关丽
- 作品数：8 被引量：12H指数：3
- 供职机构：山西医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 刚地弓形虫滑行相关蛋白45基因的生物信息学分析、克隆表达及重组蛋白的免疫保护性研究
- 目的 生物信息学分析刚地弓形虫滑行相关蛋白45（TgGAP45）的基因及蛋白质序列。克隆、表达TgGAP45基因，纯化rTgGAP45并且分析可能具备的抗原性质。观察不同剂量rTgGAP45不同途径免疫小鼠诱导的免...
- 关丽
- 关键词：刚地弓形虫免疫保护
- 文献传递
- 重组刚地弓形虫棒状体蛋白17(rTgROP17)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答
- 目的 观察不同剂量重组刚地弓形虫棒状体蛋白17(rTgROP17)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答.方法 40只BALB/c小鼠,随机分为5组,分别用15 μg、25μg、35 μg、45 μg rTgROP17溶于20 μl...
- 张铁娥关丽王海龙孟晓丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫黏膜免疫
- 丙烯酰胺对小鼠睾丸生精细胞周期的影响
- 2013年
- 目的研究丙烯酰胺(Acrylamide,AA)对小鼠睾丸生殖细胞周期的影响。方法将7～8周龄40只清洁级健康雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组(蒸馏水),不同剂量的AA(10、20和40 mg/kg)组。对小鼠连续灌胃5周,每周6 d。于首次染毒后第36天处死小鼠,采用流式细胞仪检测小鼠生精细胞的周期。结果 FCM结果显示,与对照组相比,各剂量染毒组的1C细胞明显减少,2C细胞的比例显著提高(P<0.01),且10和20 mg/kg剂量组1C和2C细胞的比例差异无统计学意义(P>0.05)。10和20 mg/kg剂量组4C细胞的比例较对照组增加,40 mg/kg组4C细胞的比例低于前两组,但仍高于对照组,且均有统计学意义(P<0.01)。各染毒组1C∶4C,及1C∶2C均明显低于对照组(P<0.01),但各染毒组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。4C∶2C仅在40 mg/kg剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AA对小鼠生精细胞有一定的抑制作用,降低了精原细胞转化为精子的效能,使生精过程发生障碍。其致细胞凋亡作用的靶细胞可能是精原细胞。
- 杨建一张晓玲李媛李雅清祝建疆关丽王丹丹刘百岁张浩朱贵伟鲁晨阳薛国平
- 关键词：丙烯酰胺睾丸生精细胞细胞周期流式细胞术
- 刚地弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体的构建、表达及其激酶活性分析被引量：5
- 2014年
- 目的构建刚地弓形虫RH株棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体,对表达产物进行激酶活性的检测和功能分析。方法根据刚地弓形虫ROP17蛋白编码基因(GenBank登录号为AM075203.1)设计引物,以弓形虫RH株速殖子总RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因片段,克隆至真核表达载体p3×Flag-CMV-14,构建重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17。经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染至人胚肾细胞(HEK293T),RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析表达产物;Western blotting检测其激酶活性;流式细胞术分析ROP17对转染宿主细胞凋亡的影响。结果 RT-PCR结果显示,从RH株弓形虫速殖子中扩增出约1 850 bp的基因片段。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17构建成功且序列正确。RT-PCR和Western blotting结果显示,在转染p3×Flag-CMV-14/TgROP17的细胞中有TgROP17的表达,基因片段大小为1 850bp,蛋白质相对分子质量(Mr)约为70 000,而转染空质粒组未见表达。Western blotting结果显示,ROP17可以磷酸化c-Jun蛋白;流式细胞术结果显示,ROP17抑制喜树碱(CPT)诱导的细胞凋亡,6 h和12 h的抑制率分别为20.6%和24.1%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体p3×Flag-CMV-14/TgROP17,其表达产物具有激酶活性且能够抑制细胞凋亡。
- 王海龙殷丽天张铁娥关丽孟晓丽刘红丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫真核表达丝氨酸苏氨酸激酶细胞凋亡
- 刚地弓形虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆及原核表达
- 2013年
- 目的克隆刚地弓形虫蛋白质二硫键异构酶(TgPDI)基因,原核表达、纯化重组TgPDI蛋白,并分析其免疫反应性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgPDI基因全长编码序列(登录号为AJ306291.2)的开放阅读框设计合成引物,并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经双酶切后连接入pET-30a(+)载体,重组质粒pET-30a(+)-TgPDI转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切并测序鉴定。将重组质粒pET-30a(+)-TgPDI转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3),并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物;分别以抗His抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白及其免疫反应性;重组蛋白His-TgPDI通过Ni2+琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化,纯化蛋白经SDSPAGE分离,考马斯亮蓝染色结合凝胶成像系统分析其纯度。结果 RT-PCR扩增产物约为1 427 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET-30a(+)-TgPDI构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得约57 kDa的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的重组蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。亲和纯化后获得纯度大于95%的重组TgPDI蛋白质。结论克隆得到弓形虫PDI基因,原核表达并纯化出该基因编码的蛋白,且该重组蛋白具有免疫反应性。
