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CDMP1转基因间充质干细胞片修复兔软骨缺损: 2014年; 目的探讨软骨源性形态发生蛋白-1（CDMP-1）转基因细胞片修复兔软骨缺损的能力.方法腺病毒转染CDMP1基因至第4代兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）中,连续培养7～14 d后接种至温度敏感性培养皿中制备细胞片,real time PCR和Western blot法检测转基因细胞片的CDMP1及Ⅱ型胶原蛋白表达;用细胞片工程技术构建组织工程化细胞片并移植入兔甲状软骨缺损处修复软骨缺损.实验分：1）BMSCs细胞片组;2）转染As-CMV-eGFP细胞片组;3）转染As-CMV-hCDMP1-IRES-eGFP细胞片组.分别于术后4和8周检测工程化软骨的Ⅱ型胶原蛋白及蛋白多糖（GAG）表达.结果检测到转基因细胞片中CDMP1的表达;所获得的工程化软骨免疫组化和阿利新蓝染色显示：A组Ⅱ型胶原蛋白和GAG表达阳性,B组和C组Ⅱ型胶原蛋白和GAG表达阴性（P＜0.05）.结论 CDMP转基因细胞片具有较好的软骨分化活性,可有效地修复兔喉软骨缺损.; 崔颖姚梅胡晶李俊霞王宇张本; 关键词：腺病毒转染软骨组织工程

重组hCDMP1腺病毒转染骨髓间充质干细胞对其向软骨分化的影响被引量：3: 2012年; 目的探讨人软骨源性形态发生蛋白1(CDMP1)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用腺病毒转染方法将重组人CDMP1(hCDMP1)基因转入体外培养的兔BMSCs,用免疫印迹法(Western blot)检测hCDMP1蛋白质的表达,并通过检测细胞增殖能力(MTT法)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)以及蛋白多糖的表达,分析转染hCDMP1对BMsCs增殖、分化的影响。结果 hCDMP1蛋白在基因转染细胞内得到正确表达;hCDMP1基因转染组和对照组相比,ColⅡ、蛋白多糖表达水平显著增高(P<0.05),而细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论外源基因转染可以使BMSCs表达有生物活性的hC-DMP1,高表达的hCDMP1可以促进BMSCs向软骨表型分化,但对细胞增殖无明显影响。; 王月田崔颖潘欣宇姚梅张本李谌; 关键词：骨形态发生蛋白质类骨髓间质干细胞转染

软骨源性形态发生蛋白1转基因细胞片的初步探讨: 2014年; 目的探讨软骨源性形态发生蛋白1（cartilage．derivedmorphogeneticprotein1，CDMPl）转基因细胞片的构建及其活性鉴定。方法取1月龄新西兰白兔骨髓分离培养BMSCs，取第3～6代细胞进行实验。实验分为3组，A组：腺病毒（adenovirus，Ad）．巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-人CDMP1（humanCDMPl，hCDMP1）-内部核糖体进入位点（internalribosomeentrysite，IRES）．增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）转染BMSCs，B组：Ad-CMV-EGFP（空载体腺病毒）转染BMSCs，C组：未转染的BMSCs。倒置荧光显微镜观察3组细胞荧光表达情况，MTT法检测3组细胞增殖活力。将3组处于对数生长期的细胞接种于温度敏感性6孔板获得细胞片，行形态学及HE染色观察，RT-PCR及Westemblot检测3组细胞片hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白表达，阿利新蓝染色检测糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）表达。结果倒置荧光显微镜下观察示转染细胞在72h表达明亮荧光，转染效率达90％；MTT法检测示，3组细胞生长曲线基本呈S形，培养1～9d吸光度（A）值比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。通过温度敏感性6孔板体外可成功收获完整的三维立体细胞片结构，RT-PCR及Westemblot检测示，A组细胞片中hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白均呈阳性表达，B、C组均为阴性。HE染色和阿利新蓝染色示，A组纤维组织丰富，细胞外基质较多，蓝色异染颗粒多；B、C组细胞外基质相对较少，无明显特异性蓝染颗粒；A组GAG阳性染色面积明显低于B、C组，灰度值明显高于B、C组（P〈0．05）。结论hCDMPl基因转染的BMSCs细胞片能表达II型胶原和GAG，具有成软骨活性，其克服了传统组织工程中细胞利用率低、支架异质性等缺点，有望构建出致密的组织工程软骨，为软骨组织工程进一步发展提供了新思路。; 姚梅崔颖王月田张本付文举; 关键词：软骨组织工程 BMSCS

