公共文化服务平台

陈闻东: 作品数：15 被引量：36H指数：4; 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

RhoA-Rho激酶信号转导通路参与TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞(英文)被引量：6: 2013年; 血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞是血管重塑的重要病理特征。本研究旨在探讨小分子G蛋白RhoA及其下游Rho激酶信号通路在转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化中的作用。用10ng/mLTGF-β1诱导体外培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞,使用亲和沉淀法检测RhoA活性、使用免疫印迹检测RhoA、Rho激酶蛋白表达和Rho激酶活性;使用免疫印迹和免疫细胞化学检测肌成纤维细胞标记蛋白的表达。结果显示,TGF-β1上调体外培养的血管外膜成纤维细胞RhoA蛋白表达和RhoA活性。TGF-β1增加Rho激酶下游底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位的磷酸化,但不改变Rho激酶的蛋白表达,提示TGF-β1增加Rho激酶活性。腺病毒Ad-N19RhoA-hrGFP感染和Rho激酶特异性抑制剂Y27632都呈剂量依赖性地抑制TGF-β1诱导的肌成纤维细胞标记分子α平滑肌肌动蛋白和钙结合蛋白Calponin的蛋白表达。本研究证明RhoA-Rho激酶信号通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化。; 陈闻东楚玉峰刘建军洪墨纳高平进; 关键词：血管外膜成纤维细胞肌成纤维细胞 RHOA RHO激酶

腺病毒介导N19RhoA基因转染抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成被引量：2: 2012年; 目的探讨小分子G蛋白RhoA在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成中的作用和相关机制。方法将3～4月龄健康雄性SD大鼠分为5组：A组为正常对照组（10只）；B组为颈动脉球囊损伤组（10只）；C组为颈动脉球囊损伤＋Ad—CMV—eGFP＋PluronicF-127生物胶组（10只）；D组为颈动脉球囊损伤＋Ad—CMV—N19RhoA—eGFP组＋PluronicF-127生物胶（10只）；E组为颈动脉未损伤＋Ad—CMV—eGFP＋PluronicF-127生物胶组（10只）。建立颈动脉球囊损伤大鼠模型后，经血管外膜途径局部转染表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒，分析其对损伤血管新生内膜增生及组织中细胞增殖核抗原和α平滑肌细胞肌动蛋白表达的影响。结果大鼠颈动脉球囊损伤后14d，B组RhoA蛋白表达量高于A组（P〈0．01）。免疫组织化学检查显示，血管组织中细胞增殖核抗原和α．平滑肌细胞肌动蛋白的阳性细胞率C组分别为45．2％和75．6％，D组分别为28．4％和51．9％，两组间差异均有统计学意义（P均〈0．01）。D组血管新生内膜面积小于C组[（0．14±0．08）mm。比（0．23±0．10）mm^2，P〈0．01]，管腔面积大于c组[（0．47±0．11）mm^2比（0．31±0．06）mm^2，P〈0．01]。结论基因转染N19RhoA可抑制颈动脉球囊损伤后局部新生内膜形成，该作用可能与RhoA参与血管外膜成纤维细胞的增殖、表型转化以及迁移有关。; 楚玉峰陈闻东蒋进皎孟玫曾娟王春亭高平进; 关键词：GTP结合蛋白质类血管内膜转染

