尹伟
- 作品数：69 被引量：80H指数：5
- 供职机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省青年科技研究基金山西省高等学校科技创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 基于溃疡性结肠炎模型探讨锦灯笼提取物的抗炎及抗氧化作用
- 2023年
- 【目的】探讨锦灯笼提取物对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。【方法】将108只SPF级雄性昆明小鼠随机分为6组:空白对照组(CON)、模型对照组(DSS)、阳性对照组(SET)、锦灯笼提取物低(EPCF-L)、中(EPCF-M)、高剂量组(EPCF-H),每组18只。试验开始后,除CON组外的其余小鼠自由饮用3.0%DSS溶液,CON组小鼠正常饮水,不做任何特殊处理;从第8天起,SET组小鼠灌胃给予柳氮磺吡啶(100 mg/kg),EPCF-L、EPCF-M和EPCF-H组小鼠分别灌胃给予锦灯笼提取物0.25、0.5、1 g/kg,CON和DSS组小鼠以相同的方式给予蒸馏水,每日1次,每只0.2 mL,连续7 d。试验期间每日逐只称量小鼠体重,观察小鼠粪便情况,计算小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)及组织病理学变化,测定小鼠结肠组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1βmRNA表达水平。【结果】与CON组相比,DSS组小鼠体重下降明显,粪便不成型甚至出现血便,DAI评分和CMDI评分显著升高(P<0.05),结肠组织可见大量炎性细胞,肠黏膜结构被破坏,SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低(P<0.05),IL-6和IL-1β基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05),表明小鼠溃疡性结肠炎模型建立成功。与DSS组相比,结肠组织中炎性细胞浸润、黏膜充血和出血等情况减少,SET、EPCF-M、EPCF-H组的DAI和CMDI评分显著降低(P<0.05),SOD、CAT、GSH-Px活性显著升高(P<0.05),IL-6和IL-1β基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】锦灯笼提取物对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用,其可能途径是提高机体的抗氧化功能及减少炎性因子的产生。
- 牛叶雨沈琪白勇孙盼盼孙娜尹伟范阔海李宏全孙耀贵
- 关键词：葡聚糖硫酸钠溃疡性结肠炎
- 《兽医外科学》课程建设与教学改革
- 《兽医外科学》是高等农业院校动物医学专业的必修课,在培养学生综合临床技能中具有十分重要的地位和作用。《兽医外科学》课程教学体系与新时代背景下一流课程建设的要求存在差距,在农科教学改革的进程中,探索《兽医外科学》课程建设与...
- 尹伟孙娜李宏全
- 关键词：兽医外科学课程建设教学模式
- 猪红细胞CR1-like-ML片段抗血清制备
- 2018年
- 当前对于猪红细胞免疫理论的相关机制还不明确,其中最为重要的原因就是检测指标单一且获得的样本数据较为有限。通过对猪红细胞CR1-like-ML 片段抗血清制备展开探讨,利用兔免疫法成功制备了CR1-like膜结合肽段的抗血清,为猪CR1-like膜结合肽段特异性抗体的制备奠定分子生物学基础。
- 侯震尹伟王春贾瑞璞张琪琪孙雨晨李宏全
- 关键词：猪红细胞血清制备免疫机制
- 基于网络药理学和分子对接分析野黄芩苷抗卵泡闭锁的作用机制被引量：1
- 2023年
- 【目的】基于网络药理学和分子对接方法探讨野黄芩苷抗卵泡闭锁的作用机制,以筛选野黄芩苷抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)致颗粒细胞损伤的作用途径。【方法】利用PharmMapper、TCMSP、SymMap和GeneCards数据库获得野黄芩苷发挥抗卵泡闭锁作用的靶点,使用Cytoscape v 3.7.2软件构建靶蛋白互作网络关系图并筛选关键靶点;利用DAVID数据库对靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析,构建药物-靶点-通路网络图;使用AutoDock Tools 1.5.6软件进行分子对接验证。【结果】共获得34个交集靶点,筛选得到胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)、丝裂原活化激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(G1/S-specific cyclin-D1,CCND1)、纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、半胱天冬酶-3(caspase-3,CASP3)、神经源性基因位点切口同源物蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,NOTCH1)和白细胞介素6(interleukin 6,IL6)共9个核心靶点。GO功能富集分析得到基因表达调控、细胞增殖正调控、凋亡过程负调控等264个生物过程条目;线粒体、内质网、细胞质等25个细胞组分条目;生长因子活性、蛋白质结合、细胞外基质结构组成等23个分子功能条目。KEGG通路富集分析得到癌症通路、IL17信号通路、PI3K-Akt信号通路等115条相关通路。分子对接验证结果显示,野黄芩苷与9个核心靶点蛋白的结合能均<0 kJ/mol,说明蛋白可与野黄芩苷自发结合。【结论】野黄芩苷可能通过多靶点、多通路来治疗卵泡闭锁,本研究结果可为阐明野黄芩苷抗ZEA致颗粒细胞损伤的作用机制提供思路。
- 张新越孙娜孙盼盼张华范阔海尹伟孙耀贵李宏全
- 关键词：网络药理学分子对接野黄芩苷
- 一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法
- 本发明公开了一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法，该系统包括：流动小室、垫圈、流动相储液瓶、蠕动泵、硅胶软管以及设置有载玻片的细胞培养皿，所述垫圈垫于所述载玻片边缘上，所述流动小室盖于垫圈上；再以硅胶软管将流...
