王月田
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 不同来源骨髓间充质干细胞的体内成软骨被引量：2
- 2011年
- 背景:骨髓间充质干细胞经体外诱导后可修复软骨缺损,但目前采用的种子细胞多来源于自体或同种异体。目的:观察同种异体及异种来源的骨髓间充质干细胞诱导成软骨后修复喉软骨缺损的效果。方法:分别取人胚胎骨髓间充质干细胞和刚出生兔骨髓间充质干细胞的第3代细胞种植于聚乳酸-羟基乙酸共聚物生物支架上,并加入转化生长因子β1和软骨形态发生蛋白诱导成软骨细胞。将两种细胞体系植入新西兰白兔体内,并于植入后4,8周取材行大体、组织学观察。结果与结论:植入后4,8周人胚胎骨髓间充质干细胞和兔骨髓间充质干细胞均有新生组织填充,经组织学观察大部分为软骨细胞,分泌软骨细胞基质糖胺聚糖和Ⅱ型胶原,且两种细胞支架复合物所生成的软骨细胞数大致相同,并无明显的免疫排斥反应。提示异种来源的骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-羟基乙酸共聚物在转化生长因子β1和软骨形态发生蛋白联合诱导下所得的组织工程化软骨,与同种来源的骨髓间充质干细胞所获得的组织工程化软骨修复喉软骨缺损具有可比性。
- 潘欣宇崔颖马林祥王月田远洋王雪峰
- 关键词：骨髓间充质干细胞异种同种异体聚乳酸-羟基乙酸共聚物软骨组织工程
- 重组hCDMP1腺病毒转染骨髓间充质干细胞对其向软骨分化的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨人软骨源性形态发生蛋白1(CDMP1)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用腺病毒转染方法将重组人CDMP1(hCDMP1)基因转入体外培养的兔BMSCs,用免疫印迹法(Western blot)检测hCDMP1蛋白质的表达,并通过检测细胞增殖能力(MTT法)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)以及蛋白多糖的表达,分析转染hCDMP1对BMsCs增殖、分化的影响。结果 hCDMP1蛋白在基因转染细胞内得到正确表达;hCDMP1基因转染组和对照组相比,ColⅡ、蛋白多糖表达水平显著增高(P<0.05),而细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论外源基因转染可以使BMSCs表达有生物活性的hC-DMP1,高表达的hCDMP1可以促进BMSCs向软骨表型分化,但对细胞增殖无明显影响。
- 王月田崔颖潘欣宇姚梅张本李谌
- 关键词：骨形态发生蛋白质类骨髓间质干细胞转染
- 骨髓间充质干细胞的研究进展及临床应用前景被引量：7
- 2011年
- 骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓中的基质干细胞,具有BMSCs取材容易,对机体损伤小,易于操作,具有多向分化潜能等优点,被认为是组织工程理想的种子细胞。随着组织细胞工程技术和基因工程的发展,BMSCs必将在组织工程、细胞因子替代治疗、基因治疗中以及再生医学等方面成为研究热点。本文将对BMSCs的培养,鉴定,生物学特征,在临床中的应用等几方面的最新进展做一综合性的阐述。
- 潘欣宇崔颖马林祥王月田远洋
- 关键词：骨髓间充质干细胞生物学特征
- 软骨源性形态发生蛋白1转基因细胞片的初步探讨
- 2014年
- 目的探讨软骨源性形态发生蛋白1（cartilage．derivedmorphogeneticprotein1，CDMPl）转基因细胞片的构建及其活性鉴定。方法取1月龄新西兰白兔骨髓分离培养BMSCs，取第3～6代细胞进行实验。实验分为3组，A组：腺病毒（adenovirus，Ad）．巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-人CDMP1（humanCDMPl，hCDMP1）-内部核糖体进入位点（internalribosomeentrysite，IRES）．增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）转染BMSCs，B组：Ad-CMV-EGFP（空载体腺病毒）转染BMSCs，C组：未转染的BMSCs。倒置荧光显微镜观察3组细胞荧光表达情况，MTT法检测3组细胞增殖活力。将3组处于对数生长期的细胞接种于温度敏感性6孔板获得细胞片，行形态学及HE染色观察，RT-PCR及Westemblot检测3组细胞片hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白表达，阿利新蓝染色检测糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）表达。结果倒置荧光显微镜下观察示转染细胞在72h表达明亮荧光，转染效率达90％；MTT法检测示，3组细胞生长曲线基本呈S形，培养1～9d吸光度（A）值比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。通过温度敏感性6孔板体外可成功收获完整的三维立体细胞片结构，RT-PCR及Westemblot检测示，A组细胞片中hCDMP1和II型胶原mRNA及蛋白均呈阳性表达，B、C组均为阴性。HE染色和阿利新蓝染色示，A组纤维组织丰富，细胞外基质较多，蓝色异染颗粒多；B、C组细胞外基质相对较少，无明显特异性蓝染颗粒；A组GAG阳性染色面积明显低于B、C组，灰度值明显高于B、C组（P〈0．05）。结论hCDMPl基因转染的BMSCs细胞片能表达II型胶原和GAG，具有成软骨活性，其克服了传统组织工程中细胞利用率低、支架异质性等缺点，有望构建出致密的组织工程软骨，为软骨组织工程进一步发展提供了新思路。
- 姚梅崔颖王月田张本付文举
- 关键词：软骨组织工程BMSCS
- 以转染CDMP1基因的BMSCs修复软骨缺损被引量：2
- 2013年
- 目的探讨CDMP1基因转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)负载于聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上修复喉软骨缺损的能力,并对其修复效果做出初步评估。方法用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测hCDMP1 mRNA和蛋白的表达;用免疫组织化学方法检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)以及糖胺聚糖(GAG)的表达;将转染前后的细胞支架培养体系移植入兔甲状软骨全层缺损处,从大体、组织学方面观察其对软骨缺损的修复作用。结果腺病毒感染方法可以将外源hCDMP1基因成功转入BMSCs,并使其获得稳定表达;和对照组比较,转染hCDMP1基因的BMSCs分泌ColⅡ、GAG等软骨特异性基质的能力增强,有促进软骨分化趋势;转染细胞支架复合物可更加有效地修复喉软骨缺损。结论转染hCDMP1基因的BMSCs/PLGA三维生物支架复合物移植动物体内可修复喉软骨缺损。
- 崔颖王月田姚梅胡晶李俊霞王宇张本
- 关键词：软骨组织工程腺病毒转染
