宋军
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 传染性法氏囊病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 建立以传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白为诊断抗原的传染性法氏囊病(IBD)血清学检测方法,研究了VP2蛋白的编码基因,并在原核表达系统中表达了VP2蛋白。用表达的VP2蛋白建立了IBDV间接ELISA检测方法。抗原最佳包被量为每孔174.67 ng,血清最佳稀释度为1:40。对采自安徽部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%。结果证实,间接ELISA法用于IBD血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用。
- 宋军黄成斌单雪芹潘玲
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白间接ELISA抗体检测
- 流产布氏杆菌rfbD基因缺失株的构建及其生物学特性被引量：2
- 2013年
- 为了研究流产布氏杆菌rfbD基因缺失株的生物学特性和毒性变化,采用同源重组的方法构建该缺失株。以pDS132质粒为模板扩增sacB片段,通过NdeⅠ酶切位点,用T4连接酶将sacB片段与pUC19质粒连接,获得自杀质粒SacB-pUC19;用重组PCR方法扩增rfbD ORF内缺失668bp的缺失突变核,通过PstⅠ、SmaⅠ酶切位点,用T4连接酶将ΔrfbD缺失突变核与自杀质粒SacB-pUC19连接,获得突变载体SacB-pUC19-ΔrfbD;将SacB-pUC19-ΔrfbD电转化至流产布氏杆菌S2308感受态细胞中,运用sacB反向筛选构建流产布氏杆菌S2308 rfbD无痕突变株,并分析其在巨噬细胞RAW264.7和BALB/c小鼠体内的存活能力。结果显示,成功构建了流产布氏杆菌S2308 rfbD基因缺失株,该突变株在巨噬细胞和小鼠体内毒力减弱,存活能力下降,证明rfbD基因是流产布氏杆菌的毒力相关基因。
- 张敏韩先干田明星单雪芹宋军丁铲刘宗平于圣青
- 关键词：布氏杆菌
- 间接ELISA检测抗传染性法氏囊病病毒抗体方法的建立被引量：2
- 2011年
- 采用原核表达的传染性法氏囊病毒(IBDV)核衣壳蛋白VP2作为诊断抗原,建立检测IBD血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔174.67ng,待检血清最佳稀释度为1∶40,待检血清样品的D492nm≥0.43Dpos+0.57Dneg判为阳性,反之判为阴性。对采自安徽省部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%。结果证实,间接ELISA法用于IBDV血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用。
- 宋军黄成斌潘玲
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白间接ELISA抗体检测
- 布氏杆菌外膜蛋白D15的克隆表达及生物学活性分析
- 本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21（DE3）后,在IPTG诱导下表达大小约为130Ku的融...
- 孙晓庆韩先干童永亮宋军丁铲胡青海于圣青
- 关键词：外膜蛋白生物学特性
- 文献传递
- 信号分子AI-2对禽致病性大肠杆菌的调控作用被引量：6
- 2012年
- 【目的】研究信号分子AI-2对禽致病性大肠杆菌(APEC)的调控作用。【方法】采用改良结晶紫半定量法和荧光染色法检测AI-2对APEC生物被膜形成能力的影响。Real-time PCR检测AI-2对APEC毒力基因转录水平的影响。活菌计数法观察AI-2对APEC黏附和入侵鸡胚成纤维细胞DF-1的影响。【结果】AI-2在浓度为0.185 mmol.L-1时,生物被膜形成能力显著增强,而浓度为0.037mmol.L-1和0.285mmol.L-1时,生物被膜形成能力无显著变化。Real-time PCR结果显示加入AI-2后,APEC毒力基因pfs,vat,luxS,tsh,fuyA,iucD转录水平显著下调,ompA和iss则上调。加入AI-2后,APEC对DF-1细胞的黏附和入侵能力分别下降到原来的57.35%和36.64%。【结论】AI-2对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成具有浓度依赖性,在适宜浓度下能显著增强。AI-2能减弱禽致病性大肠杆菌毒力基因的转录水平和对DF-1的黏附和入侵能力。表明AI-2参与调控APEC致病性。
- 白灏韩先干刘蕾单雪芹宋军刘瑞董洪亮刘海文丁铲于圣青
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜毒力基因入侵
- 信号分子AI-2对禽致病性大肠杆菌的调控作用
- 研究信号分子AI-2对禽致病性大肠杆菌(APEC)的调控作用.采用改良结晶紫半定量法和荧光染色法检测AI-2对APEC生物被膜形成能力的影响[1,2,3].Real-time PCR检测AI-2对APEC毒力基因转录水平...
- 白灏于圣青韩先干刘蕾单雪芹宋军刘瑞董洪亮刘海文丁铲
- 布鲁氏菌延胡索酸水合酶与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原的结合活性被引量：1
- 2013年
- 依据牛型布鲁氏菌(Brucella abortus)延胡索酸水合酶(fumarate hydratase classⅠ,Fumhy)基因序列设计1对特异性引物,以牛型布鲁氏菌A19株基因组为模板,通过PCR扩增Fumhy基因的开放阅读框,连接到pMD18-T Simple载体上后进行序列测定和分析;将Fumhy定向克隆到表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET28a-Fumhy,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下,进行Fumhy蛋白的表达,对表达的Fumhy蛋白进行免疫原性、与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原结合活性检测,研究Fumhy蛋白的免疫原性及相关的生物学活性。测序结果表明,Fumhy基因全长1 620bp,编码539个氨基酸;成功获得带有His标签的Fumhy重组蛋白His-Fumhy,大小为59ku,与预期结果相符合。Western-blot检测结果表明Fumhy蛋白具有免疫原性,且具有与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原结合活性。由此推测Fumhy蛋白可能参与布鲁氏菌在体内的感染过程。
- 宋军单雪芹韩先干刘佩红孙晓庆潘玲丁铲于圣青
- 关键词：布鲁氏菌蛋白表达纤连蛋白结合活性
- 布鲁氏菌部分体内感染因子免疫保护的研究
- 布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的慢性传染病,是目前世界上流行最广、危害最大的人畜共患病之一,在我国被列为法定二类传染病。布鲁氏菌病严重威胁着人、畜健康。减毒活疫苗是当前应用最广泛...
- 宋军
- 关键词：布鲁氏菌免疫保护胞内寄生毒力因子
- 文献传递
- 布鲁氏菌外膜蛋白D15的表达及生物学活性分析
- 2014年
- 为研究布鲁氏菌D15蛋白的生物学特性,本实验通过PCR技术扩增牛型布鲁氏菌外膜蛋白基因D15,并克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold-D15,原核表达了约为130 ku的His标记重组蛋白His-D15。Western blot结果显示:D15能够与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应;并且具有纤连蛋白溶酶原结合活性,但不具有纤连蛋白结合活性。本研究为进一步研究D15蛋白在牛型布鲁氏菌感染、检测及亚单位疫苗的研制等方面的作用奠定基础。
- 孙晓庆韩先干宋军童永亮单雪芹丁铲胡青海于圣青
- 关键词：外膜蛋白生物学特性
- 实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用被引量：3
- 2013年
- 目的建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法。方法依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法。结果用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平。最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性。结论成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法。
- 单雪芹韩先干张敏宋军刘海文田明星潘玲丁铲周锦萍于圣青
- 关键词：TH1TH2型细胞因子布鲁氏菌
