陈小谊
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
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- 姜黄素通过Fas/FasL途径诱导卵巢癌COV504细胞凋亡的研究被引量：7
- 2016年
- 目的探讨姜黄素对人卵巢癌COV504细胞增殖能力、细胞凋亡及Fas/Fas L表达的影响。方法 MTT法检测姜黄素对细胞增殖的作用;Hoechst33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot方法检测姜黄素对COV504细胞Fas/Fas L蛋白表达水平的影响。结果姜黄素作用24 h,与对照组相比,姜黄素能明显抑制细胞的增殖能力(P<0.05),50μmol·L^(-1)及100μmol·L^(-1)姜黄素实验组的抑制率分别为(21.23±0.17)%和(45.08±0.25)%,差异有统计学意义(P<0.05)。姜黄素作用24 h可使COV504细胞出现明显的凋亡。同时,细胞经姜黄素作用后,Fas/Fas L蛋白表达水平明显上调。结论姜黄素能抑制细胞生长增殖,诱导细胞凋亡,显著上调Fas/Fas L蛋白表达水平。
- 庞江琳陈小谊陈军剑吴斌华陈杰
- 关键词：姜黄素细胞增殖卵巢癌FASFASL
- 死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)蛋白C-末端多肽(DCTP)对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用,探讨DCTP抑制DAPK功能的机制。方法采用PCR法扩增DCTP核酸片段,定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1(-),将重组质粒[pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1(-)-DCTP]转染至SH-SY5Y细胞中,筛选稳定细胞株。分析pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位。建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞。用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性,用Westernblotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK(p-DAPK)水平的变化。结果谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性,40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%。流式细胞仪检测结果显示,40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%,而正常培养细胞分别为0.08%和0%。谷氨酸诱导细胞凋亡时,p-DAPK表达下降。荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质。用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1(-)-DCTP和pcDNA3.1(-)质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞,流式细胞仪检测结果显示,前者凋亡率为43.7%,而后者凋亡率为62.2%。Westernblotting检测结果显示,在谷氨酸诱导下,与转染pIRES2-EGFP质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞相比,转染pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化。结论 DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质。DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平。
- 张海涛汪亚君范大华陈小谊刘慧明
- 关键词：死亡相关蛋白激酶谷氨酸细胞凋亡
- HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定载脂蛋白A-1(apoA-1)介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP-1用160nmol/L佛波酯(PMA)诱导24h分化为贴壁巨噬细胞(PMA组),再用50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)处理48h,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞(ac-LDL组);加入含apoA-1的1640培养基培养24h(apoA-1组)。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA-1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac-LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于PMA组(P<0.01)。ac-LDL处理细胞48h后,ac-LDL组内总胆固醇水平为80.25μg/mg细胞蛋白,胆固醇酯水平为47.65μg/mg细胞蛋白,占总胆固醇的59.38%,与PMA组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA-1介导泡沫细胞内apoA-1组胆固醇流出率分别为5.63%和7.08%(P<0.01)。结论本研究成功建立了酶促反应结合HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。
- 马卫列龚晓华李观强丁航兰柳波陈小谊张志珍
- 关键词：泡沫细胞载脂蛋白A-1胆固醇流出
- 慢病毒法建立稳定表达HPV-16 E6癌蛋白的肺癌细胞株
- 2014年
- 目的方法结果结论(HPV)-16 E6DNA HPV-16 E6(PLIG)(PLIG-E6)293T NCIH460 G418 4 DNA PCR Western blotting NCIH460 HPV-16 E6 DNA NCI-H460 HPV-16 E6 DNA HPV-16 E6探讨慢病毒法建立人乳头瘤病毒癌蛋白表达肺癌细胞株的可行性。采用重组技术将基因插入到含有增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒质粒载体中,获得重组慢病毒载体,经双酶切和测序鉴定正确后,与慢病毒包装载体一起转染细胞,收集病毒液,测定滴度后,感染肺癌细胞株。经筛选培养周后,提取细胞基因组和蛋白,分别用和方法分析细胞中和蛋白的表达。双酶切及测序结果表明重组慢病毒表达载体构建成功;感染慢病毒液的细胞中可检测出和蛋白表达。用慢病毒法成功构建稳定高表达癌蛋白的肺癌细胞株。
- 冯芸丰晓威刘锦华刘飞李祥勇兰柳波陈小谊唐旭东
- 关键词：HPV-16E6肺癌质粒
- 芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究被引量：3
- 2014年
- 目的研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力，探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对HaCaT细胞增殖的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20～80μg／mL范围内可抑制HaCaT细胞增殖且呈剂量依赖性；镜下观察到细胞稀疏，生长减慢，细胞形态拉长，细胞被阻滞于S期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制HaCaT细胞的增殖、诱导HaCaT细胞的凋亡。可用于治疗银屑病。
- 曾德贵莫衍石刘荣丰杨春燕林世平陈小谊兰柳波
- 关键词：芦荟大黄素银屑病