- 尹伟侯震范阔海孙娜孙盼盼孙耀贵李宏全
- 体外筛选促蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞增殖的中药单体
- 2020年
- 本试验通过筛选能够促进蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞增殖的中药单体,以便进一步研究中药对蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞发育的影响。试验选取200日龄的海兰褐蛋鸡,分离培养小黄卵泡颗粒细胞。细胞生长48 h后,进行传代,同时加入各中药单体处理24 h。MTT法检测各中药单体在颗粒细胞上的安全浓度,qRT-PCR检测各中药单体对颗粒细胞PCNA mRNA的影响,流式细胞术检测各中药单体对颗粒细胞增殖的影响。结果显示,与对照组相比,各中药单体处理颗粒细胞24 h后,均可显著增加颗粒细胞PCNA mRNA的相对表达量,盐酸益母草碱可显著增加颗粒细胞的增殖细胞百分比。分析得出15μg/mL盐酸益母草碱可显著促进蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞的增殖。
- 侯雅鑫张宇瞳孙娜孙盼盼孙耀贵范阔海尹伟李宏全
- 关键词：体外筛选中药单体颗粒细胞
- 猪ECR1-Like免疫黏附功能对PAMs捕获GFP-E.coli的影响
- 2023年
- 【目的】探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体(erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like)免疫黏附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)捕获致敏基因工程菌(GFP-Escherichia coli,GFP-E.coli),以期阐释猪红细胞免疫的分子机理及红细胞免疫在机体先天免疫中的作用。【方法】利用流式细胞术、菌落平板计数及RT-PCR技术检测PAMs捕获的GFP-E.coli的水平,分析猪ECR1-like免疫黏附对PAMs捕获GFP-E.coli的影响;运用流式细胞术、细胞免疫荧光化学技术检测猪ECR1-like免疫黏附的致敏GFP-E.coli被PAMs移除后,猪红细胞免疫黏附功能的变化及猪ECR1-like数量的变化。【结果】流式细胞术检测发现猪红细胞黏附组较空白对照组中的PAMs平均荧光强度显著提高(P<0.001),且PAMs阳性细胞率也显著提高(P<0.05);菌落涂板计数发现红细胞黏附组较空白对照组PAMs捕获GFP-E.coli情况显著增强(P<0.05);RT-PCR检测发现,红细胞黏附组PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著高于空白对照组(P<0.01);进一步阻断猪红细胞表面的CR1-like,流式细胞术检测发现PAMs平均荧光强度降低至256301.56±9208.85(P<0.001),PAMs阳性细胞率降低至(88.32±0.92)%(P>0.05),菌落平板计数发现PAMs捕获GFP-E.coli情况减弱为(136666±8818)CFU/mL(P<0.05),RT-PCR检测发现PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著减少(P<0.01);利用细胞流动循环互作技术发现:猪红细胞免疫黏附致敏GFP-E.coli的平均荧光强度由循环前2892.18±47.76降至2407.43±141.78(P<0.05),阳性细胞率由循环前(20.58±0.36)%降至(17.39±0.23)%(P<0.001),黏附水平显著低于循环前,与此同时,间接免疫荧光试验结果显示:试验组循环后猪ECR1-like平均荧光强度由循环前344.33±37.92降低至291.56±11.99(P<0.05),阳性细胞率由(30.20±1.24)%减少至(28.27±0.64)%(P<0.05)。【结论】猪ECR1-like通过免疫黏附功能促进了PAMs对致敏GFP-E.coli的捕获。PAMs移除猪红细胞�
- 张峥凌小雅范阔海孙娜孙盼盼孙耀贵李宏全尹伟
- 关键词：猪肺泡巨噬细胞免疫黏附
- 猪源多肽类抗生素PR-39真核表达及体外活性研究被引量：1
- 2012年
