黄坚
- 作品数：2 被引量：15H指数：1
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 应用一步亲和层析法纯化转基因山羊乳腺定位表达的组织型纤维蛋白溶酶原激活剂
- 2000年
- 对转基因山羊乳腺定位表达的羊奶中组织型纤维蛋白溶酶原激活剂 ( t PA)的分离纯化方法作了研究 ,摸索出一种简单可行的纯化方法。羊奶中 t PA先经冰乙酸和丙酮沉淀后 ,再通过 Benzamidin Sepharose 6B柱一步亲和层析 ,纯化倍数达 671 4.3倍 ,比活性 1 880 0 0 U/mg,活性回收率 2 6%。经 SDS-PAGE还原电泳分析 ,t PA纯度大于 95%,其中低分子双链蛋白占 90 %以上 ;Western-blotting检测证实 ,它和天然 t PA具有相同的抗原性 ;用纤维蛋白平板法检测 ,其比活性与天然 t PA相近 ,并且都可被 t
- 黄坚宋新荣任启生殷震
- 关键词：羊奶TPA溶栓剂
- 重组rPA基因在毕赤酵母细胞中的胞内表达研究被引量：15
- 2003年
- 目的构建含rPA全长基因的重组酵母胞内表达质粒pPIC9K rPA ,并在毕赤酵母中进行表达。方法用限制性内切酶BamHI和NotI将含有rPA全长基因的质粒pJZ1 6双酶切后 ,克隆至酵母表达载体pPIC9K中 ,构建酵母重组表达质粒。rPA基因经DNA序列测定准确无误。通过电穿孔法转染毕赤酵母菌GS1 1 5 ,PCR鉴定阳性酵母转化子 ,将rPA基因整合入酵母基因组DNA ,在毕赤酵母中实现了胞内非融合表达。表达产物进行SDS PAGE、Western blots以及溶纤维蛋白活性检测。结果表达产物以胞内包涵体的形式存在 ,未糖基化。SDS PAGE结果显示表达蛋白质的相对分子量约为 39kD。Western blots检测表明表达蛋白质能与单克隆抗体发生特异性反应。包涵体经 8mol L脲溶液溶解后 ,有明显的溶纤维蛋白活性。
- 黄坚龙青任启生宋新荣张茂林殷震
- 关键词：毕赤酵母