- 王海龙李润花殷丽天孟晓丽刘红丽张铁娥关丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫蛋白质二硫键异构酶原核表达免疫反应性
- AT1R和eNOS在盐敏感性高血压发生中作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在盐敏感性高血压发生发展中的作用。方法用乳鼠皮下注射辣椒辣素法建立模型。哺乳期后,大鼠随机分成4组:对照组、高盐组、辣椒辣素组、辣椒辣素+高盐组,喂养4周后处死大鼠,免疫组化检测大鼠腹主动脉AT1R和eNOS蛋白表达,反转录-聚合酶链式反应检测大鼠腹主动脉AT1R和eNOS mRNA表达。结果与对照组比较,辣椒辣素组大鼠动脉AT1R蛋白表达量增加0.70倍(P<0.01),而动脉eNOS蛋白表达量降低20.5%(P<0.05),eNOS mRNA的表达降低0.80倍(P<0.05);与对照组比较,辣椒辣素+高盐组大鼠动脉AT1R蛋白表达量增加1.69倍(P<0.01),AT1R mRNA表达量提高1.70倍(P<0.01),而动脉eNOS蛋白表达量降低60.2%(P<0.01),eNOS mRNA表达降低2.52倍(P<0.01)。结论感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠动脉AT1R表达升高,同时eNOS表达降低,AT1R和eNOS表达水平的差异可能与盐敏感性高血压的形成有关。
- 张娟白宝琴李莉殷丽天关丽杨建一
- 关键词：盐敏感性高血压
- 刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因的克隆和原核表达及纯化和抗原性分析被引量：1
- 2013年
- 目的克隆刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1(TgRACK1)基因,原核表达、纯化TgRACK1,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgRACK1基因全长编码序列(GenBank登录号:AY547291)的开放阅读框设计引物并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6p-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌DH5α,阳性菌落经菌液PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1转化至大肠埃希菌BL21(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物;分别以抗GST标签抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,免疫印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白及其抗原性。重组融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE分离,考马斯亮蓝染色结合凝胶成像系统分析其纯度。结果 RT-PCR扩增产物约为970 bp,重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1构建成功。经IPTG诱导获得相对分子质量约63 kDa的可溶性重组蛋白。诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组融合蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。亲和纯化后获得纯度大于95%的重组TgRACK1蛋白质。结论克隆得到弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因,原核表达并纯化出该基因编码的蛋白质,且该重组蛋白具有抗原性。
- 王海龙殷丽天孟晓丽张铁娥关丽刘红丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫原核表达抗原性
- 重组弓形虫肌动蛋白解聚因子滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及保护作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次。末次免疫后14d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。每组另取5只小鼠,用4×104 RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率。其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30d处死,计数肝、脑组织速殖子。结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。致死性攻击后30d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20%,差异有统计学意义(P<0.01);慢性感染后30d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87%(P<0.01)和50.14%(P<0.05)。结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗。
- 关丽张铁娥王海龙孟晓丽杨建一殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子黏膜免疫
