刘艳红
- 作品数：42 被引量：233H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程医药卫生更多>>
- 可溶性E2蛋白作为抗原的检测猪瘟病毒血清抗体间接ELISA方法的建立被引量：10
- 2009年
- 以可溶性重组E2蛋白作为抗原,建立了猪瘟病毒(CSFV)血清抗体间接ELISA诊断方法(rE2-ELISA)。将猪瘟疫苗毒株E2基因主要抗原区(A-D)基因克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化E.coli,降低诱导温度至20℃,获得48 000大小E2融合蛋白,部分目的蛋白以可溶性形式表达。Western blotting试验证实,E2融合蛋白可以和CSFV阳性血清发生特异性结合。亲和层析纯化后的E2融合蛋白作为抗原,建立了检测CSFV血清抗体的间接rE2-ELISA方法。该方法的特异性试验结果表明,与PRRSV、PCV2、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rE2-ELISA和国外同类试剂盒(CSF-Ab-Kit)检测142份田间血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为83.81%和88.73%。因此,rE2-ELISA猪瘟抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合应用在大规模的CSFV血清抗体的检测工作中。
- 尹双辉尚佑军刘艳红蔺芳才学鹏刘湘涛
- 关键词：猪瘟病毒可溶性表达抗体检测
- 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法
- 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法，包括下述步骤：A.克隆E2基因抗原结构域部分；B.构建重组表达载体；C.在LB培养基中表达，获得可溶性的重组E2蛋白；D.亲和层析纯化重组E2蛋白；E.pGST－E...
- 刘湘涛尹双辉孙世琪田宏尚佑军韩雪清刘艳红
- 文献传递
- CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性被引量：1
- 2023年
- 为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。
- 王凌云郝荣增杨洋李亚军卢炳州毛玉涵张越龚真莉刘艳红齐萌茹毅郑海学
- 关键词：抗病毒活性
- CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2-E^(rns)融合蛋白及免疫原性分析被引量：1
- 2023年
- 本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-E^(rns),转染CHO细胞,进行上清分泌表达;离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性;使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,通过细胞免疫荧光(IFA)试验和间接ELISA试验鉴定E2-E^(rns)融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果,通过CHO细胞表达系统,成功制备了纯化的BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,Western-blot鉴定结果显示,His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示,一免后第7天血清抗体呈阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平可达1∶512000,且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明,本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性,为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。
- 李亚军郝荣增茹毅龚真莉刘艳红郑海学
- 关键词：免疫原性
- 高山冰缘植物游离氨基酸的含量分析被引量：10
- 2005年
- 以乌鲁木齐河源区22种主要高山冰缘植物花期叶片为实验材料,分析了游离氨基酸含量.结果表明:多数高山冰缘植物积累大量游离中性氨基酸,总游离氨基酸以脯氨酸(Pro)、苏氨酸(Thr)、天门冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)为主要成分.同一植被带不同植物积累游离氨基酸的种类和水平不同,如高山离子芥(Chorisporabungeana)的游离Pro含量占其总游离氨基酸含量的百分比均高出雪莲、黄花夏至草和黄头小甘菊13倍多,含量差异明显.3个植被带植物总游离氨基酸、Pro和中性氨基酸的平均含量,高山流石堆植被高于高山垫状植被和高山草甸植被,高山垫状植被总游离氨基酸和中性氨基酸含量高于高山草甸植被.高山冰缘植物积累不同种类和不同含量水平的游离氨基酸是对严酷环境的一种适应.
- 刘艳红安黎哲张满效陈拓徐世健刘光琇王勋陵
- 关键词：高山冰缘植物游离氨基酸脯氨酸环境适应
- 口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到0.3×10^-3-3×10^-3μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。
- 龚真莉蒋韬祁淑芸陈国栋刘艳红李勇
- 关键词：口蹄疫病毒3D基因生物素探针
- A型口蹄疫病毒P1基因与GFP基因的重组逆转录病毒载体构建
- 根据逆转录病毒表达载体pBABA-puro的特点及多克隆酶切位点要求设计引物，以A型FMDV XJ-99的Pl2X基因和GFP基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR方法扩增各基因片段。酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体...
- 刘艳红安芳兰刘俊林李炯刘相涛尚佑军
- 关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白基因
- 文献传递
- 逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达被引量：11
- 2009年
- 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 李炯刘艳红安芳兰刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏
- 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒绿色荧光蛋白基因BHK-21细胞
- 鉴别感染羊驼4种病毒多重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2023年
- 为了建立一种用于羊驼易感的羊口疮病毒(ORFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)、口蹄疫病毒(FMDV)、蓝舌病病毒(BTV)鉴别的多重PCR检测方法,根据GenBank中公布的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV参考株基因序列分别设计特异性引物,优化引物、dNTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度,通过敏感性和重复性检验,并对60份羊驼粪便样品和35份羊驼咽拭子样品进行验证。结果显示,所建立的多重PCR方法能够有效区分ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV,最低检测限分别为3.18×10^(4)copies/μL、3.13×10^(1)copies/μL、3.06×10^(1)copies/μL、2.95×10^(2)copies/μL。结论:所建立的多重PCR方法能够同时快速鉴别羊驼感染的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV,具有较高的应用价值。
- 于远光岳涛马晓宁张永兴王萌曾巧英刘艳红高闪电独军政吴锦艳李坤许小红
- 关键词：羊驼口蹄疫病毒羊口疮病毒蓝舌病病毒牛病毒性腹泻病毒
- 口蹄疫病毒部分免疫功能肽段的合成、鉴定及免疫功能评价
- 2015年
- 利用微波多肽合成仪Liberty,合成O型口蹄疫病毒VP1 140～160和200～213氨基酸序列的两条肽段,并用高压液相色谱仪及质谱分析仪就合成的多肽片段进行分析纯化和鉴定;将合成的多肽片段作为半抗原与载体蛋白BSA偶联,免疫小鼠,进行血清制备和抗体效价测定.结果表明：成功合成了口蹄疫2条免疫功能短肽,其纯度均达到80%以上.半抗原成功与载体蛋白偶联;小鼠抗血清经过抗体效价检测证明半抗原与载体蛋白偶联组的抗体水平高于其余2个对照组,但是达不到免疫保护的水平.同时说明Liberty是一种操作简单、方便,合成效率高的多肽合成仪,可高效合成研究用多肽.
- 龚真莉蒋韬祁淑芸陈国栋李勇刘艳红
- 关键词：口蹄疫病毒
