黄志伟
- 作品数：38 被引量：42H指数：4
- 供职机构：东华大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 人胰岛素B27K-DTrI前体在毕赤酵母中发酵条件的优化被引量：2
- 2011年
- B27K-DTrI(B27位突变为赖氨酸的去三肽胰岛素)具有单体性质好,生物活性高等特点,是潜在的速效人胰岛素药物。在前期实验中,筛选到了一株高拷贝、高表达B27K-DTrI前体的S菌株。为提高人胰岛素B27K-DTrI前体在重组毕赤酵母S菌中的表达量,优化了S菌5 L发酵条件(温度、pH)。结果显示:pH 5.0,温度25℃,诱导108 h后,人胰岛素B27K-DTrI前体蛋白的表达量最高,可达114 mg/L。
- 郝贺龙黄志伟张兴群于铭文陈婷
- 一种基于毛细管电泳的细胞内的5‑氟胞嘧啶和5‑氟尿嘧啶的检测方法
- 本发明涉及一种基于毛细管电泳的细胞内的5‑氟胞嘧啶和5‑氟尿嘧啶的检测方法，用携带自杀基因FCY1的质粒转染细胞，并在培养基中添加5‑氟胞嘧啶和/或5‑氟尿嘧啶进行培养，然后收集细胞代谢提取物；采用毛细管电泳法对细胞代谢...
- 黄志伟史萍刘亚敬王桥
- 脂肪酸延长酶缺陷对酵母细胞脂质代谢及油酸胁迫响应的影响被引量：3
- 2018年
- 生物医学证据表明,过量的油脂特别是脂肪酸(fatty acids,FA)在非脂肪组织累积会引起脂代谢障碍,引起细胞功能紊乱或坏死。脂肪酸延长酶家族参与脂肪酸代谢,具有真核生物的高度保守性,且与膜脂的代谢密切相关。但脂肪酸延长酶与细胞脂毒效应的关系并不清楚。该文利用模式生物酿酒酵母在脂类代谢研究中性状易于表征、遗传操作便利的优势,通过对比脂肪酸延长酶缺陷型elo1Δ、elo2Δ和elo3Δ与野生型酵母(wild-type,WT)对不同脂肪酸胁迫的响应,发现极长链脂肪酸延长酶基因ELO2和ELO3缺陷后对油酸(oleic acid,OLA)高度敏感;细胞脂滴及中性脂质的代谢对维持细胞脂类平衡起关键作用。研究结果显示,长链脂肪酸的合成缺陷或油酸处理均促进细胞脂滴的形成,同时显著提高细胞中性油脂(TAG)和甾醇酯(SE)合成;采用气相色谱–质谱联用技术分析脂肪酸组成,结果显示,ELO3缺陷,C_(26)脂肪酸基本检测不到,而C_(20)与C_(22)脂肪酸会累积;ELO2缺失后,C_(26)脂肪酸的含量也明显降低。而油酸的处理会增加BY4741胞内总的极长链脂肪酸的比例;elo2Δ和elo3Δ的不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比例增大;相反,过表达脂肪酸延长酶基因,与野生型菌株相比能显著降低细胞油酸的含量。模式生物脂肪酸延长酶对细胞脂质代谢及油酸胁迫响应的研究,为医学脂代谢障碍及细胞脂毒效应研究提供了基础数据。
- 程迅杜秀秀王寒冬黄志伟邓云霞沈裕虎
- 关键词：脂代谢
- 一种简单高效的酵母单菌落PCR方法被引量：7
- 2013年
- 目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落PCR方法。方法:以Leu2MX6基因同源重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基因组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制备PCR模板进行重组克隆鉴定,并对6种PCR模板制备方法的效果进行比较与分析;对加热提取法进行优化并进行重组子的提取和验证。结果与结论:直接以1 mm2单克隆菌株95℃处理5 min后的酵母菌落水悬浮液为模板进行单菌落PCR,是一种简单高效的酵母重组克隆鉴定方法。该方法能弥补传统方法的不足,且简便快速、结果稳定,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段。同时,这种单菌落PCR法也可应用于重组毕赤酵母的阳性克隆筛选。
- 陈忠翔房志家陈婷赵敏黄志伟
- 关键词：酵母菌落PCR重组克隆
- 一种获取年龄、预测肿瘤疾病发生的实时荧光PCR试剂盒
- 本发明涉及一种获取年龄、预测肿瘤疾病发生的实时荧光PCR试剂盒，利用甲基化特异性聚合酶链反应和Real‑time绝对定量PCR方法探索hTERT基因启动子区域CpG位点甲基化程度与人的年龄和肿瘤疾病发生的关系，建立回归模...