血管紧张素Ⅱ诱导血管外膜成纤维细胞表达炎症介质被引量：6: 2015年; 血管外膜成纤维细胞可能是血管炎症反应的重要参与者。本研究旨在探讨血管外膜成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导下能否表达包括趋化因子、黏附分子、炎症因子在内的各种炎症介质及其对炎性细胞的黏附、趋化作用。以AngⅡ诱导的血管外膜成纤维细胞和AngⅡ灌注的大鼠分别进行细胞水平和动物水平的研究。用1×10^(-7) mol/L AngⅡ诱导体外培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,real-time RT-PCR检测各炎症介质mRNA表达,免疫印迹、酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症介质蛋白表达和分泌。使用小鼠RAW264.7单核/巨噬细胞系进行体外细胞黏附和Transwell法体外细胞迁移趋化实验。结果显示,检测的12种炎症介质中,AngⅡ上调血管外膜成纤维细胞中4种炎症介质包括细胞间黏附分子1(ICAM-1)、P选择素(P-selectin)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)m RNA的表达;AngⅡ上调ICAM-1、P-selectin蛋白表达和IL-6分泌,但对MCP-1的分泌量无影响。AngⅡ诱导后的血管外膜成纤维细胞及其上清培养液能增加RAW264.7单核/巨噬细胞的黏附和迁移。采用皮下埋泵输入AngⅡ(200 ng/kg per min)2周的方法制备大鼠整体模型,取大鼠的胸主动脉进行免疫荧光染色。结果显示AngⅡ灌注大鼠的胸主动脉外膜侧有明显CD68阳性细胞聚集,且外膜侧ICAM-1、P-selectin、MCP-1和IL-6的表达都较对照组有不同程度上调。本研究结果表明血管外膜成纤维细胞在AngⅡ诱导下能表达分泌ICAM-1等炎症介质,这些炎症介质可能参与黏附、趋化单核/巨噬细胞,提示血管外膜成纤维细胞可能介导血管的炎症反应。; 陈闻东楚玉峰李晓东高平进; 关键词：血管外膜成纤维细胞血管紧张素II 炎症炎症介质

RhoA／ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达被引量：4: 2006年; 目的α-平滑肌-肌动蛋白(a-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记。本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transfor- ming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用。方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞；用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达。结果RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调。用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达。结论RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程。; 陈闻东朱鼎良姬开达高平进; 关键词：RHOA KINASE 肌成纤维细胞反义寡核苷酸

RhoA/Rho激酶通路在血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表达纤维连接蛋白中的作用被引量：1: 2015年; 目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)纤维连接蛋白(FN)表达的影响,并探讨RhoA/Rho激酶通路在AngⅡ诱导FN表达中的相关机制。方法分别以不同时间(0、6、12、24、48h)和不同剂量(0、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠VAF,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测FN的表达变化,并分别应用表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒和Rho激酶抑制剂Y27632进行干预,观察其对AngⅡ诱导FN表达的影响。结果 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN。应用10-7 mol/L AngⅡ刺激VAF 24h,FN mRNA表达和蛋白表达增高最为明显(均P<0.05)。与AngⅡ刺激组比较,表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒和Y27632可明显抑制AngⅡ诱导的FN mRNA(N19RhoA组0.78±0.11,Y27632组0.72±0.08比AngⅡ刺激组1.82±0.12,均P<0.05)和蛋白表达(N19RhoA组1.56±0.12,Y27632组1.43±0.12比AngⅡ刺激组3.89±0.32,均P<0.05)。结论 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN,RhoA/Rho激酶通路参与了该过程的调控。; 楚玉峰陈闻东周海燕蒋进皎何晓鹏赵鹏王春亭任宏生; 关键词：血管外膜成纤维细胞纤维连接蛋白