- PR-39通过非穿孔形式抑制DNA和蛋白质的合成,从而对革兰氏阴性菌和阳性菌具有抗菌活性。此外,在伤口修复、炎症、缺血再灌注损伤以及诱导血管生成等方面也发挥着重要的生物学功能,因此开发PR-39具有重大的意义。用人工合成的PR-39基因为模板,通过PCR扩增获得PR-39片段,将其克隆到载体pHIL-S1构建重组质粒pHIL-S1-PR-39,并电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,用MD和MM平板筛选重组子,经甲醇诱导其表达后,Tricine-SDS-PAGE分析表达蛋白,通过琼脂扩散试验检测PR-39的抑菌活性。通过MD和MM平板筛选出Mut+的转化子,甲醇诱导表达产物经Tricine-SDS-PAGE得到大约4kD的重组蛋白,并能够抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长。本研究获得了能高效稳定表达具有生物学活性的重组PR-39的基因工程菌,为抗菌肽工业化生产奠定了实验基础。
- 范阔海姜俊兵于秀菊尹伟李宏全
- 关键词：密码子优化毕赤酵母抗菌活性
- 猪β-防御素1在毕赤酵母中的串联表达被引量：2
- 2020年
- 猪β-防御素1(pBD1)是在猪体内广泛分布的一种抗菌肽,在猪的先天免疫系统中发挥重要的作用。本试验为实现pBD1在巴斯德毕赤酵母中的高效表达,根据pBD1基因的成熟肽序列和巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性,设计合成pBD1三倍串联体(3pBD1)基因序列,将合成的目的基因克隆到表达载体pHLI-S1中,构建重组表达载体pHLI-S1-3pBD1,线性化后的pHLI-S1-3pBD1电转化至毕赤酵母宿主菌GS115,PCR鉴定阳性转化子,MM平板和MD平板鉴定Mut表型。将鉴定为阳性的Mut+型重组酵母菌株进行甲醇诱导表达,SDS-PAGE分析表达上清液。结果显示,获得的重组酵母菌株为Mut+表型,经甲醇诱导表达后,表达上清液中含有分子量为22 kDa的目的蛋白。结果表明,获得了能够表达3pBD1的重组巴斯德毕赤酵母。
- 王鑫范阔海尹伟孙娜孙耀贵李宏全
- 关键词：毕赤酵母
- 猪Ⅰ型补体受体与C3b活性片段相互结合的体外检测被引量：2
- 2021年
- 【目的】检测猪红细胞类补体受体Ⅰ型(Complement receptor 1-like,CR1-like)与C3b活性片段能否发生结合,以期为阐明猪红细胞发挥免疫粘附功能的分子机理提供科学数据。【方法】利用前期已构建的CR1-like_(3-6)、CR1-like_(8-11)功能域片段的重组质粒建立酵母双杂交检测体系,运用酵母共转化的方法将诱饵质粒(重组pGBKT7-CR1-like)与捕获质粒(重组pGADT7-C3b)共同转入Y2HGold酵母细胞中,分别利用一缺平板SD/-Leu、SD/-Trp和二缺平板SD/-Leu/-Trp(DD0)严格筛选共转化成功的酵母细胞,再根据报告因子是否表达来鉴别转化子在SD/-Leu/-Trp/X-α-Ga1 (DDO/X)、SD/-Leu/-Trp/X-α-Ga1/Aba (DDO/X/A)二缺培养板上的生长情况,并结合菌落的颜色变化现象综合判定CR1-like活性片段与补体C3b在酵母细胞中是否发生相互结合;然后运用免疫沉淀技术分离酵母细胞中CR1-like与C3b结合复合物,并对该复合物的特异性进行Western blot鉴定。【结果】试验成功将pGBKT7-CR1-like与pGADT7-C3b基因共转入Y2HGold酵母细胞。共转化的酵母克隆在SD/-Leu、SD/-Trp、DDO平板上能够正常生长,在DDO/X、DDO/X/A平板上正常生长且菌落呈现蓝色,由此表明,试验中酵母双杂交系统建立成功,并通过试验获得了阳性酵母克隆。共同转化了 pGBKT7-CR1-like和pGADT7-C3b质粒的酵母菌落PCR反向鉴定结果显示,在共转化的酵母菌中含有目的基因CR1-like_(3-6)和CR1-like_(8-11),共转化组的质粒酶切后出现C3b基因片段,与设计大小一致,说明重组质粒成功共转化入酵母细胞中。免疫沉淀试验中应用pGBKT7载体的标签抗体c-Myc沉淀酵母细胞中的融合蛋白,以c-Myc为一抗进行Western blot检测发现,单独转化了pGBKT7-CR1-like_(3-6)和pGBKT7-CR1-like_(8-11)的融合蛋白在 50 kD 处出现特异性条带;共转化 pGBKT7-CR1-like_(3-6)+pGADT7-C3b和共转化pGBKT7-CR1-like(8-11)+pGADT7-C3b的酵母融合蛋白在83kD处出现特异性条带;以HA单克
- 孙雨晨贾瑞璞范阔海孙娜孙耀贵孙盼盼李宏全尹伟
- 关键词：C3B免疫粘附