- 黄志伟辛叶陈冉冉朱倩史萍孔颖颖张晓宇
- 酿酒酵母转化方法的新探索被引量：7
- 2012年
- 在现有电转化和聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)诱导的化学转化的基础上,进一步研究和探索了酿酒酵母感受态细胞不同预处理及相应的转化条件对转化效率的影响。结果表明:处于对数生长早期(OD600=0.6)的酵母细胞的转化效果最佳;电转化中分别以120 mmol/L的DTT和300 mmol/L的LiAc预处理感受态酵母菌10 min,可以得到较高的转化效果;联合使用120 mmol/L DTT和300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到7.15×105cfu/μg,PEG/LiAc诱导的化学转化中使用300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到2.75×105cfu/μg,远高于文献报道的水平。同时证明了改进后的转化方法同样能够提高外源DNA同源重组转化效率。
- 房志家陈婷郝贺龙张兴群黄志伟
- 关键词：酿酒酵母电转化DTT
- 一种TAG代谢障碍型肥胖酵母模型的构建方法
- 本发明涉及一种TAG代谢障碍型肥胖酵母模型的构建方法，包括：以酿酒酵母BY4742α单倍体为出发菌株，针对三酰甘油代谢中起主要作用的水解酶编码基因TGL3、TGL4进行敲除，同时高表达PAH1基因，人为制造TAG代谢障碍...
- 黄志伟房志家陈婷张兴群
- 文献传递
- 四种药用植物提取物抑菌保鲜活性的研究被引量：6
- 2012年
- 应用滤纸片扩散法、微量稀释法等方法研究银杏叶、当归、党参(野生)、藏茵陈4种药用植物水和乙醇提取物抑菌效果以及在食品保鲜方面的应用。结果表明水提取物均无明显的抑菌活性;银杏叶、藏茵陈醇提取物对金黄色葡萄球菌有抑菌活性,对大肠杆菌、酿酒酵母无明显抑菌效果,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为450、160μg/mL。发现随着基质pH的改变,2种提取物的最低抑菌浓度随pH的增加而升高,但变化趋势较常用防腐剂山梨酸钾和苯甲酸弱,在pH5～8的范围,2种提取物的最低抑菌浓度均低于山梨酸钾。在模式食品中将提取物与山梨酸钾、苯甲酸进行联合添加具有协同增效抑菌活性,可降低化学防腐剂的用量,尤其是与苯甲酸联合添加,可在一周内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。
- 陈丽凤陈婷房志家赵敏黄志伟
- 关键词：天然防腐剂抑菌效果最低抑菌浓度山梨酸钾
- 一种检测活体酵母细胞UPR水平的双荧光素酶监测质粒及其构建和应用
- 本发明涉及一种检测活体酵母细胞UPR水平的双荧光素酶监测质粒及其构建和应用，质粒为pUST-08质粒，利用基因克隆技术，依次将Gal10p、Rluc-Hac1p、Hac1i、Fluc克隆到质粒YCplac33中，组成Ga...
- 黄志伟房志家匡鑫杜秀秀刘伟伟肖君华
- 文献传递
- 两种价态铬(Ⅲ,Ⅵ)对真核酵母细胞谷胱甘肽水平影响
- 2020年
- 工业的迅猛发展使得重金属污染加剧,得到了人们的广泛关注。铬(Cr)在化工业中的广泛应用,使其成为一种主要的环境污染重金属离子。酿酒酵母是研究金属毒性最常用的生物之一。本文比较了三种铬盐(三氯化铬、三氧化铬、重铬酸钾)对酿酒酵母生长的影响,半抑制浓度的两种价态铬(Cr^3+,Cr^6+)处理酵母细胞,Cr^6+引起细胞的致死率更高。已有研究表明谷胱甘肽是胞内重要的还原剂,常用于细胞的重金属解毒,因此探究了两种价态的铬对酵母胞内谷胱甘肽水平的影响。结果显示重铬酸钾和三氧化铬浓度的升高都会引起胞内含量显著降低,而三氯化铬基本不变,过表达GSH1基因有利于提高酵母细胞对Cr^6+的抗性,但对Cr^3+没有明显效果,这说明两种价态铬在胞内生化作用方式不同,细胞应对的解毒机制也不一样。该研究对工业含铬废弃物处理和微生物治理环境污染提供了理论依据。
- 陈冉冉朱倩赵敏黄志伟
- 关键词：三价铬六价铬谷胱甘肽