bFGF在Medpor-肋软骨联合兔耳廓再造术: 2013年; 目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在Medpor-肋软骨联合耳廓再造术中的应用效果,探讨其使用意义。方法构建兔肋软骨与Medpor耳廓复合支架模型,植于兔背部皮下,将实验动物分成两组:肋软骨与Medpor材料直接连接组(A组);肋软骨与Medpor材料直接连接后bFGF处理组(术中及术后2 d,每日局部注射bFGF 200 ng)(B组)。植入后7 d、14 d、28 d取出复合支架,行组织学观察,免疫组织化学法(SABC法),检测Medpor片边缘及内部CD34表达,并行微血管密度(microvessel density,MVD)计数。结果 B组术后早期Medpor材料周边纤维组织增生与血管化较A组明显,但后期血管化程度与A组无明显差异。结论术后早期应用bFGF对复合支架的纤维化及血管化过程起到明显的促进作用,加强了Medpor与软骨片的连接,增强了复合支架的稳定性及抗感染力。; 姚梅崔颖; 关键词：多孔高密度聚乙烯耳廓再造血管化

转基因细胞片复合PLGA支架修复兔软骨缺损的研究: 2014年; 细胞片技术是应用组织工程方法使培养细胞从培养表面分离而形成含有细胞外基质的一层完整片状结构,弥补了传统组织工程技术的不足,是获取种子细胞以及对种子细胞进行转移的一项新技术。为探讨体外生长分化因子-5(GDF5)基因转染修饰的BMSCs细胞片与GDF5转基因BMSCs负载的PLGA支架形成的共聚物修复兔甲状软骨缺损的效果,实验通过腺病毒转染GDF5基因至四代兔BMSCs,温度敏感性培养皿制备GDF5转基因细胞片并与负载有转染GDF5基因BMSCs的PLGA支架复合,移植至同种兔甲状软骨缺损处,分别于术后4、8周行大体观察和组织学检测其修复效果。实验分3组:(A)转基因细胞片包裹负载有转基因BMSCs的PLGA支架组;(B)负载有转基因BMSCs的PLGA支架组;(C)负载BMSCs的PLGA支架组。结果显示,体外成功收获了完整的GDF5转基因细胞片,Real time PCR检测到GDF5 mRNA的表达,行大体组织的II型胶原免疫组化和阿利新蓝染色显示:A组和B组均表达II型胶原和糖胺聚糖(GAG),但A组表达高于B组,有统计学意义(P<0.05)。由此可得,转基因细胞片包裹负载转基因BMSCs PLGA支架较传统转基因BMSCs负载PLGA支架方法具有更加优越的成软骨能力,能更有效地促进软骨缺损的修复。; 姚梅崔颖胡晶李俊霞王宇; 关键词：BMSCS 软骨修复

以转染CDMP1基因的BMSCs修复软骨缺损被引量：2: 2013年; 目的探讨CDMP1基因转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)负载于聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上修复喉软骨缺损的能力,并对其修复效果做出初步评估。方法用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测hCDMP1 mRNA和蛋白的表达;用免疫组织化学方法检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)以及糖胺聚糖(GAG)的表达;将转染前后的细胞支架培养体系移植入兔甲状软骨全层缺损处,从大体、组织学方面观察其对软骨缺损的修复作用。结果腺病毒感染方法可以将外源hCDMP1基因成功转入BMSCs,并使其获得稳定表达;和对照组比较,转染hCDMP1基因的BMSCs分泌ColⅡ、GAG等软骨特异性基质的能力增强,有促进软骨分化趋势;转染细胞支架复合物可更加有效地修复喉软骨缺损。结论转染hCDMP1基因的BMSCs/PLGA三维生物支架复合物移植动物体内可修复喉软骨缺损。; 崔颖王月田姚梅胡晶李俊霞王宇张本; 关键词：软骨组织工程腺病毒转染

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