比,根据症状诊断柑橘黄龙病具有较高的假阳性率(8.20%)和假阴性率(50%);通过分析1 839个样品的症状与病原PCR检测结果发现,表现为斑驳型黄化、均匀黄化和"绿岛"这3种叶部症状以及"红鼻子果"和畸形果这2种果实症状的PCR病原检出率高;具有斑驳和黄化、黄化和"绿岛"、"绿岛"和花叶等复合症状样品的PCR检测"Ca.L.asiaticus"的阳性率最高;直径小于1 cm的幼果中的"Ca.L.asiaticus"检测稳定性低。这些结果为更准确地通过症状诊断柑橘黄龙病提供了科学依据。; 许美容陈燕玲邓晓玲; 关键词：柑橘黄龙病症状 PCR检测

基于STR位点对广东省柑橘溃疡病菌种群遗传结构的分析被引量：1: 2022年; 柑橘溃疡病是柑橘生产上最严重的病害之一,由柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri pv.citri,Xcc)引起。为了全面系统地研究广东省柑橘溃疡病菌的种群遗传结构,通过比对分析已报道的中国8个柑橘溃疡病菌全基因组序列的串联重复位点(Short Tandem Repeat,STR),筛选出6个高度变异位点,对广东省的15个市(县)14个品种共352个柑橘溃疡病菌菌株进行遗传多样性分析。结果表明,基于遗传多样性和遗传距离对广东省不同地区的柑橘溃疡病菌株鉴定出6组类群:潮州和汕尾为Ⅰ组,梅州和河源为Ⅱ组,肇庆、广州、江门、佛山和惠州为Ⅲ组,阳江、茂名和湛江为Ⅳ组,云浮为Ⅴ组,韶关和清远为Ⅵ组。基于遗传多样性和遗传距离对广东省不同品种的柑橘溃疡病菌株鉴定出5组类群:沃柑、贡柑、朱砂橘、砂糖橘、茶枝柑、红江橙、马水橘为Ⅰ组,脐橙和柠檬为Ⅱ组,蕉柑、茂谷柑和春甜橘为Ⅲ组,沙田柚为Ⅳ组。; 李文婷李翠晓林小清郑永钦郑正邓晓玲; 关键词：柑橘柑橘溃疡病菌

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