血管外膜肌成纤维细胞分化的基因表达谱(英文)被引量：5: 2006年; 我们以往的研究表明,TGF-β1可以诱导血管外膜成纤维细胞(adventitiai fibroblasts,AFs)向肌成纤维细胞(myo- fibroblasts,MFs)分化。为寻找可能涉及MF分化的基因,本实验采用寡核苷酸芯片技术动态检测细胞表型转化过程中基因表达的变化,实时定量RT-PCR验证芯片结果。在芯片上的15866条总探针组中,2121个探针组在TGF-β1刺激后至少一个时间点的表达发生2倍以上变化,其中1318个基因表达上调,761个基因表达下调,还有少数基因(42个)在不同的时间点既有上调又有下调表达。在1231个已知功能基因中,分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1,APPI)、Rho- associated coiled-coil forming kinase 2(ROCK2)的表达趋势与标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达趋势相同,TGF-β1诱导MF分化过程中上调了电压门控性钾通道Shal家族成员2(potassium voltage-gated channel,Shal-related family and mem- ber 2,KCND2)的表达,这些基因参与了MF的分化；此外,还发现内皮素1(endothelin 1,EDN1)、补体成分、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和NAD(P)H dehydrogenase,quinone 1(NQO1)可能参与了MF分化。本实验用寡核苷酸芯片技术验证了通过其它技术证实的同MF分化相关的基因,并发现了新的涉及该过程的基因,基因表达谱研究有利于鉴定参与细胞分化的基因和通路。; 郭淑杰吴凌云沈伟利陈闻东魏坚高平进朱鼎良; 关键词：寡核苷酸芯片外膜成纤维细胞分化

野生型犬尿氨酸酶表达载体的构建及酶活性检测: 2017年; 目的构建野生型犬尿氨酸酶(KYNU)的真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达及其酶活性。方法抽提人肝脏细胞的总RNA,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得KYNU基因全长cDNA,将野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,用蛋白质印迹法技术检测野生型KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法(HPLC)检测HEK293细胞表达的野生型KYNU酶蛋白的活性。结果通过测序及酶切鉴定野生型pcDNAKYNU重组表达质粒扩增后的PCR产物电泳结果显示构建成功,蛋白质印迹法结果显示转染有重组野生型cDNA-KYNU质粒的HEK293细胞能表达KYNU蛋白,HPLC结果显示野生型KYNU酶存在活性。结论成功构建野生型pcDNA-KYNU的真核表达载体,野生型重组质粒在HEK293细胞中能够表达KYNU并具有一定的酶活性。; 沈杰陈闻东姬开达高平进朱鼎良; 关键词：野生型高血压高效液相色谱法

RhoA对AngⅡ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响被引量：4: 2007年; 目的构建dominant negative N19RhoA重组腺病毒并感染血管外膜成纤维细胞(AF),观察RhoA对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的AF增殖的影响。方法运用pAdEasy-1腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因N19RhoA的腺病毒重组质粒pAd-CMV-N19RhoA-eGFP,并感染体外培养的大鼠AF,然后用1×10-7mol/L的AngⅡ处理24 h。Rho pull-down分析法测定RhoA活性;BrdU ELISA法检测AF的增殖情况。以同时构建的pAd-CMV-eGFP作为对照。结果1×10-7mol/L AngⅡ处理感染pAd-CMV-N19 RhoA-eGFP的AF 30 min后,其GTP-RhoA的表达明显升高,提示AngⅡ可激活RhoA信号分子;感染pAd-CMV-N19 RhoA-eGFP的AF,AngⅡ诱导的BrdU掺入明显受到抑制。结论RhoA信号分子对AngⅡ诱导的AF增殖具有调节作用。; 楚玉峰陈闻东朱鼎良高平进; 关键词：RHOA 血管外膜成纤维细胞增殖腺病毒

VEGF及VEGFⅠ型受体在血管外膜成纤维细胞的表达: 目的探讨VEGF及VEGF受体在血管外膜成纤维细胞的表达及其意义。方法采用酶联免疫吸附试验探测培养的外膜成纤维细胞中VEGF分泌及TGF-β,PDGF,bFGF,AngⅡ对其分泌的影响,以蛋白免疫印迹杂交方法观察TGF-...; 葛晓利陈闻东姬开达高平进; 关键词：外膜成纤维细胞 TGF; 文献传递

RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化被引量：9: 2007年; 目的血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用。通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用。方法AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24hROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响。结果AngⅡ刺激使AFRhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加。刺激30min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12hMYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍。dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管AFα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75%。结论AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化。; 楚玉峰陈闻东朱鼎良高平进; 关键词：RHOA ROCK 血管外膜成纤维细胞肌成纤维细胞

陈闻东

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

陈闻东

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